🐕 肝脏干细胞分 🐒 离培养（肝脏干细胞分离培养多少钱）
- 作者: 马毅霖
- 来源: 投稿
- 2025-07-02
1、肝 🦢 脏干细胞分离培养 🦅
肝脏干细 🐡 胞分离培养
简介肝脏干细胞是能够分化成熟 🐕 肝细胞和胆管细胞的干细胞。它。们在肝脏再生和修复中发挥着至关重要的作用肝脏干细胞分离培养是获取和扩增这些细胞的过程用，于。研究和治疗应用
分离方法免疫磁珠分选：使用标记肝脏干细胞特异性抗原 🐧 的抗体结合免疫磁珠肝脏。组织或 🌼 细 🦋 胞悬液与磁珠孵育磁珠结合的肝脏干细胞，从。混合物中分离出来
荧光激活细胞分选 (FACS)：使用标记肝脏干细胞特异性抗原的荧光 🦅 抗体肝脏。组织或细胞悬液与抗体孵育，含。有荧光标志的肝脏干细胞 🦍 通过流式细胞术进行分选
培养方法分离出的肝脏干细胞 🐝 在含有特定生长因子和细胞因子 🐧 的培养基中培养培养基。通常含有：
表 🪴 皮 🐅 生长 🐟 因子 (EGF)
肝 🐶 细胞生长因子 (HGF)
胰岛素样生 🍁 长 🌹 因子 1 (IGF1)
为了促进分化 🕊 成熟肝细胞，培养基还可以补充：
胆汁酸肝细胞刺激剂（如 🕷 DMSO 或 dexamethasone）
应用肝脏干细胞分 💐 离培 🌾 养 🌷 在以下领域有应用：
基础研究研究：肝脏再生、分 ☘ 化和致 🦋 病机制。
组织工程：生成用于肝脏移植或疾病模型的肝脏组 🦈 织。
再生医学：治疗 🦋 急性或慢性肝病，如肝硬 🐈 化和急性肝衰竭。
挑战肝脏干细胞分离培养面临一些挑战 🌴 ，包括：
存活率和纯度：分离和培养过程可能会导致肝脏干细胞的低 🌷 存 🐠 活率和纯度。
分化潜力：培养的 🌹 肝脏干细胞可能分化成成熟肝细胞和胆管细胞的潜力有限。
异种 🐝 移植免疫排斥：对于异 🌷 种移植应用来说免疫排斥，是一个问题。
展望肝脏干细胞分离培养是一个快速发展的领域。持续的研究旨在提高分离和培养方法的效率、存。活率和分、化。潜力这些进展有望扩大肝脏干细胞在组织工程再生医学和其他应用中的治疗 🌳 潜力
2、肝脏干细胞 🐴 分离培养多少钱 🐶
肝脏干细胞分离培养的费用 💮 因不同的设施和 🐡 技术而异。以下是一些估计值：
分离 🌵 ： 5001,500 美 🌸 元 🦊
培养： 每周 50150 美元（持 🐴 续 🐝 周 48 ）
细胞鉴 🦢 定： 100500 美 🕸 元
总成本： 1,1003,500 美元（不包括材料和运输 🐘 成本）
影 🦢 响因素：
设施 🦉 的地点和声誉
分离 🐶 和 🦄 培 🦈 养技术
所需的细胞数量 🪴
所需的培 🦁 养 🐵 时间
是否需要额外的服务 💮 ，例如细胞鉴定或储存
如果您正在考虑进行肝脏干细胞分离和培养，建议向多个设施咨询价格和服 🦈 务。
3、肝脏干 💮 细胞分 🕊 离培养方法
肝 🦁 脏干细胞分离培养方法 🦅
目的： 从肝组织 🌵 中分离和 🐟 培养肝脏干细胞，用于再生医学研究、药物筛选和临床 🌼 治疗。
材料：人或 🐼 动 🦅 物肝组织样 🦟 品
无 🌴 菌 🐺 培养 🐛 液和培养基
酶解试剂（如胶原 🌸 酶 IV、肝酶）
培 🐕 养 🐋 瓶 🌴 和培养皿
细胞 🐘 计数器 🐘
流式细 🦄 胞仪
步骤：1. 肝组织 🌻 消化
将 🦋 肝组织切成小块（约 12 毫 🐛 米）。
