肿瘤干细胞的培养鉴定（肿瘤干细胞的培养鉴定方法 🦈 ）
- 作者: 马芊桐
- 来源: 投稿
- 2025-09-20
1、肿瘤干 🌻 细 🦆 胞的培养鉴定
肿瘤干细胞的培 🐼 养鉴 🦄 定
培养从肿瘤组织或肿瘤细胞系中分离细胞：可通过机械 🐯 解离、酶消化或激光捕获微切 🐡 割等方法。
悬浮培养或贴壁培养：肿瘤干细胞通常培养 🦍 在无血清的培养基中，含有一定的生长因子和细胞因子。
Sphere培养：将肿瘤 💮 细胞接 🌲 种于低附着力的培养皿中肿瘤，干细胞可形成球形群体。
异 🐺 种移植：将肿瘤细胞注 🐝 射到免疫缺陷小 🐘 鼠体内，形成肿瘤后收集肿瘤组织进行分析。
鉴定表面标记
CD133+、CD44+、CD24：这些表面标记常用于鉴定肿瘤干细 🦈 胞 🦟 。
其他表 🦊 面标记：根据特定肿瘤类型，可，使用其他表面标记如ALDH1、EpCAM、CD90。
功能性 🐺 检测 🌲
自我更新能力：肿瘤干细胞能够无限增殖 🐱 并维 💮 持其干细胞特性。
分化能力：肿瘤干细 🐡 胞能 🌳 够分化为肿瘤中不同的细胞类型。
肿瘤 🦅 形成能力肿瘤：干细胞在异种移植模型中具 🦄 有形成肿瘤的能 🦊 力。
其 🐳 他鉴定 🐒 方 🦈 法
侧群细胞分选：基于细胞释放的Hoechst 33342染料的差异性 🐟 ，可分选，出侧群细胞其中富含肿瘤 🐛 干细胞。
基因表达分析 🐺 ：肿瘤干细胞通常表达特定的基因，如Oct4、Nanog、Sox2等。
免疫组织化学：可用于检测肿瘤组织中 🕊 肿瘤干细胞的存在和分布。
鉴定 🐎 肿瘤 🐎 干细胞的重 🪴 要性
理解肿瘤发生和进展肿瘤：干细胞被 🌹 认 🐞 为是肿瘤 🪴 形成和维持的关键因素。
开发靶向疗法：针对 🌴 肿瘤干细胞的靶向疗法有望改善癌症治 🌴 疗效果 🐎 。
预后和治 🦍 疗反应预测：肿瘤干细胞的存在和特性与肿瘤的预后和对治疗的反应有关。
2、肿瘤干细胞的培养鉴定方法 🌷
肿瘤干细胞培养 🌴 鉴 🌷 定 🦁 方法
1. 培养 🐎 方法
肿瘤圈 🦟 形成试验（CFC）：将（单）细胞悬液接种到半固体培养基如甲基纤维素中肿瘤。干细胞能够形成圈状的细胞群落，称。为肿瘤圈 🐱
球体形成试验：将 🕊 单细胞悬液接种到无血清培 🐝 养基中，含有生长因子和抑制剂。肿瘤干细胞能够形成悬浮的、类，似 🌷 球体。的细胞群落称为球体
2. 表面标 🦢 志鉴定
免疫表型分析：利用流 🐒 式细胞术或免疫组织化学检测肿瘤干细胞 🦅 特异的表面抗原，如CD44、CD133、CD166等。
排除标记抗体：肿瘤干细胞通常缺乏分化标志物，如细胞角蛋白 🦉 （CK）、上皮细 🐟 胞粘附分 🍁 子（EpCAM）等。
3. 功能鉴定 🐳
成瘤性试验：将肿瘤 💮 干细胞注射到免疫缺陷的小鼠体内，观察其成瘤能力。
自我更新试验：将肿瘤 🐼 干 🐕 细胞在体外培养并传代，观察其是否 🕷 可以维持其干细胞性状。
4. 分 🌺 子鉴定 🍀
干细胞相关基 🐞 因表达分析：利用实时定量PCR或 RNA 测序检测肿瘤干细 🌸 胞相关的基因，如Oct4、Sox2、Nanog 等。
微阵列 🦁 分析：比较肿瘤干细胞和非干 🐱 细胞之间的基因表达谱，鉴定差异表 🦍 达的基因。
5. 其 🕊 他方法 🐦
ALDEFLUOR 试验：检测 🐅 肿瘤干细胞中醛脱氢 🦟 酶 🌼 的活性，该酶在肿瘤干细胞中高表达。
细胞周期分析：肿瘤干细 🦍 胞通 🌿 常处于期G0/G1的静止状态。
鉴定标准肿瘤干 🐴 细胞 🍁 的鉴 🦋 定通常需要满足以下标准：
在 CFC 或球体形成试验 🐶 中形成 💐 圈状结构或球状结构。
