提取大鼠神经干细胞（神经干细胞从哪里 🐼 提取）
- 作者: 胡嘉倪
- 来源: 投稿
- 2025-07-27
1、提取大 🐬 鼠 🕊 神经干细胞
材料：雄性或雌性大 🐺 鼠 🐘 （150200 克）
70% 乙 🐋 醇
氯化钠磷酸 ☘ 盐缓冲液 (PBS，pH 7.4)
无血 🐵 清神经元培养基 🌵 （如 N2B27）
0.05% 胰蛋 🌳 白酶EDTA
神 🦊 经干 🐠 细胞培养基（见下文）
6 孔培养 🌿 板或培 🐞 养瓶 🌾
培 🐬 养 🌳 箱 🐺 （37°C，5% CO2）
显微镜细胞计数 🦢 器
离心机神经干细 🦟 胞培养基 🪴 ：
DMEM/F12 培养 🌲 基
B27 补充剂 🐵
神经生 🐳 长 🐈 因 🐡 子 (NGF)
表 🍁 皮 🌴 生 🦟 长因子 (EGF)
纤 🐕 维蛋白 🪴
步骤：1. 大鼠麻 🌾 醉 🌳
将大 🐳 鼠腹腔注射 0.1 mL/100 g 体重戊巴比妥钠或异氟烷麻醉。
2. 组织解剖 🦟
沿中线切开头部皮 🕷 肤 🦢 ，暴露颅 🌻 骨。
用无菌剪刀剪开 💮 颅骨，暴露大脑。
小心剥 🦉 离大脑皮 🐒 层小心，不要 🐱 损坏下层的组织。
3. 组 🐴 织 🐴 解 🦟 离
将分离的大脑皮层组织放入含 0.05% 胰蛋白 🍀 酶的EDTA 中 PBS 。
在 🍀 37°C 孵育 30 分钟，每分钟 10 轻轻震荡 🐺 。
用移液管吸取并吹打组织以进 🌳 一步解离。
4. 细 🐟 胞过滤和收集
通过 40 微米细 🐦 胞过滤器过 🌺 滤解离的细胞悬液。
用无血清神经元培养基冲洗过 🕷 滤器，以去除任何残留的胰蛋白酶。
将滤过 🌷 的细 🌺 胞 🦈 悬液转移到离心管中。
5. 离心 🦈 和 🕸 重悬 🌷
以 300 x g 离心悬浮 🐬 液 5 分 🌾 钟。
吸出上清液，用神经干细胞培养基 🌼 重悬 🕷 细胞。
6. 细胞接 🐱 种
将细胞 🐈 接种到涂 🌲 有纤维蛋白的 6 孔培养 🐠 板或培养瓶中。
每孔或 🌳 培养瓶使用 12 x 10^6 细胞。
7. 培 🦉 养 🦅
将细胞培 🐼 养在 37°C、5% CO2 的培养箱 🐝 中 🐱 。
每 34 天更 🍀 换培养基一次。
8. 神 🐬 经 🦄 干细胞培养物的特征
在 710 天内 🌻 ，神 🕸 经干细胞应形成神经球。
神经干细胞可以分化成不同的神经元和神经胶 🌷 质细胞。
提示：使 🦋 用无菌技术以避免污染。
仔细控 🌷 制消化时间，以最大程度地减少细胞损 🦊 伤 🦊 。
使用培养基中的生长因子和添加剂来促进神经干 🍁 细 🦟 胞的增殖和分化。
定期监测细胞培养物 🌼 的生长和形态。
2、神经 🕷 干细胞从哪里提取
神经 💮 干细胞 🦁 的提取来源包括 🌷 ：
胚胎干细胞：从早期胚胎中提 🐕 取，具，有形成所有细胞类型的潜力包括神 🐋 经干细胞。
诱导多能干细胞（iPSCs）：通过将成年细胞重 🦢 新编程回具有胚胎干细胞样潜力的状态而 🍀 产生。
成人组织：神经干细胞存在于 ☘ 某些成体组织中，例如脑和脊髓。它。们可以通过手术或活检来提取
脐带血脐带血：中含有神经干细 🐼 胞，可以在脐带血 🐺 库中找 🍀 到。
羊水羊水：中含有神经干细胞，可 🐝 以在怀孕期间通过羊膜穿刺术提取。
3、神 🐅 经干细胞提取方法
神 🐵 经 🕸 干细胞提 🍀 取方法
1. 直接组织 🐟 取 🕷 样 🐠
