间充干细胞分离培养（干细胞和间充质干细胞 🌻 的区别）
- 作者: 朱星莼
- 来源: 投稿
- 2025-04-07
1、间充干细 🐵 胞分离 🌳 培养
间充干 🐴 细胞分离 🐕 培养 🦁
材料：含肝素 🕸 的采 🍁 集管
梯度离 🌻 心液 🌿
培养基（含 🦄 10% 胎 🐬 牛 🌼 血清）
抗生素（如青霉 🦢 素和链 🌷 霉素）
培养皿或培养 🌲 瓶
移液枪和枪 🦋 头
离心机步骤：
1. 组 🐅 织采 🐵 集 🦁 ：
从无菌动物中采集软组织 🦅 或 💐 骨髓。
将组织置于含 🦊 肝素的 🐎 采集管 ☘ 中。
2. 酶消 🌷 化：
加入胶原酶溶液并保温孵育以消化 🐺 组织 🪴 。
定 💐 期振荡或搅 🐼 拌以促进消化 🌷 。
3. 过滤 🦟 ：
消化后的组 🐟 织悬液通过 100 微米 🌻 滤器过滤以去 🦅 除组织碎片。
4. 梯度 🐒 离心 🐳 ：
将过滤后的悬 🐼 液小 🐒 心分层于 🦊 梯度离心液中。
离心后，间充干细胞将定位在特定层 🐺 之间。
5. 收集 🐕 间 🌷 充 🌺 干细胞：
小心抽取含间充 🌻 干细胞的层。
离心收集 🌴 细胞。
6. 细 🦆 胞培 🦈 养 🐕 ：
将收集的细胞 🌳 重新悬浮 🌷 在培养基中并接种到 🐛 培养皿或培养瓶中。
加入 🕸 抗 🦉 生素 🌲 以防止细菌污染。
将培 🐝 养 🐳 物置于 37°C、5% CO2 的培养 🐕 箱中培养。
7. 细胞 💐 贴壁：
间充干细胞 🐳 将贴附 🐱 到 🌵 培养基底上。
一旦 🐴 细胞贴壁，可以更换培养基以去除未贴壁细胞和杂质。
8. 细 🐺 胞 🦟 传代 🦢 ：
当细胞达到 8090% 的汇合度时，可 🍀 以通过胰蛋白酶消化和传代到新的 🦈 培养皿或培养瓶中进行传代。
注 🦋 意事 🐼 项 🌹 ：
使用无 🕸 菌 🦁 技术以防止污染。
使用高纯度的试剂和 🌹 培 💮 养基以确保细胞培养的质量。
定期 🐱 监测细胞生长情况并更换培养基。
避免过度传代 🌺 ，因为 🦄 它可能会导致细胞功能减退。
2、干细胞和 🦆 间 🐘 充质干细胞的区别
干细胞未分化或部分分化的细胞，具有自我更新和 🌿 分化为多种类型的细胞的能力。
对组织修 🦟 复和再生具 🐺 有潜在的治疗应用。
来源包括胚胎胚胎（干细胞）和（成年 🐱 组织 🐴 成 🐘 体干细胞）。
间 🕊 充 🌲 质干 🐈 细胞 (MSC)
一种成体多能 🐶 干细胞，存在于骨 🐈 髓、脂、肪组织脐带血和其他组织中。
具有向脂 🐯 肪细胞、成、骨细胞软骨细胞等间充 🐡 质组织分化的能力。
分泌细胞因子和生长 💐 因子，促进组织修复和免疫 🐟 调节。
干细胞和 💐 间充质干细 🐼 胞 🐅 的区别
| 特征 | 干 | 细 🦅 胞 🌹 间充质干细胞 (MSC) |
||||| 来源 | 胚 | 胎 |和成年组 🦁 织主要从成年组织中
| 分化潜能分化 | 为 | 多 |种细胞类型分化为 🌷 间 🦉 充质组织类型
| 再 ☘ 生医学应用用 | 于 | 组织修复和再生修复 🌻 骨骼、软骨、脂 |肪和其他间充质组织 🌴
| 免疫调节能力 | 具 | 有免疫调节 🦊 |特性具有 🕸 免 🦢 疫调节活性
| 表面 🍀 标志物 | CD34、SSEA4 | CD105、CD73、CD90 |
3、间 🦁 充质干细胞培养基配制
间 🌷 充质干细胞（MSC）培 🦁 养基配制 🐞
