如何 🐧 分离培养牙髓干细胞（如何分离培养牙髓干细胞和细胞）
- 作者: 郭沫雅
- 来源: 投稿
- 2025-10-11
1、如何分离培养牙髓干细 💐 胞
如何分 🌳 离培养 🐒 牙 ☘ 髓干细胞（Dental Pulp Stem Cells，DPSCs）
材料：健康的脱落乳 🦅 牙 🐘 或拔除的智齿
牙髓针或注射 🦆 器
生理 🌹 盐水
培养基（例如含 10% 血 🪴 清的培养基 🐋 DMEM ）
抗生素（例如青霉素、链 ☘ 霉素）
胰酶培养 🦁 皿或细胞培养瓶
步骤：1. 分离牙 🦍 髓：
用生 🦋 理盐水清洗 🐬 牙齿，去除任何碎屑或血液。
使用牙髓针或注射器小心地从牙 🐛 髓腔 🦅 取出牙髓。
将牙髓转移到含有生理盐 🌾 水 🦢 的培养皿中。
2. 消化牙 🌴 髓：
用 🌺 胰酶消 🌷 化牙髓约 30 分钟，以分离细 🦍 胞。
添加培养基以 🌲 终止消化过程。
3. 离心 🌸 和收集细胞：
将消 🐋 化后的悬液在离心机中以 🐕 离心 1200 rpm 分 🌾 5 钟。
小心 🐋 吸出上清 🌸 液。
用 🐝 培养基重悬细 🦢 胞 💮 沉淀。
4. 培 🦢 养 🕷 细胞 🌹 ：
将细胞 🦍 转移到培养皿或细胞培养瓶中，并 🪴 加入含抗生素的培养基。
在 37°C 和 5% CO2 的潮湿 🌷 环境中培养 🐼 细胞 🐼 。
5. 形 🦍 态观 🐛 察 🐱 ：
定期观察培养物下的细胞，以 ☘ 监测 🌵 生长和形态。
DPSCs 通常表 🌲 现为纺锤状或多边形，并具有高核质比。
6. 确认 🐡 DPSCs：
可通过免疫表型分析（例如流式细胞术）确认通 DPSCs。DPSCs 常表达表面标记 🌷 物如，和 STRO1、CD146 CD105。
也可以进行多向分化试验，证实 DPSCs 能够分化 🌳 为成骨细胞成、牙 🌻 本质细胞和其他间充质细胞系。
提示：使用新鲜的 🌲 牙齿分离细胞非常重要，以获得最佳的细胞活力。
在无菌条件下进 🐦 行所有步骤，以防 🌷 止污染。
DPSCs 培养需要特别的培养基，含有特定的生长因 🌻 子和血清。
培养时间因 🐳 细胞密度和培养条件而异 🦢 。
2、如何分 🐋 离培 🐼 养牙髓干细胞和细胞
如何分 🦊 离 🐛 和培养牙髓干细胞
材料：新 🕊 鲜 🐼 拔出的牙齿
无菌的手术 🌹 刀片 🐡 或解剖剪 🐝 刀
无 🌵 菌的镊 🦋 子 🌴
无菌的 🕊 培养 🦈 皿
无菌的培养基：含 10% 胎牛血清的 Dulbecco's 改良 🌺 鹰氏培养基 🐼 (DMEM)
抗生素：青霉素 🦊 链霉素
电流 🕷 显 🦍 微 🌲 镜
步骤：1. 拔 🍀 牙和牙髓提取 🦍 ：
拔出健康的 🌼 牙齿。
用消毒溶液冲洗牙齿 🕸 。
用手术刀片或解剖剪刀纵向切 🦢 开牙 🦆 齿。
用镊子 🐎 小心 🦟 地取 🌷 出牙髓。
2. 牙髓组 🌻 织的消化：
将牙 🐘 髓组织转 🪴 移到培养皿中。
加 🦋 入 🍁 含胶原酶 IV 或胰酶的消化液。
在 🦍 37°C 下孵育 🐅 3060 分钟，或根据酶制造商的说明进 🕊 行操作。
3. 细胞悬 🍁 液的制备 🐒 ：
用无菌培养基冲洗消化后 🕸 的组织。
用移液器将 🌹 组织悬浮在培养基中。
过 ☘ 滤悬液以 🐒 去除任 🌳 何未消化的残骸。
4. 干细胞 🦊 的扩增：
将细胞悬液转移到含有无菌培养基和抗生素的培 🐈 养皿中。
将培 🌸 养皿置于 37°C 湿度 🦅 95% 的培 🐶 养箱中。
每 34 天更换培养基，或根据细胞生长 🪴 情况进行操作。
5. 干 🐧 细 🐧 胞的 🦋 表征：
使用电流显 🐝 微镜检 🦅 查细胞形态。
使用免疫 🐱 细胞化学或流 🐧 式细胞术对干细胞标志物（例如 STRO1、CD44、CD105 等）进行表征。
