干细胞解冻复苏方案（干细胞解冻复 🌿 苏方案是什么）
- 作者: 杨舒念
- 来源: 投稿
- 2025-08-18
1、干 🕸 细 🐟 胞解冻复苏方案
干 🦉 细胞解冻 🐕 复苏方案
材料冷冻 🐦 干细 💮 胞 🐬
37°C 解冻培养基 🌸
离心机细 🐠 胞培养皿 🌴
培养基移液枪
无菌操 🕊 作台 🌴 （LAF）或生物 🐈 安全柜（BSC）
步骤1. 预热解冻培养 🐎 基
将 🐈 解冻培养基在培养 37°C 箱中 🐧 预热 10 分 🌼 钟或更长时间。
2. 快 🌵 速 🦟 解冻干 🍁 细胞
从液氮罐中取出冷冻的 🌺 干细胞管。
立即将 🦟 管放入 37°C 水浴中，持续摇动 12 分 🪴 钟。
不要过热或过度 🌵 解冻干细胞。
3. 稀 🌷 释 🌳 细 🐴 胞
将解冻的干细胞转移 💮 到含有预热 🌵 解冻培养基的无菌培养皿中。
轻柔地吹打 🌵 细胞以去除 🌺 任何团块。
用解冻培养基将 🌻 细胞稀释至 1x1062x106 个细胞/mL。
4. 离 🌴 心细 🦆 胞
在离心机中 🌹 以 🌷 离心 💐 250 x g 细胞 5 分钟，室温。
小心地吸 🌺 出上清液。
5. 重悬细 🐡 胞 🌾
用新鲜 🐟 培养基重悬细胞。
细胞密度取决于 🦆 特定细胞 🌴 类型和接下来的培养。
6. 培养 🌵 细 🐟 胞
将重悬细 🐦 胞接种 🐕 到 🌺 合适的培养皿中。
将 🐡 培养皿 🐞 置于 🕊 培养箱中，37°C，5% CO2。
在 24 小时内 🦍 监测细胞活力。
提示使用新鲜的解冻培养基，以 🐛 提供必要的营养物质。
避免在解冻过程中 🐝 过度操作细胞。
使用经 🐛 过 🌴 验证的无菌技术，以防止污染 🕸 。
根据特定的细 🪴 胞类型 🍀 调整细胞密度和培养 🌴 条件。
不同来源和类型的干 🐎 细胞可能需要不同的解冻复苏协议。
2、干细 🦆 胞解冻复苏方案是什么
干细胞 🐠 解冻 🐒 复苏方案 🦢
材料：液氮罐
干冰
37°C 水浴锅 🌿
培养基无 🐶 菌培 🐕 养 🐅 皿
移液枪无 🦟 菌吸管 🕷
步骤：1. 解冻 🌻 干细胞 🦍 ：
从 🌷 液氮罐中取出已冷冻 🐅 的干细胞安瓿。
将安瓿放入装有干冰的泡沫箱中 🐒 。
2. 快速 🌳 解 🌲 冻：
将安瓿从干冰箱中取出，并立即 🦍 放入 37°C 水浴锅中。
每隔几秒钟轻柔地摇 🐬 晃 🌷 安瓿，直到 🌸 冰晶消失。
3. 去除冷冻液 🌵 ：
使用无菌吸管 ☘ 小心地将安瓿中 🐦 的冷冻液转移到无菌培养皿中。
避 🐼 免吸入干细 🕷 胞 💮 。
4. 洗 🍁 涤 🐼 ：
培养基 🐬 中加入干 🐒 细胞，轻轻吹打混合。
离 🦅 心 🕷 5 分钟，4°C，300 x g。
小 🌸 心吸除 🦁 上 💮 清液。
5. 复 🐵 苏 🌾 ：
重新悬浮干细胞于新鲜培养 🌺 基中。
将 🐬 干细胞接种 🐎 到培养 🌷 皿中。
将培 🐈 养皿置 🐯 于培养 37°C、5% CO2 箱中。
注 🐴 意 🌿 事项 🐎 ：
快速解冻非常重要。迟 🌸 。缓的解冻会导致细胞损 🪴 伤
小心避免污染 🪴 。使。用无菌 🐶 技 🌻 术和材料
根据特 🐝 定细 🪴 胞类型调整培养基 🌳 。
解冻后立即复苏干细胞。长 🐡 。时间 🕷 的储存会损害细胞活力
监控细胞活力。在显微镜 🦆 下检查细 🦄 胞，以。评估生长和存活情况
3、干细 🌼 胞复苏的需要 🦊 多长时间
干细胞复 🐈 苏所需的时间因干细胞 🌹 类型 🌿 、处理方法和复苏条件而异。
胚胎干细 🐱 胞 (ESC)：通常需要 47 天才能从冷冻中复苏。
诱导多 🦈 能干细胞 (iPSC)：类似于 ESC，也需要 47 天的复苏时间。
间充 🌻 质干细胞 (MSC)：通常在 24 天内复苏。
造血干 🐧 细胞 (HSC)：复苏时间较长，可能需要 12 周。
影响复苏时 🌺 间的其他因素 🐧 包括：
冷冻和 🐛 复 🌿 苏 🐴 方法
干细胞的起 🐵 始数量
复苏培养 🐡 基和条件
特 🦍 定细胞系的复苏能力
重要的是要注意，这，些只是估计值实际复苏时间可能因实验室和实验条件 🦢 而异。
4、干细胞解 🌲 冻复苏方案有哪些
干细胞解 🦋 冻复苏方案
1. 快速解 🦅 冻
将冷冻管从液氮中取出，置于37°C水，浴中，轻轻搅拌直至干细 🕷 胞完全解冻。
该方法快速 🐟 但可能会损伤干细 🐕 胞。
2. 逐步解 🦅 冻
将 🦊 冷冻管从液氮中取 🐺 出，置于室温下12分钟。
在37°C水浴中，每12分，钟轻轻搅 🌾 拌 🌿 一次直至干细胞完全解冻。
该方法较慢但 🌲 对 💐 干细胞更温和。
3. 程序化解冻 🪴
使用专门的程序化解冻装置或仪器，按照预设 🌳 的程序逐步解冻干细胞。
该方法 zapewniaj?最大 🦆 限度的干细 🦢 胞存活 🐬 率。
具体步骤（适用于逐步解冻 🐈 方 🐡 法）：
1. 预热媒介：在37°C水浴中预 🐟 热解冻 🌿 媒介（如血清 🍀 或PBS）。
2. 置于室温：将冷冻 🕷 管 🦟 从液氮中取出置于室温，下 12 分钟。
3. 浸入解 🌹 冻媒介：小心地将冷冻管末端浸入预 🐯 热的解冻媒介中 3060 秒。
4. 快速转移 🦢 ：将冷冻管迅速转 🦋 移到37°C水浴中。
5. 反复解冻：每 12 分钟轻轻搅拌 🦟 一次，直到干 🐯 细胞完全解冻。
6. 稀释和离心：加入更多 🐯 解 🌿 冻媒介稀 🌳 释解冻的干细胞，并离心去除任何未解冻的物质。
其他 🌷 注 🍁 意 🦊 事项：
使用新鲜的解冻媒 🐧 介以防止污染。
解冻后，立即将干细胞转移到 🦋 培养基中。
密切监测解冻过程，确保干细 🐟 胞完全解冻且存活率高。
不同的干细胞类型可能 🌻 需要不同的解冻复苏方案。
