大鼠牙髓干细胞提取 🐎 （大鼠牙髓干细胞提取实验报 🌹 告）
- 作者: 马珂芋
- 来源: 投稿
- 2025-09-08
1、大鼠牙髓干 🐈 细胞提取 🐳
大鼠 🐳 牙髓干细胞提取 🦄
材料：大鼠磨牙 🐞
PBS（含抗 🦟 生 🌼 素 🌷 ）
胶 🐎 原 🐛 酶 🐛 IV
胰蛋 🦉 白酶 🐎
Alpha最小必需培养 🐺 液（αMEM）
胎牛 🐺 血清（FBS）
生长因子（可 🦈 选）
步骤：1. 收集磨牙 🐟 ：从大鼠 🌷 中取出健康的磨牙 🦆 。
2. 去除软组织：使用无菌器械小心去除牙龈和牙髓组 🐦 织。
3. 切碎牙髓：将牙髓 🌿 切成 🌿 小块。
4. 酶消化：将牙髓 🦊 块放入含有胶原酶 IV 和胰蛋白酶的 PBS 溶液 🐘 中。在 37°C 下 🐝 孵育 12 小时，并。定期涡旋
5. 过 🐎 滤：将细胞悬液通过过滤 70 μm 器过滤 🕷 ，去除组织 🦟 碎片。
6. 离心：将细胞悬液以离心 300 x g 分 5 钟，收集细胞 🐵 沉淀 🌴 。
7. 重悬：将细胞沉淀 🪴 重悬于含 10% FBS 的 αMEM 培养基中。
8. 培养：将细胞接 🐯 种到塑料培养皿或培养瓶中，在 37°C、5% CO2 的环境下培 🐘 养。
9. 更换培养基：每 23 天更 🐛 换一次培 🐋 养基。
提示：可以添加生长因 🐦 子（如 EGF 和以 bFGF）提高干细胞的增殖和分化能力。
培养基的组 🐋 成可以通过 🐦 添加其他成分（如 ASCORBAT2磷酸盐和 L谷氨酰胺）进行优化 🦋 。
定期监测细胞生长并 🐯 采用不同的传代策略以维持细 🦋 胞活力。
2、大鼠牙髓干细胞提取实验报告 🐯
大鼠牙髓干细 💐 胞提取实验报告
实验 🌺 目的 🌻 ：
提取大鼠 🦁 牙 🐎 髓干细胞
评估干细胞 🌺 的生长和增殖能力
材料和方法 🦢 ：
材料：4 只成 🐦 年 🌴 大鼠 🐧
无菌 🦆 手 🐬 术器械
HBSS 溶液 🐞
牙 🦢 髓培 🌲 养 🐛 基
培养板显微镜
方法：
1. 动 🐵 物准 🐬 备：
麻 💐 醉大 🐟 鼠。
消 🐳 毒口腔。
2. 牙髓提 🐎 取 🦄 ：
移除下颌第 🕸 三臼齿。
使用无菌 🐞 牙髓提取器取出牙髓。
将 🐯 牙髓组织用 HBSS 溶液冲洗干净 🌳 。
3. 细 🐵 胞分离 🕊 ：
将 🐴 牙髓 🐬 组 🐴 织剪成小块。
将组织放在培养皿中并用牙髓培 🌷 养基消化 1 小时 🐴 。
过滤细 🐘 胞悬液 🌾 并用 🕸 培养基离心。
4. 细 🐎 胞 🌿 培 🌿 养：
将细胞重悬于牙髓培 🐋 养基中。
将细胞接种到培 🌵 养板中 🐛 。
在 🕸 37°C、5% CO2 下培 🐝 养细胞 🌲 。
5. 细 🐦 胞 🐝 生长评估 🦉 ：
定期 🐯 观察细胞生长情 🐴 况。
在 3、7 和 14 天后测量细 🍀 胞计数。
结果：牙 🦉 髓 🌺 提取 🐺 ：
从每只动物成功提取牙髓组织 🐯 。
细胞分 🦢 离：
从牙髓组织中分 🌾 离出单核细胞。
细 🦊 胞培 🦊 养 🌴 ：
细胞在牙髓培养基中 🌸 生长 🕊 良好。
细胞呈梭形，具有良好 🌿 的 🌸 贴壁能力。
细 🐵 胞生长 🐝 评 🕊 估：
细 🐅 胞计数在 3、7 和 14 天后显着 🦉 增 💐 加。
细胞在 🐎 14 天后达到 🦍 饱和密度。
结论：成功从大鼠牙髓组织 🦆 中提取干 🦊 细 🐅 胞。
