胚胎干细胞如何培养（胚胎干细 🐅 胞的获得有哪几种途 🌺 径）
- 作者: 朱梧漾
- 来源: 投稿
- 2025-10-07
1、胚胎干细胞 🐘 如何培 🌿 养
胚胎干 🐴 细 🦍 胞 🌸 培养
材料：人类 🐈 胚胎干 🐼 细胞 🌷 系
胚 🦈 胎干细胞培养基（含生长因子、抗生素）
组织培 🌷 养皿
无血清培养基（用 🍁 于诱导 🐈 分化）
胰酶EDTA（乙 🦍 二 🌵 胺四乙酸）
步骤：1. 培 🦋 养 🐬 皿制备：
将组 🦁 织培养皿用70%乙醇擦拭消毒。
使用无菌操 🐺 作，将，胚胎干细胞培养基加入培养皿中使其覆盖整个底面。
2. 细胞解 🌷 冻：
将冷冻的胚胎干细胞从液氮 🦅 中取出，迅速置 🐠 于37℃水浴中解冻。
解冻后，立，即用无菌移液 🌲 管吸取细胞悬液 🦈 转移到一个含培养基的离心管中。
3. 离心和重 🌻 悬：
将离心管在离心1000rpm分5钟，弃去上清 🌼 液。
用新鲜的胚胎干细胞培养基重悬细胞，小心避免 🦁 产生气泡 🐡 。
4. 接 🦈 种 🦅 ：
将细胞悬液接种到制备好的培养皿中，使细胞 🌴 均匀分布。
每平方厘米培养皿接种约12 × 10^5个 🐡 细胞 🐅 。
5. 培 🌷 养 🦢 ：
将培养皿 🐵 置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。
培养过程中定期 🌾 观察细胞生长情况，根据需要更换培养基。
6. 传 🌴 代：
当细胞 🌾 生长至80%90% confluent 时 🐧 ，即可 🍁 传代。
吸出培养基，用胰酶EDTA溶，液消化细 🌷 胞轻轻吹 🐱 打细胞以 🐈 使其脱离培养基质。
用无菌移液管 🦉 收集细胞悬液，并按照步骤34进行重 🐡 悬和接种。
7. 分 🐡 化：
要诱导胚胎干细胞分化成特定细胞类型，需要使用无血清培 🦊 养基和特定的生长因子或转录因子。
在无血 🍁 清培养基 🦈 中培养细 🐶 胞47天，观察分化情况。
注 🍀 意事 🐬 项 🐟 ：
所有操作应在无菌条 🐛 件下进行。
定期监测培 ☘ 养基以确 🕸 保其新鲜。
培养过程中应避免产生气 🐬 泡，因为这会影响细胞生长。
传代细胞时要小心避免损伤细 🐺 胞。
2、胚 🦆 胎干细胞的获得有哪几种途 🦅 径
胚胎干细胞 🌷 获得途径 🌺
1. 受 🌹 精卵 🦍 内细胞团法
从早期胚 🐦 胎（囊胚）中分离 🌺 出内细胞团，该内细胞团含有胚胎干细 🐞 胞。
2. 胚胎移植 🌹 法 🦢
将未分化胚胎植入异种宿主子宫，让胚胎，在宿主体内短暂发育然后从宿主胚胎中分离出胚胎干细胞 🌺 。
3. 体外 🐈 受 🌷 精 🐡 法
体外受精后，采，集早期胚胎分离出内细 🐶 胞团以获得胚胎干 🐦 细胞。
4. 单核细胞分化法 🕸
从早期胚泡中分离出单核 🌷 细胞，然后在特定培养条件下诱导这些细胞分化为胚胎干细胞。
5. 胚胎 🪴 外植法
从胚胎外围细胞中分离出外胚层细胞，然 🐼 后在特定培养条件下诱导这些细胞分化为胚胎干细胞。
6. 胚胎 🐼 核移植法
将 🌾 体细胞核移植到无核卵细胞中，然，后让卵细胞发育到囊胚阶段从 🕊 中分离出胚胎干细 🦢 胞。
3、胚胎干细胞培养有 🪴 什么意义 🦈
胚胎干细 🍀 胞培养的意 🐴 义
胚胎干细 🦆 胞 (ESC) 培养具有 🦅 广 🐯 泛的重要意义：
医 🌷 学研 🐠 究 🐴 ：
疾病建模：ESC 可用于创建特定 🌾 疾病的细胞模型，以研究疾病机制和开发治疗方法。
