脂肪干细胞dna提取（脂肪干细胞dna提取实 🐴 验报告）
- 作者: 郭珺珩
- 来源: 投稿
- 2025-05-13
1、脂肪干 🕊 细胞dna提取 🦋
脂肪 🐟 干细胞 🌲 DNA 提取
材料：新 🦢 鲜脂肪组织（15 克）
0.25% 胶 🐶 原酶 🦋 （20 mL）
生 🐛 理 🦁 盐 🍁 水（PBS，50 mL）
离 🌺 心 🐱 管 🍁 （50 mL）
微 🐕 量 🍀 移液 🐴 器
涡 🌿 旋混合 💐 器
培 🐝 养箱（37°C，5% CO2）
滤 🐛 网 🍀 （70 μm）
步骤：1. 组织 🌼 消化 🌻 ：
将脂肪组织洗涤三次，每 🐋 次用 🌷 PBS 50 mL。
将脂肪组 🐟 织 🐝 置于含有 20 mL 0.25% 胶原酶的 50 mL 离 🐎 心管中。
在 37°C 孵育 12 小 🌷 时，每 30 分钟涡旋混 🌲 合一次。
2. 过 🐅 滤 🌵 ：
将消化后的组织 🦍 用 70 μm 滤网过滤到新的 50 mL 离 🕷 心管中 🦈 。
用 PBS 洗 🐧 涤滤网 🐋 直至 🐞 滤液变清。
3. 离 🌹 心 🍁 ：
将滤 🌺 液在 2000 x g 下 🦋 离心 15 分钟。
4. 脂 🐅 肪层 💐 收集 🦆 ：
上清液中含有干细胞 🌾 ，而脂肪层位于沉淀物上。
小心吸取脂 🌸 肪层并将其转移到新的离心管中。
5. 重悬和 💮 离 🕊 心：
用 PBS 重悬脂肪层，然后在 2000 x g 下离心 5 分钟 💮 。
6. DNA 提 🕸 取 🐘
根据提取试剂盒的说明 🌳 进 💐 行 🐦 提取 DNA 。
产物：高质量的脂肪干 🌷 细胞 DNA，可，用 🐠 于后续分析例如 PCR、测序或 🌷 芯片杂交。
2、脂肪干细胞dna提取 🌿 实验报 🌳 告
脂肪干细胞 DNA 提取实验报告 🦁
实验目的从脂肪组织中提取高纯度 🐅 的脂肪干细胞 DNA，用于后续基因分析。
材料和 🐼 方法 🕊
材料新鲜脂肪组 🕸 织
胶 💐 原 🌺 酶 🌷 I
磷酸缓冲 🐝 液 🌼 (PBS)
胰 🐘 蛋白 🦁 酶
胎 🐳 牛 🌹 血 🦈 清 (FBS)
流 🐱 式细 🌻 胞 🐒 仪
DNA 提 🐘 取试剂盒 🐬
定量仪方法
脂 🐎 肪 🦢 组织消化
1. 将新鲜脂肪组织 🕷 切成小块，用 PBS 洗涤。
2. 加入胶原酶 I 溶 🐋 液 🦁 ，并在 37°C 下消化 1 小，时期间每 15 分 🌷 钟搅拌一次。
3. 将溶液 🌲 通过 🐴 100 μm 滤 🐕 网过滤，去除组织碎片。
细胞分离1. 将过滤 🐘 后的溶液离心 10 分钟，4°C，300 x g。
2. 弃去上清 🌷 液，用 PBS 重悬 🦊 细胞沉 🍁 淀。
3. 将细胞悬液通过胰蛋白酶消化 15 分 🐈 钟 🐵 ，37°C。
4. 加入 🦆 FBS 灭活 🐛 胰蛋白 🌻 酶。
流式 🐞 细胞仪 🐈 分选
1. 将细胞悬 🌳 液标 🐕 记为 CD31、CD45，CD90+ 和 CD105+。
2. 使用流式 🌷 细 🍁 胞仪分选出阳性的脂肪干细胞。
DNA 提 🕸 取 🐒
1. 将分选出的脂肪干细胞用 DNA 提取试剂盒进 🌼 行裂解和纯化。
2. 使用 🐺 定量 🐺 仪测量提取的 DNA 浓度 🐎 和纯度。
结果DNA 纯 🐯 度 🕷
提取 🐡 的 DNA 为 🕸 高纯度 🦁 ，260 nm/280 nm 吸光度比值在 1.82.0 之间。
DNA 浓度 🐳
从 1 克脂肪组织 🦋 中提取的平均 DNA 浓度为 200 ng/μL。
流式 🦁 细胞仪 🦟 分析 🌷
流式细胞仪分析显示分 🐕 ，选出的脂肪干细胞纯度超过 95%，阳性标 🐅 记为 CD90 和 CD105，而阴性标记为 🐝 和 CD31 CD45。
结论从脂肪组织中成功提取了 🌷 高纯度的脂肪干细胞提取的 DNA。浓度高纯度 DNA 良，好，适。用于后续基因分析
3、人体脂肪 💮 干细胞是哪里提取的?
腹 🐵 部或大腿
4、脂肪干细胞dna提 🪴 取技术 🦉
脂肪干细 🐴 胞 🕊 DNA 提取 🦋 技术
1. 脂肪 🌻 组 🐠 织收集 🦢
从供体处通 🦋 过抽脂术收集脂肪组织。
脂肪组织在无菌 🐈 条件下 🐬 进行处理，以去除血液和其他 🌸 杂质。
2. 脂 🐒 肪消 🌾 化 🦊
将脂肪组织与胶原酶溶液孵育，以消化细胞外基质并释放脂 🐱 肪干细胞。
3. 离 🐬 心 🦍
消化 🦍 后的悬液进行离心，分离出脂肪干细胞。
脂肪干细胞聚集在沉淀物中，而液体包括杂质和脂 🐦 质。
4. 洗 🌾 涤 🐦
用洗涤 🐡 液重复 🌷 洗涤沉淀物以去除任何残留的杂质。
5. DNA 提 🦟 取 🐠
从洗涤后的脂 ☘ 肪干细胞中提取 DNA，使 🦢 用商业试剂盒或标准提取 DNA 协议。
常见技术包 🦢 括酚氯仿抽提、硅胶柱纯化和磁珠法。
6. DNA 定 🍀 量 🌳
使用分 🪴 光光度计或 🌿 荧光计定 🐎 量提取的 DNA。
DNA 浓度通常用纳 💐 克/微升表示。
7. DNA 质量 🌵 评估 🦉
通 🦅 过琼脂糖凝胶电泳评估提 🐘 取的的 DNA 质量和 🐟 完整性。
完整的 DNA 产生出 🦍 清晰 🦄 且的??条带 🐠 。
技 🐶 术注 🦊 意 🐅 事项
使用无 RNase 的试剂和设备至 🐕 关重要，以 🌸 防止 RNA 污染。
适当的细胞悬浮液制备对于高效的细胞溶解和 DNA 提取 🐅 至关重要。
DNA 定量和质量评估对于确保高品质和可信赖的 🦁 结果至关重要 🐵 。
应用脂肪干细胞 🌵 研究
再生医学和 🐺 组织工程
疾 🦆 病 🐵 诊断
法医学和身份识 🐒 别 🕸