活检：从患者的大 🐺 脑 🦆 或脊髓中手术切除一小块组织。
胚胎干细胞：从早期胚胎中分离出，具，有分 🌲 化成所有细胞类型的潜力包括神经干细胞。
2. 体外 🕷 培养
神经球培养：将神经组织解离成一个细胞悬液，然后在培养基中培养以形成神经球 🐟 神经球。包。含神经干细胞和其他神经前体细胞
多能诱导干细胞 (iPSC)：使用来自患者自身细胞的体细胞重编程技术，将其转换为具有类似胚胎 🐦 干细胞性质的多能干细胞。iPSC 可。以 🌴 分化为神经干细胞
3. 生 🐞 物 🍀 工程方法 🐱
基因 🦄 转导：将特定基因插入到 🐒 细胞中，使 🐡 其获得神经干细胞特性。
化学感应：使 🐧 用小分子或生长因子处 🦈 理细胞，誘 🐼 導它們分化为神经干细胞。
具体 🐛 方法选择取决 🐘 于以 🐺 下因素：
神经干 🦈 细胞的来源（胚 🐼 胎胎、儿或成人）
提取的数 🐠 量 🐺 和质量要求 🕊
侵入性程 🌻 度 💐 （例如，活 🦉 检）
伦 🌸 理 🐝 考虑
提取 🌷 方 🕊 法比较：
| 方法 | 优 | 点 🐅 |缺 ☘ 点 🌳
||||| 活 🐳 检 | 精确，提 | 供，高 |纯度的细胞具有侵入性可能会损害组织
| 胚胎干细胞 | 分 🌿 | 化潜力高伦理问题，免 |疫排斥风险
| 神经球培 🐧 养 🌵 | 无创，可 | 从，少 |量组织中获得大量细胞细胞混合需要额外的纯化步骤
| iPSC | 患者特异性，可 | 再 🐟 ，生 🦄 |昂贵分化 🐟 过程复杂
| 基因转导 🐘 | 可控，产 | 生 🦄 |高纯度的细胞可能存在基因整合风险
| 化学感应 🌸 | 无 🍀 需基因操作，相 | 对 |简单分化效率可 🦋 能较低
4、神经干细胞如何提 🐳 取
神经干细胞提 🌿 取方 🐧 法
1. 神 🐎 经组织 🍀 活检
从大脑、脊髓或外 🌹 周神经组织中获取组织样 🐋 本 🐴 。
组织样 ☘ 本被机械或酶解消 🦅 化成悬浮液。
神经干细胞与其他细胞分离，通常使用免疫磁 🐡 珠或流式细胞术。
2. 诱 🐛 导多能 🌿 干细 🦄 胞 (iPSC) 技术
从患者的成熟 🐵 细胞（如皮肤细胞或血液细胞）中重新编程，使其获 🐒 得多能性。
这些 iPSC 可以被分化为神 ☘ 经干 🐘 细胞。
3. 胚 🌹 胎干细胞 🐼 (ESC) 技术 🪴
从早期胚胎中 🦟 提 🌷 取的 🐒 细胞。
ESC 可以 🌷 分化 🐡 为神经干细胞。
4. 神 🦄 经球培养 🐅
从 🪴 神经组织 🐳 样本中培养神经营 💐 养球体。
神经球 🍁 含有神经干细胞和祖细胞。
神经干细胞可 🍁 以通过 🐝 免疫磁珠或流式细胞术从 🪴 神经球中分离。
提取 🐟 过程中使用的 🕷 技术包 🌴 括：
免疫磁珠：带 🐡 有靶向神经干细胞表面标志物的磁珠，使其与其他 🌳 细 🌻 胞分离。
流 🌾 式细胞术：利用 🐠 激光束和荧光标记物区分和分离不同细胞类型。
荧光激活细胞分选 (FACS)：流式细胞 🦆 术的 🌾 类型，允许收集特定标记的细胞。
抗体：靶向 🌸 神经干细胞表面标志物 🦋 的抗体，用于免疫磁珠 🐈 或流式细胞术。
注意 🦈 事 🌼 项：
神经干细胞的提 🐠 取可能因组织来源和方法而异。
提取过程需要高度专业化的设备和 🐯 技术。
提取的神经干细胞的质量和产量 🦅 可能会 🐞 因不同的技术和参 🐛 数而有差异。
