人类干细胞培养 🦋 方法（人类干细胞国家工程研究中 🐘 心）
- 作者: 杨思影
- 来源: 投稿
- 2025-10-03
1、人类干细胞培 🐺 养方法
人 🐯 类干 🌷 细胞培养方 🐘 法
1. 材 🌸 料 🦉
1.1 细胞培养 🌻 试 🌿 剂
无 🐋 血清培养基（如DMEM/F12）
血清（如胎 🐋 牛血清）
胰蛋 🦁 白 🌷 酶/EDTA
磷 🦅 酸缓 🦋 冲盐 💐 （PBS）
1.2 培养 🌵 基
无血清培养基：DMEM/F12 补充血清 🦅 1020% 和 12 mM L谷 💮 氨酰胺
血清培养 🌿 基：DMEM/F12 补充血清 1020% 和 12 mM L谷氨酰 🐎 胺
1.3 其 🍀 他 🐘 材 🕷 料
培养皿 🐱 或培养 🦉 瓶
细 🐶 胞 🌷 刮铲
吸管培 🐋 养箱（37°C，5% CO2）
2. 方 🐼 法 🌲
2.1 干 🌷 细胞 🐅 接 🦉 种
将干细胞悬浮在无血清培养基 🐧 中。
以 10^510^6 个细胞/ml 的密 🌹 度接种干 🦟 细胞到培养皿或培养瓶中。
在培养箱 🌵 中孵 🌼 育 23 天。
2.2 培养基更 🐱 换
每 23 天更 🐠 换 🐧 培养基 🐡 。
使用无血清培养基或血清培 🌴 养基，具体取决 🦆 于干细胞类型。
2.3 传代 🦅
当干细胞 🐘 达到约 7080% 汇合度时，将其 🦍 传代。
除去培养基，用 PBS 洗 🦍 涤细 🐕 胞。
加入胰蛋白 🐋 酶 🐦 /EDTA 溶液孵育 510 分钟，直到细胞脱落。
用无 🌾 血清培养基稀释胰蛋白酶/EDTA 溶液 🐘 ，并用细胞刮铲轻轻刮取细胞。
将细胞悬浮在新鲜的 ☘ 无血清培养基或血清培养基中，并重新接种到培养皿或培养瓶中。
3. 注 🐘 意 🕸 事 🐦 项
保持无 🐕 菌 🐠 操 🐴 作。
干细胞培养 🌸 条件应根据具体干细胞类型进行优化。
传代次数过多会降低干细胞 🐝 的自我更新能力和分化潜力。
避免过度汇合，因为这会抑制干 🐘 细胞的生长。
2、人类干细胞国家 🦁 工程研究 🦉 中心
人类干细胞国家 🐈 工程研究中心
“人类干细胞国家工程研究中心”是国家重点研发计划重大科学研究任务的实施机构，由中国科学院生物物理研究所中国科学院、深、圳、先进技术研究院天 🐒 津市人体干细胞应用重点实验室清华北大生命科学联合中心共同承担。
中 🌻 心使 🌴 命 🌲 ：
推动人类干细胞基础研 🦢 究和 🌿 应用转 🌹 化
构建具有自主知识产权的干细胞 🌹 技术 🍁 体系
为重大疾 🐡 病治疗和再生医学发展提 🐠 供科技支撑
研 🦟 究领域 🐶 ：
干细胞 🐕 基础研究（胚胎干细胞、诱、导多能干细胞组织干细胞）
干细胞分化 🌺 调控和体外 🕷 培养 🦄
干细胞疾病建模和药 💐 物筛选
干细胞 🦊 移 🍀 植和再生医学
干细胞伦 🦁 理和社会影 🐒 响
主要 🦄 成 🪴 果 🌸 ：
建立了国内领先的人类 🌲 干细胞 🐒 生物资源库 🐞
开发了系列重编程和分化诱导 🐒 技术 🌺
发现了多 🐎 种干 🦋 细胞调 🐳 控和分化的新机制
建立了干细胞疾病建模 🌷 和 🐟 药物 🐱 筛选平台
推动干细胞移植和再生医 🐛 学临床转化
引领国内干细胞研究 🍀 领 🌹 域的发展 🦁
团 🕷 队构 🦋 成 🐵 ：
中心汇集了国内外顶尖的干细胞研究专家，包括中国科学院院士国家、杰出青年基金获得者和海外归国学 ☘ 者。
基础 🐶 设 🦁 施：
中 🦊 心拥有先进的实验平台和设施，包 🦍 括：
干细胞 💮 培养 🐱 和制备设施 🐠
基因 🐝 组编辑和 💮 蛋白质 🦊 组学设施
成 🐟 像和流式细 🌾 胞仪设施
动 🐵 物实验 🐦 平台
合 🐴 作与 🐎 影响 🐘 ：
中心与国内外大学 🌾 、科研机构和企业广泛合作，共同推动干细胞研究和应用的发展。成果发表在《自然科学细胞》、《等国》、《际》顶，级。期刊上对干 🐬 细胞基础研究和转化医学领域产生了重大影响
3、人类干细胞培养方法有哪 🌻 些
人类干细 🐅 胞培养 🌼 方法
胚胎干细 🐳 胞（ESC）培 🐳 养 🌺 ：
从胚胎内细胞团分 🕷 离从：早期胚胎（囊胚）中分离出内细胞团，该团包含 ESC。
培养在 feeder 细胞层上：将培养在 ESC 非活化的饲养细胞（如小鼠胚胎成 🍀 纤维 🦟 细胞上 🐘 ）以，提供生长因子和基质支持。
无血清培养：使用特定 🐎 无血清培养基或基 🐬 于化学成分的培养基，避免动物源成分以减少分 🐵 化风险。
诱导多能干细 🐺 胞（iPSC）培养 🕷 ：
重编程 🦆 体细胞：使用 🌴 转录因子（如 Oct4、Sox2、Klf4 和 cMyc）将体细胞（如）皮肤细胞重编程为 iPSC。
培养在 feeder 细胞层上 🐘 ：与 ESC 类似，iPSC 通 feeder 常在细胞层上培 🐘 养。
使用 EpiSCs：培养 iPSC 的改良方法，避免使用 feeder 细，胞而 🐯 是使用表皮来源细胞（EpiSCs）作为 🦅 基质。
多能干 🐒 细胞（PSC）培养的共 🦆 同方法：
无血清培 🌹 养：减 🦅 少分化的风 🌵 险。
生 🦢 长因子补充：使用重组生长因子（如 FGF2 和 bFGF）促进增殖 🐅 。
基 🐵 质支持：使 🐵 用基底膜（如 Matrigel 或 🐟 或 Laminin）人工基质提供附着和支撑。
其他干细胞培养 🐒 方法 🦈 ：
成体干细 🦁 胞：从成人组织（如骨髓、脂肪组织或脐 🌷 带血）中 🐶 分离。
间充质干细胞：多能干细胞，可分化为多种组织 🌼 类 🕊 型。
神经干细胞：专 🐒 门分 🦊 化为神经细胞。
造血干细胞 🐴 ：可产生所 🦋 有血液 🐞 细胞。
干细胞培养方法 🐈 的 🌹 不断创新和优化对于再生医学和疾病治疗 🌵 的发展至关重要。