提取的细胞具有良好的生 🌻 长和增殖能力。
这些细胞可用于进一步的研究，包 🦊 括分 🦢 化和再生应 🐟 用。
3、大鼠 🌿 牙 ☘ 髓干细胞提取原理
大鼠牙髓干细胞提取原理 🦟
1. 样 🐴 本 🦈 收集 🦉
从 🐧 健康 🕸 大鼠的牙齿中 🌷 收集牙髓组织。
轻轻去除牙髓腔顶 🌻 部的牙冠部分，露出牙 🐼 髓。
2. 牙髓组织 🐟 消化
将牙 💐 髓组织置于含胶原酶和解聚 🌿 酶的消 🐒 化液中。
在 37°C 孵育数小 💮 时，以释放干细胞。
3. 离 🌿 心和 🐒 分 🐱 离
将消化后的溶 🦆 液离心 🐺 ，以去除细胞 🦆 碎片和残余组织。
获得含干细胞的细胞悬液 💐 。
4. 细胞贴壁培养 🌹
将细胞悬液接种到 🐶 培养皿中。
干细胞 🪴 会贴 ☘ 壁生长，而其他细胞类型则漂浮在培养基中。
5. 培养 🌷 基更换和 🐱 扩增
定期更换培 🐬 养基以提供营养并去除废物。
干细 🐳 胞会增殖并形成菌落。
6. 干 🍀 细胞鉴定
使用免疫表型分析或分化潜能实 🌿 验等方法鉴定干细胞。
牙髓干细胞通常表达 CD44、CD90 和 CD105 等标记物，并、能够分化为成牙 ☘ 本质细 🦋 胞成骨细胞和成软骨细胞。
7. 干细胞收 🐛 集
当干细胞达到一定数 🍀 量时，使用胰蛋白酶消化贴壁的细胞。
通过离心 🐴 收集细胞，用于进一步的研究或治疗应用。
4、大鼠牙 🐵 髓干细 🕷 胞提取方法
大鼠牙髓 🐦 干细胞 🐠 提取方法 🐠
材料大鼠臼齿（23 岁 🐯 ，雌性）
无菌生 🌷 理盐水
Hanks 平 🕷 衡盐 🌿 溶液（HBSS）
0.25% 胰 🐋 蛋 🐠 白 🕊 酶
培养基 🪴 （含 10% 胎牛血清、1% 青霉素/链霉素）
封闭箱层流罩
显微 🐘 解 🐟 剖仪
离心机培养皿
细 🐘 胞 🐕 培养 🐬 瓶
步骤1. 鼠 🐴 齿准备：将大鼠处死后，取出下颌骨臼齿 🌺 。用，无。菌生理盐 🍁 水冲洗臼齿去除组织碎片
2. 牙 🕷 髓组织获 🐦 取：使用显微解剖仪在无菌环境下打开臼齿的牙冠，小心去除牙髓组织。将牙髓组织放入装有的 🦊 HBSS 培。养皿中
3. 组织消化：向 🌿 培养皿中加入 0.25% 胰蛋白酶，于 37°C 孵育 1 小，时每 20 分钟 🌷 震荡一 🐱 次。
4. 细胞分离：胰蛋白酶消化结束后，用，无菌生理盐水终止消化并通过细胞 100 μm 筛网 🐳 过滤细胞液。
5. 离心收集细胞：将过滤后的细胞 🌹 液转移到离心管中，于离 🐴 心 1200rpm 分 5 钟。弃，去。上清液收集细胞沉淀
6. 培养：将 🐞 细胞沉淀重悬于培养基中，接种于培养 🪴 皿或培养瓶中 🐳 将细胞。置于培养 37°C、5% CO2 箱中培养。
7. 细胞鉴定 🐳 ：培养 710 天后，可以在显微镜下观察细胞形态。牙，髓。干细胞。通常呈纺锤形或多角形具有较大的细胞核和明显的胞质可以进行免疫细胞化学或流式细胞术鉴定以进一步确认细胞的表型
注意事项使用 🐟 无菌技 🦊 术操作。
使用锋利的显微解剖仪以尽量减少对牙 🐺 髓组织的损 🕷 伤。
在胰蛋白酶消化过程 🦈 中要定期 🪴 震荡细胞液以提高消化效率 🪴 。
培养基应 🐠 新 🌿 鲜，并 🐒 在使用前预热至 37°C。
定期 🌵 监测细胞培养 🌴 物，并更换 🌺 培养基以保持细胞的健康状态。