细 🌵 胞分选 🐵 ：
对于需要纯化特定亚群细胞的情况，可以使用 🐎 以 🦆 下方法：
磁性细胞分选（MACS）：使用磁性珠选择 🐅 特定表面标志物的细胞。
流式细胞术分选：使用荧光标记抗体，通过流式细胞 🌵 仪物 🦍 理选择特定细胞亚群。
注 🐵 意 🦄 事项 🌲 ：
使用无菌技术并 ☘ 在 🐺 无 🐺 菌条件下进行所有步骤。
谨 🌷 慎处理酶和化学试剂。
定期监 💐 测培养物以确保细胞健康和生 🐬 长 🐺 。
3、如何分离培 🌿 养牙髓干细胞 🐬 的方法
材料：新鲜 🦁 拔除的健康牙髓
无菌培养 🍀 基（如αMEM、DMEM）
胎牛血清 🐋 （FBS）
抗 🦉 生素（如青霉 🍀 素、链霉素）
胶 🐺 原 🌹 酶 I、II、IV
胰 🐈 蛋 🐺 白 🕷 酶
培养皿培养瓶
细 🐅 胞 💮 分 🦋 离器
流式细胞仪（可选 🐅 ）
步骤：1. 取材 🌻 和消化
将新鲜拔除的 🐅 牙齿在无 🐬 菌环境 🐅 下冲洗干净。
使 🐼 用无菌器械剥离牙髓 🐦 ，避免污 🌾 染。
将牙髓切成小块，加入含有胶 🐧 原酶、胰蛋白酶和抗生 🦄 素的消 🐡 化液中。
在 37°C 下孵育 12 小时，或直至牙 💐 髓组织软化。
2. 细胞 🐴 分离 🌲
将 🌿 消化后的细胞悬 🐳 液过滤通过 70 微米的细胞分离器。
用无 🦍 菌培 🪴 养基 🦋 洗涤细胞并离心。
3. 培养 🐟
将 🐛 细胞重悬于含 10% FBS 和抗生素的培 🦟 养基中。
将 🌷 细胞接种到培养皿或培养瓶中。
在 37°C、5% CO2 的湿润环境下培养细 🌸 胞 🦉 。
4. 培 🐈 养基更 🐈 换
每 23 天 🐝 更换一次培养基。
去 🦉 除 💐 旧培养基并用 🐺 新鲜培养基补充。
5. 细胞 🦢 传代 🐶
当细胞密度达到 8090% 的 🌸 融合度时，进 🐒 行传代。
用胰蛋白酶处理细胞并重新接种到新 🦄 的培养器皿中。
6. 特 🐛 征鉴定（可选）
流式细胞仪可用于检测 🦈 牙髓干细胞表面的特定标记物 🌳 ，如 CD29、CD90 和 🌷 CD105。
成骨分化培养 🌷 和染色可用于评估牙髓干细胞的成骨成釉质和牙本质形成能力。
注意事 🦊 项 🐴 ：
使用无菌技术 ☘ 以防止污染 🌲 。
定期监测细胞生长 🪴 情 🐋 况。
培 🐴 养前期通 🐝 常会出现一些非干细胞，随着传代可以逐渐去除。
牙 🐒 髓干细胞的增殖和分化能力因个体而异。
4、牙髓干细胞储存有 🐛 什么 🐞 用
牙髓干 🐴 细 🦊 胞储存的潜 🌾 在用途：
再生 🐕 牙科：
修复牙齿损 🕊 伤，如 🦊 牙髓炎或 🌷 创伤
促进牙科 🐠 植入 🌿 物和牙 🦈 桥的骨整合
再生牙齿组 🦆 织，如牙髓 🐋 牙、本质和牙釉质
神 🐎 经再 🐺 生：
修复神 🍁 经损伤，如脊 🦊 髓损 💮 伤或脑卒中
促进神经再生和 💐 功能恢复
免 🌷 疫 🦍 调节：
抑制免疫反应，预防或治疗自身免疫性疾病 💐
促进组织 🦅 移植的耐受性，减少排斥反应
软骨再 🐒 生 🦈 ：
修复关节软骨损伤，如骨关 🐦 节炎
促进 🐞 软骨组织生长和再 🦋 生
骨再生：修 🌿 复骨缺损，如骨折或骨质疏松
促 🍀 进骨 🌼 融合 🐋 和愈合
心 🐶 血管再生 🍀 ：
修复心血管损伤，如心 🌳 肌梗塞
促进 🌿 血管形成和组织再灌注
其他 🌻 潜在 🦊 用 🍀 途：
皮肤损伤的修 🌲 复
慢性疾病 🐞 的治疗（如帕金森症或阿尔 🐯 茨海默病）
个性化医 🌷 疗，为患者提供定制的治疗方案
抗 🐎 衰老 🐟 研究 🌵
需要注意的 🐒 是，这，些用途目前仍处于研究阶段牙髓干细胞储 🐯 存的实际临床 🐼 应用还在不断探索和开发中。
