流式干细胞检测样本处理（流式细胞 🦋 仪可以检 💮 测的标本有哪些）
- 作者: 陈锦烁
- 来源: 投稿
- 2025-09-07
1、流式 🦢 干细胞检测样本处理
流式干 🪴 细胞检测样 🐳 本 🦄 处理
1. 样 🐒 本 🌵 采集 🪴
从骨髓、外周血或脐 🦈 带血中采集样本。
抗凝剂（如 EDTA 或肝 🌺 素）用于防止凝血。
2. 单核细 🌴 胞 🐅 分 🐶 离
使用密度梯度离心或磁性珠分 🌸 离单核细胞 🐒 。
单核细 🐛 胞包含 🐬 干细胞和免 🦅 疫细胞。
3. 标记抗 🐅 体 🐡 染 🐝 色
使用荧光标记的抗体特异性结合干细 🌵 胞 🐺 表面标记。
例如，使用 CD34、CD45、CD133 或 🦁 CD117 抗体 🦈 。
4. 免疫固 🐶 定 🐈
用甲醛或 🐳 戊二醛免疫固定细胞，以保存细胞表型。
5. 穿 🌿 透 🐶 化
用 🌲 皂蛋白或 TritonX 等去污剂 🐼 穿透细胞膜，以便抗体进入 🌲 细胞内部。
6. 内染抗体染 🐞 色（可选）
使用荧 🍀 光标记的抗体特 🌳 异性结合细胞 🌺 内标记。
例如 🐦 ，使用 OCT4、SOX2 或 NANOG 抗体。
7. 洗 🐶 涤 🐛
洗涤细胞以去除 🦅 多余 🦈 的抗体和去污 🦊 剂。
8. 流式细胞 🌵 术分 🦄 析
将标记的细 🌷 胞通过流式细胞 🐼 仪。
检 🐬 测器收集荧光信号，以识别和量化具 🦁 有特定标记的干细胞。
最佳实践使用高品质的抗体和 🌳 试 🦟 剂。
优化所有步骤以最大化干细胞回收率和标记特 💐 异性。
使用适当的对照（未标记细胞和同种型对照抗体）进行背 🦉 景校正。
确保 💐 熟 🦉 练操作员进行流式细胞术分析和数据解释。
2、流式细胞仪可以检测的标本有哪些 🐳
流式细胞仪可以检测的标 💐 本包括：
血 🌸 液：全 🌺 血、分离血浆 🌸 或血清
骨髓 🦄 骨髓：穿刺液 🦄
组织：新鲜组织、冻结组 🐼 织或福尔马林固定组 🕷 织
细胞 🌵 培养物 🌲 细胞：株 🦈 、原代细胞
体 🌴 液：脑脊液、胸、腔积液腹腔积液
其他标 🐶 本：唾 🐕 液、尿液、粪 🦁 便
3、流式干细 🐧 胞检测样本处理流程图
流式干细胞检 🦢 测样本处理流程图
步 🐎 骤 1：收集 🐘 样 🐦 品
骨 🐦 髓、外周 🦅 血 🐡 或脐带血
步 🐺 骤 2：密度梯 🦄 度离心
分离单 🦅 核细胞（MNCs）
步骤 3：免疫磁珠 🐯 选择
使用特定的抗体 🐵 结合干细胞标 🦈 记物，例如 CD34
步骤 🌴 4：溶红 🐝 血细胞（RBCs）
去 🐎 除 RBCs 以提高纯度
步骤 5：计数和增 🐎 殖
使用血细胞计 🌲 数器计数细胞 🌻 数量 🐕
将细胞培养 🐧 用于增殖 🐺
步骤 6：流 🐴 式细胞术分选
通过标记特异性干细胞标 🕸 记物（例如 🦟 CD34、CD133）和（前体细胞例如 CD45、CD38）进行分选
步 🌷 骤 🐋 7：纯 🐳 化收集
收集纯化的干细胞或 🐬 前 🐶 体细胞群体
步骤 🐴 8：鉴定分析
使用免疫 🐧 荧光 🦟 染料进行免疫表型分析
进行功能分析，例如克隆形成能力 💐 或分化能力
4、流式细胞术样品准备要 🌼 求
流式 🍀 细胞 🦊 术样品准备要求
一、细胞类 🦆 型
单细胞 🐱 悬 🐞 液
活细胞或 🦅 固定细胞
细胞 🦁 数量：通常为 10^510^6 个细 🌳 胞 🌿 /mL
二、细胞 🐱 制 🦋 备
1. 收集 🐎 细 🐒 胞 🦁
从血 🐺 液、组织或 🐅 培养物中收集细胞。
使用无 🦉 菌技术，避免污染。
2. 制备单 🕸 细胞 🐱 悬液
机 🐳 械解离或酶消化组织 🐴 。
经滤器过滤细胞悬 🌿 液以去除细胞团块。
3. 洗 🦋 涤 🦆 细胞 🐅
使用 🐬 洗涤缓冲液 🌺 （如洗涤 PBS）细胞，去 🐼 除培养基或组织残留物。
高速离心（通 🦍 常为 300500 x g，5 分钟 🕊 ）沉淀细胞。
4. 红细胞裂解（如有必要 🌾 ）
对于 🌿 含红细胞的样品 🦄 ，使用红细胞裂解液裂 🐬 解红细胞。
按照制造商的说明 🌵 进行操作。
三、固定和通透 🐞 性（如 🌷 有必要 🐱 ）
固定剂：甲醛或戊 🦢 二醛
通 🐺 透剂：Triton X100 或 NP40
固 🦆 定和通透可以保存细 🍁 胞形态并增强抗体的渗透。
四、抗 🐛 体染色 🌷
使用荧光标记的抗体特异性染色细胞表面或细胞内蛋白 🐳 。
按 🦊 照制造商的说明优化 🐳 抗体浓度和孵育 🐶 条件。
五、其他 🐡 考虑因素
抗体选择 🐵 选择：针对特定靶标的高特异性抗 🐠 体。
对照 🦋 ：包含未染色样品或 🌿 同型对照以进行背景扣除。
细胞活力：使用活力染料（如 PI 或 7AAD）评 🐘 估 🐬 细胞活力。
细胞计数：使用血细 🐅 胞计数器或流式细胞仪计数细胞 🍀 。
样品保存：将准 🐒 备好的样品 🍁 保存在 4°C，最多 24 小 🌾 时。