使用胶原 🌾 酶 IV 或其他酶解试剂在 🍁 37°C 下消化 🐳 组织 3060 分钟。
过滤细 🌼 胞 💐 悬液以去除组织碎 🌼 片。
2. 细胞分 🌿 离
将细胞悬液离心以去除 🐘 消化液。
重悬细 🦢 胞并在培养基中进行梯度离心（如 Percoll 或梯度 Ficoll ）。
收集含有 🐬 肝脏干细胞的细胞层。
3. 细胞 🌷 培 🐳 养 🐠
将分离 🐘 的细胞 🐎 接种到培养瓶或培 💮 养皿中。
使用富含 🐕 生长因子的培养基，如 🦉 培养基 🐦 Williams' E 或 Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)。
在 🐠 37°C、5% CO2 下培养细胞 🐝 。
4. 细胞鉴 🐠 定
使用流式细胞仪对细胞进行免疫表型 🐺 分 🌳 析。
肝脏干 🌼 细胞通常表达标志物，如 CD133、CD90 和 CD45。
还可以进行功能分析，如细胞 🦍 分化潜能或肝脏特定标 🌺 志物表达。
5. 细 💐 胞扩 🐧 增 🌹
定期传代细胞以 🌲 扩增细胞群体 🐞 。
可以使用各种刺激 🐈 剂，如肝脏生长因子 🍁 （HGF）或白细胞介 🍁 素6（IL6），促进细胞增殖。
注 🐯 意事项 🐵 ：
使用 🌹 无 🦈 菌技术避 🦍 免污染。
分离和培养技术可能会因来源 🐘 组织和所 🐞 用试剂而异。
肝脏干细胞的长期培养可能会导致分化 🐝 和功能 🐋 丧 💮 失。
4、973肝细胞分 🐋 离 🌲 怎么做
973 肝细胞 🌸 分离方 🦋 法
材料：新鲜或冷冻 🦋 的肝组 🕷 织
1x Hank's 平 🐠 衡 🌴 盐溶液 🦍 （HBSS）
0.05% 胶 🌺 原酶 IV
5% 胎 🐼 牛 🌸 血清 💮 (FBS)
密 🕊 度梯度介质 🦄 （例如 Percoll 或 Nycodenz）
步骤：1. 肝组织 🐘 准备：
从新鲜或冷冻的肝组织中 🐕 切取 25 克样品。
用冷的 1x HBSS 冲洗 🐼 组织以去 🐳 除血液。
2. 酶 🌷 消化：
将组织 🌿 放 🐳 入含有 0.05% 胶原酶 IV 的 🦄 1x HBSS 溶液中。
在 37°C 下搅拌孵育 4560 分钟，直至 🐯 组织变软。
3. 机 🌵 械 🕷 分离 🐼 ：
用移液管反复吹 🐋 打消 🐳 化后的组织 🌹 ，以分离肝细胞。
用 70 μm 细胞滤网过滤悬液以去除 🐞 未消化的组织碎片。
4. 密度梯度 🦋 离 🐎 心：
将细胞悬液分层加入密度梯度介质 🐧 中。
以 1000 × g 离 🐧 心 20 分 🐞 钟。
5. 肝 🐺 细胞收集：
从密度梯度介质界面收集肝细胞 🦊 。
用含有 5% FBS 的 1x HBSS 洗涤 🌾 细胞。
在 4°C 下以 250 × g 离心 5 分钟沉 🦢 淀细 🐈 胞。
6. 细胞 🐦 计 🐱 数和 🌳 评估：
计 ☘ 数和 🍀 评估收 ☘ 集的肝细胞的活力和纯度。
使用台盼蓝或其 🐅 他细胞活 🐵 力染 🦁 色剂进行活力评估。
使用免疫细胞化学 🐡 或流式细胞仪进行纯度评估。
提示：使用新鲜肝组织可获 🍀 得最佳结果。
消化条 ☘ 件（时间和酶浓度）可能需要根据肝组织类型进 🐠 行优化。
在分离过程中保持 🦉 细胞悬液无 🐵 菌。
分离后的 🐎 肝细 💮 胞应尽快用于实验或冷冻保存。
