人牙龈干细胞分离培养（人牙龈干细胞分 🐝 离 🐬 培养多少钱）
- 作者: 王砚舟
- 来源: 投稿
- 2025-06-26
1、人牙龈干细胞分离 🐯 培养
人 🐘 牙龈干细胞的分离 🐒 和培养
分离收集牙龈 🕷 组织 🦋 ：从健康供体的 🐬 牙龈中收集小块组织。
酶解：使用胶原酶或其他 🐅 酶消化组 🐼 织，释放出细胞。
过滤和洗涤过滤 🐝 ：细胞 🐳 悬液以去除残留的组织碎片。
免疫磁珠分选：使用连接到 🐡 特定表面标记（如 🌵 CD34、CD90、CD105）的免疫磁珠分选出干细胞 🌵 。
培养培养基 🌷 ：使用富含生长因子（如表皮生长因子、成纤维细 🐴 胞生长因子）和抗 🐋 生素的特定培养基。
培养皿 🍀 或培养瓶：将分离出的细胞接种到培养皿或培养瓶中，并用培养基覆盖 🐋 。
培养条件：将 💐 细胞置于 37°C、5% CO2 的培 🕸 养箱中。
传代：当细 ☘ 胞达到 7080% 的汇合度时，用，胰酶酶解细胞然后传代到新的培养皿或培养瓶中。
表征表面标记：使用流式细 🦢 胞术 🌷 分析细胞表面的标志物（如 CD34、CD90、CD105）。
分化潜能：通过将细胞诱导为脂肪细胞、软骨细胞或骨细胞等特定细 🌳 胞类型 🐝 来评估其分化能力。
增殖能力：测 🐕 量细 🐬 胞的增殖速 🦄 率和传代次数。
免疫抑制 🐞 特性：评估 células 干燥机抑制免疫反应的 🐒 能力。
应用人牙龈干细胞 🌾 因其易于获取、增殖能力强和多向分化潜能而具有广泛的应用前景：
牙科再生：用于 🐈 修复牙龈萎缩牙 🦉 、周组 🐈 织损伤。
骨再生：用于治疗骨缺损 🌻 和骨折。
软骨 🐠 再生：用于治疗关 🪴 节炎和软骨损伤。
免疫调节：用于治疗炎症性疾病和自身免疫性 🐯 疾病。
组织工程：用于创造用于药物测试和组织修复的 🐠 体外模型。
2、人牙龈干细 💮 胞分离 🌸 培养多少钱
人牙龈干细胞分 🐳 离培养的费用因诊所和实验室而异 🦈 ，还取决于培养所需的细胞数量和培养时长。一，般来说费 🌾 用可能在以下范围内：
细 🦟 胞收集： 300600 美 🦈 元
分离和 🐴 培 🐶 养： 美 🐟 元
细胞 🦅 保存 🐕 ： 200500 美 🦁 元/年
因此，总费 🐯 用可 🦄 能在 美 元 🦊 之间。
3、人 🦄 牙龈干细胞分离培养方法
人牙龈干细胞分离培 🌼 养 🐡 方法
材料：人 🐟 牙龈 🐎 组 🦢 织
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) 含 10% 胎 🐧 牛血清 (FBS)
胶 🌺 原 🕸 酶 🌷 IV (2 mg/ml)
胰 🐡 蛋 🦉 白 🐘 酶 (1 mg/ml)
Apo2L/TRAIL
CD271 (NGFR) 抗 🌼 体 🌸
CD146 抗体 🌼
培养瓶细胞培养 🐶 板
移 🐝 液器 🐠 和枪 🐳 头
离心机步骤：
1. 牙龈组织 🐯 收集和 🐒 预处理：
从健 🌷 康供体 🐅 收集牙龈组织。
将组 🌵 织冲洗干净 🦍 并 🦉 去除上皮层。
2. 组织 🐟 消化 💐 ：
将牙龈组织 🐅 切成小 🐞 块。
将组织转移到含有胶 🐯 原酶 IV 和胰蛋白酶的 DMEM 中。
