湖北大鼠原代干细胞 🍁 价格（湖 🐟 北大鼠原代干细胞价格多少）

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4、大鼠 🦊 脂 🐳 肪干细胞原代培养

大鼠 🐱 脂 🦁 肪干细胞原代培养 🐯

新鲜大 🐱 鼠 🐠 脂肪组织

Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)

胎 🐦 牛血清 🐕 (FBS)

抗生素抗 🐋 真菌混合液

胶 💐 原 💐 酶 🌴 I

胰 💮 蛋 🌿 白酶 🐅

细 🦅 胞培 🌷 养板 🐺

血细胞 🐶 分 🐕 离液 🌻

1. 组 ☘ 织 🐎 收 🌷 集

从健康大鼠 🌾 腹腔 🐎 提取 🌹 脂肪组织。

用无菌磷酸盐缓 🐧 冲液冲 (PBS) 洗脂肪组织并去除多余的血液 🌷 和细胞外基质。

2. 胶原酶 🐈 消化

将脂肪组织切成小块 🦁 并转移到含有胶原酶 I 消化液的细胞培养皿中。

孵育 🌷 12 小时，37°C，轻 🦄 轻 🐒 搅拌。

3. 胰蛋白 🌴 酶 🕸 消 🌻 化

消化后，加入胰蛋白酶溶液并孵育 1530 分钟，37°C，轻轻搅拌 🌸 。

胰蛋白酶反应结束 ☘ 后，立即加入 FBS 中和胰蛋白 🦈 酶活性。

4. 细胞分离 🐱

将细胞悬液转移到 🍁 50 毫升离心管中并以离心 🐘 1200 rpm 分 10 钟。

小心吸出上清 🐵 液，沉淀物含有脂肪干 🐼 细胞。

使用血细胞分离液移 🌹 除红细胞。

5. 培养 🐞

将脂肪干细 🌿 胞重悬于含有 10% FBS 和 1% 抗生素抗 🦅 真菌混合液的 DMEM 培养基中。

将细胞接种到细 🐒 胞培养 🐠 板 🐯 中并放置于 37°C 的培养箱中，含 5% CO2。

6. 培养基 🐵 更换 🦋

每 34 天更换一次培 🐞 养基，以 🍁 去除废物和补充营养。

7. 传 🦆 代 🌹

当细胞达 🐴 到约 80% 的融合度时，使用胰蛋白酶消化并传代到新的培 🌵 养板中。

通过流式细胞术分析 🐼 CD34、CD45 和 CD90 等标记物来验证脂肪干细胞。

通过脂肪细胞分化、成骨分化和成软骨分 🦟 化等功能性测定来 🐬 表征脂肪干细胞。