试剂：Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) 高 🐕 糖 🌺 培养 🌷 基
胎 🐝 牛血 🦈 清 (FBS)
青霉素链 🌹 霉 🌷 素液 (P/S)
L谷氨酰 🦉 胺 🌴 (LGlu)
β巯 🐕 基 🐧 乙醇 🕷 (βME)
配制 🐶 步骤：
1. 测量培养基体积：根据所需培养 🐕 基体积 🐱 ，在无菌容器中量取相应体积的 DMEM 高糖培养基。
2. 添加 FBS：计算所需的 FBS 体积，通常为培 💮 养基体积的 1020%。将，其。缓慢加入培养基中边加边搅拌
3. 添加抗生素和抗真菌剂 🐧 添加：青霉素链霉素液至终浓度为 🦈 青霉素和链霉素 100 U/mL 100 μg/mL 。
4. 添 🌾 加 L谷氨酰胺添 🐳 加谷氨酰胺：至 🦁 L终浓度为 2 mM。
5. 添加 β巯 🐘 基乙醇添加巯基 🦆 乙醇：至 β终浓度为 🐞 55 μM。
6. 过 🌾 滤灭菌：使用过滤 0.22 μm 器将培养 🕸 基过滤至无菌容器中。
7. 分装并保 🐠 存：将培养基分装至适当的容器中 🐳 ，例如培养瓶或培养皿。在 🐘 4°C 条件下避光保存长达 24 周。
注意：所有试剂和设 🌸 备在使用 🐈 前均 🐅 应灭菌。
培养基 🕸 成分可能因不同的 MSC 类型和实验目的而异。
培养基应在 🐦 使用前将至室 🍁 温 🐧 。
4、间充 🐦 质干细胞 🦈 培养过程
间 🐈 充质干细胞培养过程
材料无 🪴 血清 🐼 培养基（DMEM/F12 或 🌳 alphaMEM）
胎 🦅 牛 🐴 血清 (FBS)
抗生 🌸 素（青霉素 🐋 /链 💮 霉素）
L谷 🦈 氨 🍁 酰胺
胰 🦈 蛋白酶 🐠
培养板和培养瓶 🐡
细 🐘 胞刮刀
步骤1. 组织收集 🕊
从供体 🐘 中收集富含间充质干细胞的组织，例如骨髓、脂肪 🐼 组织或脐带血。
2. 组织 🦁 消化
使用胶原 🦋 酶或其他酶来 🐒 消化组织，将干 🍁 细胞释放出来。
3. 细胞分 🐎 离
将消化后 🦆 的组织过滤以去除碎屑。
通过离 🦟 心或梯度 🐎 离心法分 🐛 离间充质干细胞。
4. 细 🐞 胞培 🐕 养 🐞
将分 🐘 离的干细胞 🌵 悬浮在无血清培养基 🐝 中，并添加 1020% FBS。
将细 🐒 胞培养在培养板或培养瓶中。
添加抗生素和 L谷氨酰胺以防止 🐶 污染和促进生长。
5. 细 🌾 胞扩 🐧 增 🕸
每隔 34 天更换培 🦆 养 🐦 基。
当 ☘ 细胞长到 7080% 融合时 🦢 ，使用胰 🐟 蛋白酶将其传代。
6. 细胞 🦍 传代 🐳
用胰蛋白酶消化细胞，然后将它们传代到 🦈 新的培 🌳 养板或培养 🌸 瓶中。
传代 🪴 比例通常 🐎 为 1:2 或 💐 1:3。
7. 细胞鉴定 🐝
使用免疫表型（例如 CD73、CD90 和 CD105）或（多能性标记例如 SSEA4）对干细胞 🌸 进行鉴定。
也可以使用功能性测定（例如成骨分化或成软骨分化）来确认 🐎 干细胞 🐒 特性。
8. 冻 🦁 存 🕊 和解冻 🐕
对于长 🐯 期保存，可以将细胞冷冻在 liquid nitrogen 中。
解冻 🦢 时，将细胞置于 37°C 的，水浴中然后进行 🦢 离心并重新 🍀 悬浮在培养基中。
注意事项使用无菌技术以防止污 🌷 染。
定 🐺 期监测细胞生长并根据需要进行 🦍 传代。
避免过度传代 🐟 ，因为 🌸 这可能会降低干细胞 🕸 的增殖和分化能力。
确保 🐯 培养基和血清 🐬 的质量和一致性。
