肿瘤干细胞行侵袭实验（肿瘤干细胞的干性 🦅 主要表征）
- 作者: 张伊洛
- 来源: 投稿
- 2025-09-08
1、肿 🐟 瘤干细胞行 🦢 侵袭实验
肿瘤 🌿 干 🪴 细胞侵 🐠 袭实验
目的：评估肿瘤 🌹 干细胞（CSC）的侵 🦍 袭能 🌼 力。
材料：肿瘤细胞系或分 🐞 离的 CSC
Matrigel 入 🌲 侵室
培养基Boyden 氏 🦟 试 🦅 剂盒或 🐬 类似装置
步骤：1. 制备 Matrigel 入侵室：将 Matrigel 稀释的涂覆在入侵室的滤膜上 🐳 ，形成一层一层屏障。
2. 悬浮细胞：将肿瘤细 🌻 胞 🌻 或悬浮 CSC 在无血清培 🐳 养基中。
3. 填充入侵室：在入侵室 🐴 的上室中加 🐒 入悬浮的细胞。
4. 加入培养基：在下室中加入含促侵袭因子的培养 🦊 基。
5. 培养：将入侵室培养在 37°C、含有 5% CO2 的培养箱中培 🦋 养，时间根据细胞类 🍀 型和实验目的而定 🐠 。
6. 固 🐱 定和 🌹 染色：培养结束时，取，出入侵室并固定和染色细胞例如结晶紫染色或染色 HE 。
7. 计数侵袭细胞：用显微 🌸 镜计数穿透 Matrigel 屏 🐠 障并出现在入侵室下室中的细胞。
分析：侵袭指数 = 下室细胞计 🌹 数 / 上室 🦉 细胞计数
比较不同 🦈 处理条件下的侵袭指数，以评估的 🐯 侵 🌾 袭 CSC 能力。
注意 🐝 事 💮 项：
选择适当的 🕊 Matrigel 浓 🐧 度和培养时间，以确保细胞侵 🐧 袭而不会对细胞存活造成显着影响。
使用对照组来排除基质蛋白降解或其他 🐎 非特异性因素的 🐺 影 🌿 响。
考虑细胞类型和来源的潜在差异，这些差异可能会影响侵袭 🐕 能力。
2、肿瘤干细胞的干性主要表 🦆 征
肿瘤干细胞的干性主要表 🦟 征：
1. 自我更新 🐞 能力 🦈 ：
能够产生与自身具有相 🌴 同分化潜能的子代细胞 🐞 。
在体外培养条 🦉 件下形成 🐒 类克隆球。
2. 分 🌿 化能力 🌾 ：
能够分 🦁 化 🍁 成肿瘤中发现的不同类型细胞。
在体外和体内形 🦅 成异种移植瘤。
3. 化疗和放疗耐受 🌾 性 🌷 ：
对传统 🐒 化疗和 🍁 放疗具有更高的耐 🦢 受性。
可能是肿瘤复发和转移的原因 🐦 之一 🦢 。
4. 表面标志物 🦉 ：
表达特定 🐡 的 🕸 表面标志物，例如 CD44、CD133、CD24 和 🦁 ALDH。
这些标志 🐞 物可用于分离和鉴定肿瘤干细胞。
5. 信号通 🌷 路：
激 🐒 活特定的信号 🐴 通路，例如 Wnt、Hedgehog 和 Notch。
这些信号通路 🕷 调节肿瘤干细胞的自我更新和分化。
6. 代谢 🐅 特 🐯 性：
依 🪴 赖于糖酵解和自噬等葡萄糖代谢途径。
具有 🌻 独特的代谢谱，可用于识别和靶向肿瘤 🐧 干细胞。
7. 微 🌳 环 🐯 境 🐬 ：
与肿瘤微环境相互 💮 作用，包括基质细 🐬 胞、免疫细胞和血管系统 🦟 。
微环境可 🐒 以 🦟 调节肿 🌼 瘤干细胞的存活和功能。
8. 转化潜 🌳 力 🦟 ：
能够启动肿瘤 🐈 形成 🐋 。
在小鼠模型中 🦋 形成肿瘤。
9. 肿瘤 🐕 异质性 🐞 ：
在肿瘤内表现出 🐟 异质 🐶 性，具有不同 🌸 的干性水平。
高干 🦅 性的肿瘤干细胞可能 🐋 对治疗 🌺 更具抵抗力。
3、肿 🕸 瘤细胞侵袭实验步骤
肿瘤细胞侵袭实验 🐼 步骤
材料肿瘤细胞 🌼 系
Matrigel
培养基孔径 🐵 8μm的Transwell小室 🍁
Boyden腔 🐟 室 🦍
显微镜方法
1. 制备Matrigel涂 🐺 层 🦋
