如何检 🦢 测活细胞和干细胞（如何检测活细胞和干细胞是否一致）
- 作者: 李皙颜
- 来源: 投稿
- 2025-07-21
1、如何 🐬 检测活细胞和干细胞
检测 🪴 活细胞：
1. 膜完整 🌼 性 🦍 检测 🪴 ：
Trypan Blue 排斥试验：活细胞的膜完整 🦄 ，阻 Trypan Blue 止，染，料进入而死细胞的膜破 🐺 裂 🕊 染料进入细胞并着色成蓝色。
PI 染色：碘 🐅 化丙啶（PI）是一种细胞不可渗透的染料，它，只能进入 🐛 死 🌺 细胞或膜破裂的细胞并与 DNA 结合发出红色荧光。
2. 代 🌼 谢活性检 🐬 测 🐳 ：
MTT 试验：3(4,5二甲基噻唑基二2苯基)2,5溴化四氮唑（MTT）是一种黄色的底物，被活细胞代谢为 🕷 紫色的甲酰胺。
XTT 试验：2,3双（2甲氧基4硝苯基）5[3羧甲氧基苯 🐘 基]2H四唑鎓盐（XTT）是一种橙色的底物，被活细胞代谢为橙色的甲酰胺。
检测 🦢 干细 🌺 胞：
1. 表 🦊 面标记：
流 🐟 式细胞术：使用抗体标记干细胞表面特异性 🪴 抗原 🐠 ，如 CD34、CD133 和 CD45。
免疫荧光染色：用荧光标记的抗体 💐 标记干细胞表 🐕 面抗原，在显微镜下观察。
2. 克隆 🌴 形成试 💐 验：
半固体培养：将干细胞接种在半固体培养基中，如甲基纤维素或琼脂 🦊 糖干细胞。增。殖并形成克 🦢 隆
液体培养：将干细胞接种在液体培养基中，形成悬浮细胞团培养。一，段时间 🌳 后细胞团形成聚集体或“球体”，表。示干细胞的克隆形成能力
3. 分化能 🐈 力：
三谱系分化潜能 🐠 ：干细胞可以分化为中 🐴 胚层（骨、软骨、脂肪）、外胚 🌷 层（神、经）元（表）皮和内胚层内脏细胞。
定向分化试验：将干细胞暴露于特定的 🐧 分化 🍁 因子或培养 🐡 条件，诱导它们分化为特定细胞类型。
2、如何检测活细胞和 🐕 干细胞是否一 🐧 致
检测活细胞和干细胞一致性的方法 🦋 ：
1. 活 🐱 力检 🐼 测 🦟 ：
MTT 检测测：量线粒体活性活，细 MTT 胞将 🌾 还原 🐦 为紫色结晶。
流式 🐈 细胞术：使用荧光染料（如 PI 或 🐳 Annexin V）区分活细 🐈 胞和死细胞。
ATP 检测测：量 ATP 细胞内水平，这是新陈代谢活性的 🐵 指标。
2. 分 🦋 化潜 🐶 力：
类克 🐦 隆形成试验 (CFU 检测检测)：干细胞在半固体培养基中形成球状集落的潜力，这些集落代表分化细胞。
分化标记：使用 🐎 免疫染色 🐳 或流式细 🦟 胞术检测特定分化标记的表达表，明细胞向特定谱系分化的能力。
3. 增殖 🐕 潜 🐋 力：
BrdU 掺入：孵育细胞于 BrdU（胸苷类似物）中，然，后使用抗体染色以检测 DNA 合成和细胞增 🐒 殖。
流式细胞术细胞周期分析：测量细胞在不同细胞周期阶段的分布，以评估增殖速 🐝 率。
4. 干 🐋 细 🦋 胞特异性 🐛 标记：
免疫染色：使用抗体检测干细胞特异 🐅 性表面标记，如 CD34、CD133 或 Sox2。
流式细胞术：使 🐶 用荧光标记抗体检 🐠 测干细 💮 胞亚群。
5. 功 🐺 能 🐟 分析 🐬 ：
髓系培养：将干细胞分化为髓系细胞，并评估它 🌳 们产生细胞因子和吞噬 🦊 能力的功能。
成 🪴 骨细胞培养：将干 🦢 细胞分化为成骨 🐠 细胞，并测量它们形成矿化结节的能力。
6. 其 🐎 他方法：
Telomere 长度分析：测量端 🐕 粒长度端粒 🦍 ，缩短与衰老和分化有 🍁 关。
微阵列分析或 🌳 RNA 测序分析：基因表达谱，以识别与干细胞性一致的转录谱。
一致性标 🦉 准：
活细胞和干细胞一致性应至少 🕸 满足以下标准：
高存 🌿 活 🐎 率 (>90%)
良好增殖潜 🌸 力 (高于未分化 🐧 的对照）
表达干细胞 💐 特 🦟 异性标记 🐬
表现出多向 🌻 分化 🐬 潜力 🐟
具 🐞 有 🌴 功能性 🕊 特征。