再生医学：ESC 具有分化成所有细胞类型的潜力，这使其成为再生受损组织和器 🍀 官的有前途的来源。
药物 🌷 筛选：ESC 可用于筛选候选药物的安全性、功效和毒性。
基础 🐅 生物 🐱 学：
发育研究：ESC 提供了一种研究早期发 🌻 育过 🌻 程的独特窗口 💮 ，包括细胞分化和组织形成。
干细胞生物学：ESC 培养使研究人 🐶 员能够了解干细胞的自我更新、增殖和分化机制。
产 🌷 业 🐶 应用：
细胞治疗：ESC 衍生的细胞可 🦅 用于治疗广泛的疾病，例如脊髓损伤、帕金森病和糖尿病。
组织工程：ESC 可用于生成生物 🦅 相容性材料用于，修复 🌾 或替换受损组 🦈 织。
药物开发：ESC 衍生的细 🐞 胞可用于开发新 🐱 的药物靶点和治疗策略。
其 🦋 他意义：
伦理学讨论：ESC 培养 🦉 引发了有关使用人类胚胎 🌼 进行科学研究的伦理问题。
社会影响：ESC 研究有潜力对医疗保健、工业和社会产 🍁 生重大影响。
科 🌻 学进步：ESC 培养是干细胞科学和再生医学领域持续进步的关键驱动力。
具体 🐴 示 🦅 例 💮 ：
ESC 已用于创建帕金森 🍁 病的细胞模型，帮助研究人员了解该疾病的发生过程。
ESC 衍生的心肌细胞已被用于修复因心 🐠 脏病发作而受损的心脏组织。
ESC 正在开 🐝 发用于 🌳 治疗 1 型糖尿病和脊髓损伤的新型细胞疗法。
4、胚胎 🐋 干细胞培养的注意 🐟 事项
胚胎干细胞培养的注 🐅 意事项
1. 无 🦅 菌条 🦆 件
使用无菌 🍁 操作技术进行所有培养步骤。
定期对 🐧 培养箱和工作台进行消毒 🐯 。
仅使用 🌿 无菌培 🪴 养 🐎 基和试剂。
2. 培 🍀 养 🦢 基 🐶
使用专 🦈 门配制的胚胎干细 🦍 胞培 🐯 养基，含有生长因子和营养素。
定期更 🦍 换培养基 🦋 以维持细胞的 🐶 生长环境。
监测 pH 和 osmolarity，并在 ☘ 必 🦍 要 🐼 时进行调整。
3. 培养环境 🦅
将细 🐛 胞置于 37°C、5% CO2 和 95% 湿度的培养箱 🐯 中。
确保培 🌿 养箱中的湿度 🌷 稳定，以防止细胞 🦟 蒸发。
4. 细 🌷 胞密 🕷 度
维持适当 🐧 的 🐯 细胞密度以促进生长和避免分化。
培养基的 🐼 更换频率和数量取决于细胞密度。
5. 传 🌷 代
定期传 🐱 代细 🐕 胞以维 🐟 持其活力和扩增。
使用胰蛋白酶或其他酶 🍁 性试剂 🦉 分离细胞。
将细胞以适 🐕 当 🐎 的比例传代到新的培养皿中 🐴 。
6. 分 🌻 化 🐼
胚胎干细胞具有分化为各 🕸 种细胞类型的潜力。
监测分 🦆 化标志物以确保保持未分化状态。
在必要 🐬 时使 🐼 用抑制分化的生长因子或化学物质。
7. 污 🐦 染监测 🌿
定期监 🐎 测污染物，如 🐼 细菌、真菌和支原体。
使 🌵 用抗生素或抗 🌿 真菌剂控制 🌼 污染。
如果出现污染，则需要丢弃 🐵 受污染的细胞。
8. 冻存和复苏 🦄
冻存多余的细胞 🦍 以 🌴 备将来的实 🕊 验。
使用专门设计的细胞冻存液和程 🐟 序 🦊 。
在需 🐟 要时，按 🐵 照既定的复 🐝 苏程序复苏冻存细胞。
其 🐡 他注意事 🌷 项 🐅
使用高品质 🐎 的试剂 🐺 和耗材。
接受适当 🐝 的培训和经验 🐼 丰 🌼 富的个人进行细胞培养。
遵循既定的实验室规程以确保一致性和 🦊 可重复性。
定期 🕊 记录培养 🐟 条 🌷 件和观察结果。