将Matrigel稀释至 🦉 所需的浓度 🍀 ，通常为1:10。
将稀释后的Matrigel涂抹在Transwell小室 🦟 或Boyden腔室的 🌻 底部。
将腔室放置在37°C的孵箱中孵育过夜，以允许Matrigel固化 🦋 。
2. 接 🐈 种肿 🐟 瘤 🌴 细胞
将肿瘤细 🌸 胞 🦄 悬浮在培养基中。
向Transwell小室或Boyden腔室的上腔室接种肿瘤细 🦋 胞。
3. 孵 🐯 育 🦁
将腔室 🐛 放置在 🐎 37°C的孵箱中孵育2448小 🦍 时。
4. 去除未 🦅 侵袭细胞
孵育 🌷 后，用，棉签轻轻擦拭 🐦 腔室的上腔室以去除未侵袭的细胞。
5. 染 🌼 色和计 🦉 数 🦋
用甲醇固定 🐧 腔室中的细胞 🐒 ，然 🌼 后用结晶紫染色。
使用显微镜在腔室的底 🐱 部计数侵袭的细胞 💐 。
6. 计 🌵 算 🐯 侵袭指 🐅 数
将侵袭细胞数 🐕 除以接种 🐯 细胞 🐠 数，得到侵袭指数。
注意事项根据不同的 🌷 实验目的，Matrigel浓度和孵育时间可能需要 🌳 优化。
确保 🌲 去 🌼 除腔室上腔室中的未侵 🌸 袭细胞，以获得准确的结果。
使用 🦈 染色技术的细胞计数可 🌸 能会受主观性影 🐯 响。
可以 🌷 通过使用荧光显微镜或化学发光检测方法来改进细胞计数的准确性。
4、肿瘤干细胞 🌸 的研究进展 🍀
肿瘤 🐯 干 🦉 细 🦆 胞的研究进展
定义肿瘤干细胞 (CSC) 是具有自我更新和多向分化能力的 🐛 一小群癌细胞。它们被认为是癌症复发、转。移和治疗耐 🌻 药 🐎 的根源
识别 🐺 和 🐕 表征
研究人员使用特定表面 🐬 标志物和功能性测定来识别 🌹 和表征 CSC。一些常见 🦍 的标志物 CSC 包括：
CD44
CD133
ALDH1
Sox2
Oct4
自我 🌴 更新和多向分化
CSC 能够自我更新，产生更多的 CSC，并分化成不同类型的癌细胞。这。种能力使它们具有 🐠 极强的肿瘤发生潜能
肿瘤的异质性和 🐶 耐 🐛 药性
CSC 被认为是肿瘤异质性的根源，导致治疗 🕊 耐药。CSC 可，以通过多种机制避开传统疗法例如：
耐受 🦅 化疗和 🐴 放疗 🐘
逃 🐦 逸 🌻 免疫 🐕 监视
启动细胞 🦊 凋亡途 🐈 径
治疗策略针对 CSC 的治疗策略旨在消除或抑制这些细胞 💮 的 🌼 自我更新和分化能力。一些有前途的策略包括：
靶向 CSC 标志物 🦊 ：开 CSC 发 🐬 针对特异性标 🌵 志物的抗体或小分子抑制剂。
抑制自我更新途径：靶向 CSC 中负 🐠 责自我更新的信号通路。
微环境 🌳 调节：改 🐧 造肿瘤微环境以抑制 CSC 的存活和 🐎 增殖。
免疫疗法：利用免 🦈 疫系统靶 🦢 向 CSC。
当前进展CSC 研究正在迅速发展，涌现了令人兴奋 🐎 的发现：
鉴定新的 CSC 标志物，提 CSC 高了检测和表征的准 🌷 确性。
发现了 CSC 在肿瘤进 🕷 展和转 ☘ 移中的关键 🐠 作用。
正在开 🐼 发新的治疗策略 🐳 ，具体靶向 CSC，增强 🐎 治疗效果并减少耐药性。
挑战和未来 🌴 方 🦍 向 🌷
尽 🦈 管取得了进展，CSC 研究仍面临 🦊 一些挑战：
不同癌症类 🐛 型的 🐎 CSC 异质 🐞 性
缺乏有 🌸 效的 CSC 治疗靶点 🌼
了解 CSC 与肿瘤微环境之间的相 🦈 互作用
未 🐘 来，CSC 研究将继续专注于：
鉴定 🕷 新 🕊 的 CSC 标志物和靶点 🌵
探索 CSC 在肿瘤进展和 🐛 治疗耐药性中的 🐯 机制
开发更有 🕊 效的针对的 CSC 治疗策 🐘 略
