大鼠干细胞慢病毒转染 🦁 （大鼠干细胞慢病毒转染的原因）
- 作者: 杨艺澄
- 来源: 投稿
- 2025-07-12
1、大鼠 🌹 干细胞慢病 🐡 毒转染
大鼠干细 💐 胞慢 🦍 病毒转染
目 🌷 的： 向大鼠干 🌷 细胞中导入 🐒 目标基因。
材料：大鼠干细 🌼 胞
慢病 🐠 毒载体（含有目标基 🐞 因）
聚凝 🐕 胺（如聚 🐶 精胺 🐬 ）
培养基培养板或培养 🍁 皿 🐒
移液器孵箱
步骤：
1. 准 🐴 备 🦊 细胞 🌹 ：
在培养 🦄 板上或培养皿中铺好大鼠干细胞。
确保细胞处于 🐦 对数生长期。
2. 稀 🦈 释 🌷 慢病 💐 毒：
根据制造商的说明 🐺 ，稀释慢病毒至适当浓度（通 🐧 常为 10100 转染单位 🌼 (TU)/毫升）。
3. 加 🌼 入聚凝胺：
向稀释后的慢病毒中加入聚凝胺。这。将帮助病毒与细 🐱 胞相互作用
4. 感染细 🌹 胞：
将 🌷 慢病毒与聚凝胺混合物加入细胞培养基中。
轻柔地摇晃培 🌵 养皿，确保 🌷 病毒分 🌿 布均匀。
5. 孵 🌳 育细 🌴 胞 🦊 ：
将细胞 🌸 孵育在 37°C、5% CO? 下过 🌿 夜 🐒 。
6. 清洗 🍁 细胞：
次日，小心 🌾 地去除病毒培养基。
用新 💐 鲜培养基清洗细胞 🌸 两次。
7. 选择性 🦊 培养：
如果 🌵 慢病毒载体包含选择性标记，加入选择性培养基。这，将。杀伤未转染的细胞选择出转染的细胞
8. 验证转染 🐝 ：
使用荧光显 🦈 微镜或流式细胞仪验证转染效率。
使用适 🌷 当的技术（如 PCR 或测序）确认目 🐱 标基因的整合。
注 🌳 意 🐴 事项 🦢 ：
使 🐺 用经 🌷 过生物 🐞 安全认证的材料。
慢病毒具有 🦟 传染性，因此必须采取 🌵 适当的预防措施。
监测 🦢 细胞活力，并根据需要调整病毒浓度和孵 🌸 育时间。
使用适当 ☘ 的选择性标记 🕸 以确保仅 🦢 选择转染的细胞。
2、大鼠干细胞慢病毒转 🐕 染的原因
大鼠 🐧 干细胞慢病毒转染的原因 🐟 ：
1. 高 🌲 转染效率 🐺 ：
慢病毒具有很高的转染效率，能，够感 🌺 染分裂和非分裂细胞包括干细胞。
2. 长 🦍 期 🐡 表 🌳 达：
慢病毒整合到宿 🐧 主细胞的基因组中，产生持续的基因表达。这。对于需要长期改变干细胞功能或表型的 🐡 研究非常有用
3. 低免 💐 疫原性 🐼 ：
慢病毒的包膜蛋白质经过修饰，以降低免 🐞 疫系统对转染细胞的识别和攻击。这，使。得慢病毒转染更 🦈 安全减少了排斥和炎症反应
4. 稳 🌻 定整合：
慢病毒整合到宿主细胞基因组的特定位点，确保基 🐅 因表达的稳 🐬 定和可预测。
5. 多种 🐵 载体选择 🐅 ：
有各种慢病毒载 🌺 体可供 🕸 选择可，以携带不同大小的基因插入物。这。使研究人员能够 🐈 根据需要定制转染
6. 适用于特 🌼 定 🦁 应用：
慢病毒 🍁 转染特别适用于研究干细胞分化、再生医学和基因治疗。通过改变干细胞 🐛 的功能或表达慢病毒转染，可、以。促进组织修复治疗疾病或开发新型细胞疗 🍀 法
3、大鼠干 🐦 细胞慢病毒转染方式 🐶
大鼠干细胞 🕊 慢病毒转染方式
材料：大 🐈 鼠 🌷 干细胞 💮
慢病 🌵 毒载体
聚精蛋 🌸 白转 🐞 染试剂
完全 🐡 培养基 🕸
抗 🌼 生素（如青霉素链霉 🐦 素）