表达 🐼 肿瘤干细胞特异的表面抗原。
具有 🐼 成 🐯 瘤性和 🦈 自我更新能力。
表达干细胞相关的 🐳 基因 🦅 。
通过综 🐶 合使用这些鉴定方法，可，以有效鉴别肿瘤干细胞为靶向治疗和药物开发提供依据。
3、肿瘤干细胞的培养鉴定 🐘 报告
肿瘤干细 🪴 胞培养鉴定 🐈 报告
样品信息样 🐺 品来源：肿瘤组织
样品 🐦 类型：原代培养物 🦆 /细胞系
肿瘤 🦆 类型：
培养方法培养基：特定培 🌷 养 🦊 基（请注明 🦊 ）
培 🐼 养 🌿 条 🦍 件：
温 🦉 度 🐴 ：
二氧 🐈 化 🐯 碳浓 🐡 度：
湿度 🦆 ：
鉴定方法表 🦢 面标 🦍 记 🐵 ：
使用 🌴 以下抗体检测细 🦊 胞表面标 🐳 记：
CD44
CD133
CD24
ALDH1
流式细胞术分析：使用荧 🦟 光标记抗体进行细 🐈 胞表面标 🌻 记分析。
克隆形 🐎 成 🐯 检 🐟 测：
将 🐋 细胞接种到富含血清培养基中。
培 🕊 养 1014 天。
对克隆 🌴 形成单位 (CFU) 进行 🌷 计数，确定 🦅 干细胞丰度。
类 💐 器官 🕊 培养 🌷 ：
将细胞接 🌼 种到含有培养基基、底膜和 🌵 生长因子的凝 🕊 胶中。
培 🦄 养 🕊 1014 天 💐 。
检 🐠 查类器官形成，以评估干细胞自我更新能力。
分化检测 🦁 ：
将培养好的肿 🐒 瘤干细胞诱导分化为更成熟的细胞类型 🦋 。
使 🐼 用免疫表型、功 🐛 能分析或基因表达谱分析来表征分化状态。
结果表 🐶 面 🌵 标 🐝 记：
阳性 🦅 标记 🐱 ：
CD44
CD133/CD24（如果 🦊 适用 🐒 ）
阴 🐬 性标记 🦊 ：
CD24（如 🪴 果适 🐱 用 🐳 ）
克隆形 🐡 成检测 🐧 ：
CFU 数 🐟 量 🦈 ：
类器 🌸 官培养 🌴 ：
类 🕊 器官形 🐵 成：
分 🌻 化检 🐬 测 🐼 ：
分化标记 🌷 或功能 🍀 分析结果：
结论根据上述鉴定方法，培，养的细胞具有肿瘤干细胞的特征包括特定的表面标记表达、克、隆形 🐒 成能力类器官形成和分化潜能。这，些。结果表明样品中已成功培养出肿瘤干细胞
4、肿瘤干细胞 🐈 的培养鉴定结果
肿 🌴 瘤干细 🌵 胞培养鉴定结果
培 🌲 养条 🐺 件 🦅 ：
培养基：含 10% FBS 和 EGF/FGF 的 🍀 无血清培养基
培 🌾 养环境 🐺 ：37°C，5% CO2
鉴 🦆 定 🌿 方法 ☘ ：
1. 表面 🦍 标 🌼 志物分 🌾 析
流式 ☘ 细胞术：使用 CD133、CD44、CD90 等已知肿瘤 🦄 干细胞表 🐶 面标志物
结果：细 🦊 胞表达预期的肿瘤 🌷 干细胞表面标志 🌸 物
2. 克隆 🐦 形 🌲 成 🍁 能力
极限稀释克隆形成试 🐋 验：将单细胞稀释到 96 孔板中
结果：检测到形 🐈 成克隆的单细 🌸 胞（球体成立），表明克隆形成能力
3. 分化 🦅 潜 🌲 能 🐬
分化诱导实验：使用各种分化诱导因 💮 子诱导细胞分化为成熟细胞 🐈 型
结果：细 🌷 胞能够分化为 🦉 不同类型的成熟细胞，表 🌹 明分化潜能
4. 肿瘤 🐒 形 🦆 成能 🦅 力
小鼠异种移植实验：将培养的细胞注射到免疫缺陷小鼠体内 🐎
结果：细胞能够形成肿 🐞 瘤，表明肿瘤形成能力
5. 耐 🐧 药 🦄 性 🌴
化疗耐药性检测：用化疗药物处理细 🐕 胞 🌳
结果：培养的细胞表现出对化疗药物的耐药 🕷 性表，明耐药性
结论：基于这些鉴定结果，我，们可以确定所培养的细胞具有肿瘤干细胞的特性包括表面标志物表达、克、隆、形成能力分化潜能肿瘤形成能力和耐药性这些结果。支。持了所建 🐧 立的培养系统能够产生用于研究和治疗的肿瘤干细胞