孵 🦉 育 12 小时，37°C，轻轻摇晃。
3. 单细胞 🦄 悬液的制备 🐕 ：
将消化后的组 🐅 织通过 🦍 70 μm 细胞过滤器过滤。
用含 FBS 的 🦍 DMEM 洗涤细 🦄 胞，然后离心分 🐳 离。
4. 凋亡 🐦 细 🐼 胞去除 🐵 ：
通过Apo2L/TRAIL处 🐼 理去除凋亡细胞 🌵 。
孵 💮 育 30 分 🌲 钟，37°C。
5. 干 🦁 细 🐕 胞富集 🍀 ：
使用 CD271 (NGFR) 和 CD146 抗体对细胞进行免疫 🐱 磁分离 🐼 。
阳性细胞代 💐 表为牙龈干细胞富集的细胞群 🕷 。
6. 细胞 🐼 培 🐬 养 🐶 ：
将富集的细胞培 🐎 养在含 🐕 的 FBS 中 DMEM 。
培养在 5% CO2，37°C 下 💮 。
每 34 天 🌴 更换培养基。
7. 干 🐠 细胞特 🐡 性鉴定 🐛 ：
对 🕸 培养的细胞进行免疫表型分析，以确认干细胞标记物的表达。
评估细胞的增殖、分化和多能性 🌵 潜能。
提示：使用新鲜的 🌼 牙 🐠 龈组织以获得最佳结果。
消化时 🍁 间和浓度 🐞 应根据组织的大小和质量进行优化 🐵 。
定期监测细胞 🐘 生长和状态，以确保培养的成 🐅 功。
4、人牙龈干细胞分离培 🦋 养原理
人牙 🐞 龈干细胞分离培 🌹 养原 🌲 理
人牙龈 🐘 干细胞 (hGSCs) 是一种存在于牙龈组织中的多能干细胞类型，具有分化为多种细胞 🐟 类 🐴 型的潜力。其分离和培养的原理包括以下步骤：
1. 样品 🐯 采 🦊 集 🐺 ：
从健康供体处获取新鲜牙龈 🦆 组织，通 🌷 常通过外科手术或活检取得。
2. 消 🐟 化 🌼 ：
将牙龈组织切成小块，然 🐋 ，后用胶原酶等蛋 🐟 白水解酶对其进行消 ☘ 化以分离出单个细胞。
3. 细胞表 🌾 面标 🐅 记：
使 🦟 用抗体标记特定的细胞表 🦉 面标志 🦢 物，如 CD44 和 CD90，这些标志物在 hGSC 中表达较高。
4. 磁性 🐧 细 🌹 胞分选 (MACS)：
使用带 🐧 有 🐯 抗体的磁珠与标记的细胞结合，然后通过磁场分离出连接的细胞。这将富集 hGSC 并。去除其他细 🌷 胞类型
5. 培 🌴 养 🌹 ：
将富集的 hGSC 悬浮在 🦈 培养基中，该培养基含有生长因子、抗生素和血清。
培养在特定温度 (通常为 37°C) 和 (二氧化碳浓度通常为 🍁 5%) 下进行。
6. 克 🐕 隆 🌹 形 🐱 成：
单个 hGSC 细 🌾 胞附着在培养皿或孔 🕷 板上并增殖，形成球形的克隆。
这 🦁 些克隆可以进一步克隆化或增殖以获取大量 hGSC。
培养基成 🐎 分：
无血 🐧 清培 🐈 养基：例如培养基 DMEM/F12 添，加，生长因子如 EGF 和 🦉 bFGF。
血清培养基 🐧 ：例如培养基 αMEM 添，加 1020% 胎牛血清 (FBS)。
注 🐼 意 🐵 事 🐘 项：
hGSC 的分离和 🐛 培 🐧 养需 🐡 要专门的设备和技术。
培 🦅 养基的选择和优化对于的 hGSC 增殖和分化 🐴 至关 🐡 重要。
培 🐴 养时间 🦉 和条件可能因 hGSC 的预期用途而异。
遵守伦理准 🐺 则和相关法规对于研究和医疗应用至关重要。