3、如何检测活细胞和 🦁 干细胞的区别 🐛
检测 🌸 活 💮 细胞和干细胞的区别
活细胞：具有代谢活性（例如 🦆 ：呼吸、分泌 🐕 ）
对刺激做出 🦟 反应（例如：移动、变形）
能 🦄 够繁殖 🍁 （例 🦄 如：分裂）
干细胞：具有自我更新能力（可以产生 🌺 自身的副本）
多能性（可以分化为多种类型 🌿 的细胞 🦉 ）
检测 🐧 方 🐳 法 🐴 ：
1. 染料 🐅 排除试验 🪴 ：
对细胞进行 🌲 染料 🐬 （如翠青或吡 🪴 咯红染）色。
活细胞会排除染料，而死亡 🐝 细胞 🐝 会保留染料。
2. 代谢活性检测 🐎 ：
例如：MTT 实验，可以测 💮 量细胞的代谢活性。
活细胞将 MTT 转化 🌲 为有色物质，而死细 🦟 胞则不会 🐎 。
3. 运动 🐘 性检 🦊 测：
使用显微镜或时间推移摄 ☘ 影观察细胞的运动。
活细胞可以移动 🐼 ，而死 🐯 亡细胞则不能。
4. 克隆 🐦 形成试 🍁 验 🐯 ：
干细胞能够形成克隆 🐺 （由重复分裂产生的细胞群 ☘ ）。
将单个细 🦍 胞接种在培养皿中，然后计数克隆的数量来确定干细胞含 🦢 量。
5. 分化 🌾 标记物：
干细胞可以表达特定的分化标记物，这些标 🦊 记物表明它们的 ☘ 潜能。
例如：CD34 用于造血干细 🕸 胞 🦊 用于，SOX2 多能干细胞。
6. 荧光激活细 🐕 胞分选（FACS）：
使用抗体标记特定的细胞表面或细胞内 🐡 标志物。
FACS 可以分离出具有特定标记物的细 🪴 胞，包括活细胞、干细胞 🕊 或 🦅 其他细胞亚群。
区分要 🐝 点：
活细胞具有代谢和运动活性，而 🦈 干细 🐯 胞具有自我更新和多能性 💐 。
干细胞可以是活细胞，但活细胞不必是干细胞 🦢 。
结合多种检测方法可以更准确地区 🌹 分活细 🦍 胞和干 🐬 细胞。
4、活细胞检测常用方法有 🌼 哪些
活细 🕷 胞检测常用方法
1. 染料排 🦉 斥 🕊 方法
特立帕蓝染色法：活细胞具有完整的细 💮 胞膜，能，将特立帕蓝，排，除在外而死细胞的细胞膜 🐞 通透性增加导致特立帕蓝进入细胞呈现蓝 🐺 色。
溴化乙锭 🐒 染色法：与特立帕 🐠 蓝类似，但溴化乙锭，只能进入死细胞活细胞则不会被染色。
2. 膜 🐟 完整性 🐳 检测 🦉
乳酸脱氢酶（LDH）释放测定：LDH是一种细胞内酶，当细胞膜受损时会释放到细胞外。通LDH过 🌴 测，量。培养基中的含量可以 🪴 评估细胞的膜 💮 完整性
流式细胞术：利用特定 🍀 抗体 🐝 标记细胞膜，对活细胞和 🐬 死细胞进行区分。
3. 生长 🐯 和增 🐼 殖检测 🐠
细 🐳 胞计数：使用血细胞计数 🐝 板或自动细胞计数仪对活细胞 🕷 进行计数。
增殖测定：通过检测DNA合成（例如BrdU掺入 🐛 ）、细（胞 🐬 生长例如测定MTT或）、细（胞）分裂例如流式细胞术来评估细胞的增殖能力。
4. 代谢活 🐈 性检测
MTT测定：活MTT性细胞中 🌴 的线粒体将转化为蓝紫色甲 🐶 臜，通过测量甲臜的吸收值可以评估细胞的代谢活性。
ATP测定：ATP是细胞能量的货币，通ATP过测量的含量可以评 🪴 估细胞的代谢健康状况。
5. 迁 🌲 移和侵袭检 🌻 测
划痕愈合测定：在 🐴 细胞单层中划一条线，然后测量细胞迁移和填 🌿 补划痕所需的 🌲 时间。
Transwell侵袭测定：细胞 🐵 被放置在有孔膜上，并刺激其通 🌸 过膜进行迁移通过。计。数迁移到另一侧的细胞数量可以评估细胞的侵袭能力
6. 凋 🦈 亡检测 🐯
Annexin V染色法：Annexin V是一种蛋白质，可以与凋亡 🦢 细胞的细胞膜结合。通Annexin V过，流。式细胞术或 🍀 显微镜 🐡 检查阳性的细胞可以识别出凋亡细胞
TUNEL测定：TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记测定 🐦 ）检测细胞 🕷 DNA中核小体的碎片化，这是凋亡的特征。
