🐶 干细胞微球形成实验（干细胞克隆形成实验）
- 作者: 马晨希
- 来源: 投稿
- 2025-08-27
1、干 🐠 细胞微球形成实验
干细胞微球 🌼 形 🐅 成 🐧 实验
目的：评估干 ☘ 细胞自我更新和分 🌾 化能力。
研究干细胞在特定培养条 🐳 件下的行为。
材料：干细胞培养 🐼 物
无血清 🐘 培养基（例 🐈 如，StemPro? 或 mTeSR?）
聚 🐞 乙烯二醇 🪴 （PEG）或甲基纤维素溶液 🐳
6 孔或孔 96 培 🌲 养板
显微镜程序：
1. 制备 🌲 细胞悬液：将干细胞培养物收集并用无血清培养基洗涤将细胞悬。浮在无血清培养基中，密度为 10,00020,000 个细胞/毫。升
2. 制备微球培养：在培养板的每 🐝 个孔中加入 100250 μl PEG 或甲基纤维素溶液。然后 🌴 将个 10,00025,000 细。胞添加到每个孔中
3. 培养：将 ☘ 培养板置于 37°C、5% CO? 的培养 🦁 箱中。通常培养 514 天 🕊 。
4. 观察和计数：使用显微镜观察培养物。将微球计数为 🐎 包含至少 50 个。细胞的培养物
评价：微球形成效率：计算微球形成效率，即微球形成的细胞百分 🐳 比。
微球大小：测量微球 🦅 直径，以评估干细 🐅 胞分化能力。
微球形态：观察微球的形态，例如圆形、不规则形 🕷 或管状形。
培 🌳 养条 🌾 件的优 🐶 化：
培养条件可以根据干细胞类型和研究目标进行优化。例如以，下变量可以影响微 🍀 球形成：
聚乙 🐕 烯二 🦢 醇或甲基纤维素的浓 🐵 度
生长因子的添 🐬 加 🌳
培 🦄 养 🌺 时 🐘 间
应用：干细 🐧 胞微 🐱 球形成实验 🐅 用于：
表 🐋 征 🦆 干细 💐 胞系
研究干细 🐈 胞干性或 🌹 多能 🍁 性
优化干 🐶 细 🐕 胞培养 🌸 条件
筛选干细胞分化诱 🦉 导 🌾 因子
2、干细胞 🐕 克隆形成实 🐟 验
干细胞克隆形成实 🐦 验
目的：评估干细胞在培养条件下自我更新和分化的 🦊 能 🌵 力。
材料：培 🐘 养 🐘 基 🦆 和血清
贴壁 🌷 培养板 🌸
干细 🌺 胞悬液 🕸
培 🐳 养箱（37°C，5% CO2）
克隆形成单位（CFU）检 🐼 测试剂盒
步骤：1. 制备 🐦 干细胞 🕸 悬 🐧 液：
从 🌷 培养 🐬 皿 🌷 中收集干细胞。
离心并重悬于培养基 🦆 中 🌻 。
计 🐞 数细胞 🌳 并调整浓度。
2. 播种 🐺 细胞：
将一定数量的细胞悬液播种 🕸 到贴壁培养板中。
每孔中播种的细胞 🐡 数量取决于所使用的CFU试剂盒的说明。
3. 培养 🐈 细 🐦 胞：
将培养板置于培养箱 🐟 中。
根据CFU试剂盒的说明，培养细胞 🌾 。
4. 染色 🌿 和 🐺 计数：
使 🐕 用CFU试剂盒中 🐼 的染色试剂染色细胞。
在显微镜下计数克隆，每 🐺 个克隆代表一个CFU。
5. 计算CFU频 🦁 率：
将每个孔 🦊 中CFU的 🐡 数量相加并除以播种的细胞总数。
CFU频率 🐺 = CFU数量 / 播种的细胞数量
结 🌴 果 🐧 解 🐒 释：
高CFU频 🐳 率：表 🦈 明干细胞具有很强的自我更 🐯 新和分化能力。
低CFU频率：表明干 🐴 细胞的自我更新或分化能力较弱。
无CFU：表明干细胞已丧失自我更 🕸 新或分化能力。
应用：评 🦋 估干 🪴 细胞系的质量
研究 🌺 干 🐒 细胞的自我更新和分 🦄 化机制
了解干细胞在组织修复和再生 🐞 中的作用