步骤：1. 细 🍁 胞 🌴 准备 🌾 ：
将大 💐 鼠 🌸 干细胞培 🕊 养至7090%融合度。
从培养基中去 🐯 除细胞，用含 🐒 抗生素的完全培 🌸 养基洗涤。
2. 病毒感 🐵 染：
将慢 🌷 病毒 🐟 载体和聚精蛋白转 🌳 染试剂稀释到培养基中。
将病毒 🐬 溶液添加到细 🐞 胞中，轻轻混合 🌼 。
以 🌾 37°C、5% CO2孵育细胞8小时或 🦋 过夜 🦍 。
3. 去除 🐟 病毒：
8小时后，用 🐠 含抗生素的 🌷 完全培养基仔 🦈 细洗涤细胞3次。
更换 🕷 新鲜的完 🐎 全培养基。
4. 药物 🐋 选择（可选）：
如果慢病毒载体包含抗生素抗性 🐺 标 🌲 记，则在感染 ☘ 后24小时添加相应的选择抗生素。
定期更换含抗生素的培养 🐞 基。
5. 转染 🦍 细胞筛选 🐕 ：
使用荧光显微镜或流式细胞术筛选转染细胞，具体取决于慢病毒载 🦄 体的荧光标记。
收集转染细胞 🐕 进行进一步培 🐼 养或 🌳 分析。
注 🌼 意事 🐺 项：
使用适当的个人防护 🌸 装备（PPE），因为慢病毒 🐬 具有生物 🐠 危害性。
优化病毒 🌺 感染效率可能需要尝试不同的聚精蛋白转染试剂浓度和孵育时间。
确保在使用前将慢病毒载体正确 🐡 滴定。
抗生素选择 🌸 的浓度应根据慢病毒载体的标记基因而 💮 定。
4、大 🐕 鼠干细胞慢 🦈 病毒转染途径
大鼠干细胞慢 💮 病毒转染途 🌻 径
简介慢病毒转染是一种强大的技术，用于向细胞中递送外源基因。它，利用。缺 🦄 乏复制能力的逆转录酶病毒来整合外源基因到宿主细胞 🦈 的基因组中实现稳定的基因表达
材料大 🌳 鼠 🐺 干 🐅 细胞
慢 🦋 病毒载体
聚 🐝 凝 🪴 胺 🌲 （Polybrene）
生 🦁 长 🐼 培 🐈 养基
步骤1. 制备 🌴 慢病 🐋 毒颗粒 🍁 ：
将慢病毒载体与包 🐴 装载体共 🐒 转染到 293T 细胞中。
4872 小时后，收集病毒上 🕸 清并通过离心去除细胞 🐅 碎片。
使 🐡 用浓缩试剂（如 PEG 沉淀）将病毒浓 🐛 缩。
2. 预处理大鼠干细胞 🦢 ：
将大鼠干细胞接种到培养板上并使其 🌺 达到 7080% 的汇合 🐯 度。
在转染前 24 小时，用 🦁 新鲜的生长 🦍 培养基更换培养基。
在转染前 💮 30 分钟，将，聚凝胺添加到细胞中最终浓度为 8 μg/mL，以提高病毒感染率。
3. 转 🐕 染 🦆 ：
将准备好的慢病毒颗 🐒 粒添加到细胞培养基中，最终 🐼 病毒滴度为 10^710^8 TU/mL。
孵 🦉 育细胞 🐘 2448 小时。
4. 选择转染细胞 🐝 ：
转染后，用，新鲜的生长培养基更换培养基并加入适当的抗生素或荧光报告蛋白来筛 🐵 选转染的细胞。
持续培养细胞 🦁 ，去除 🌸 未转染的细胞 🐞 。
5. 验 💮 证转染：
使用 PCR、qPCR、免疫荧 🐎 光或其他 🌷 方法验证目标基 🐎 因的整合和表达。
注意事项使用适 🦄 当的安全措施，因为慢病毒具有生物危害性。
优化病 🐝 毒滴度和 🐎 转染时间，以获得最佳的转染效率。
使用针对目标细胞的特异性 🌴 慢 🐝 病毒载体，以提高整合特异性和减少脱靶效应 🐬 。
仔细监控转染 🐬 效率，并 🦊 使用适合的筛选方法 🐵 选择稳定的转染细胞。
