🐘 牙周膜干细胞检测方法（牙周膜干 🌴 细胞原代提取）
- 作者: 胡嘉倪
- 来源: 投稿
- 2025-05-03
1、牙 🌿 周膜干细 🌼 胞检测方法
牙周 🐧 膜干细 🐒 胞检测方 🕷 法
牙周膜干细胞（PDLSCs）是一种具有再生牙周组 🐒 织潜力的多能干细胞。检测的 PDLSCs 方法 🐛 包括：
1. 细胞 🐎 形态学 🦍
在显 🐝 微镜下观察 PDLSCs 的形态，包括形状、大小和细胞核。
2. 免 🐺 疫表型分析
使用流式细胞术或免疫组化来检测 🐋 PDLSCs 表面的特 🐅 定 🌺 蛋白，如 CD146、CD59、CD271 和 STRO1。
3. 多向 🌳 分 🐎 化潜能 🕷
将 🦊 PDLSCs 诱导成成骨细胞成、软骨细胞和成脂细胞等不同类型的细胞。
4. 克隆形 🐒 成单 🦅 位测定 🐞 （CFU）
将 PDLSCs 播种到含有特定培养基的 🦟 培养皿中。存活并增殖的细胞形成菌落，称为的 CFU。CFU 数。量表明干细胞的 🐘 克隆形成能力
5. 基因 🕸 表达 🦁 分析 🦢
分析 PDLSCs 中与 🐋 干细胞性相关的 🦍 基因的表达 🦈 ，如 Oct4、Sox2 和 Nanog。
6. 组 🌺 织工 🦊 程
将 PDLSCs 与支架材料结合形成三维结构。这。种 🦉 结构 🍁 可在体外形成牙周组织样结构
7. 体内 ☘ 模 🦢 型 🐎
将 PDLSCs 移植到动物模型中，以评估它们 🌷 再生牙周组织的能力。
8. 微阵列 🐦 分析
使 🦢 用微阵列分析来检测 PDLSCs 基因表达谱。这。有助于识别干细胞特性相关的分子信号通路
9. 单细胞测 🪴 序
使用单细胞测序来表征 PDLSCs 的异质性并 🦋 识别具有特定干细胞标记的亚群。
10. 基 🐋 于标签 💐 的方法 🐧
使用 🦢 荧光或磁性标签来追踪体内外的 PDLSCs。这有助于评估它们的迁移、分。化和存活
2、牙周膜 🌳 干细胞原代提取 🐱
牙 🌷 周膜干细 🦟 胞原代 🌴 提取
牙周 🐈 膜干细胞 (PDLSCs) 是从牙周膜组织中提取的多能干细胞。它们具有分化为多种细胞类型的潜力，包括成骨细胞成牙周膜细胞、和成神经细 🐛 胞。PDLSCs 在牙周组织。再生和修复中具有潜在的应用
步骤：1. 组织 🐈 收 🕷 集 🌴 ：
从健康人或动物的牙齿中提取牙 🐝 周膜组织。
2. 组织消 🐎 化：
使用胶原酶和胰蛋白酶将组织消化为单细胞悬 🐠 液。
3. 细 🌷 胞分离：
通过离心 🦆 或密度梯度分 🐛 离将 PDLSCs 与其他细胞分离。
4. 培 🐱 养 🐕 ：
将分离的 PDLSCs 培养在富含生长因子的培养 🦉 基中，例如培养基 αMEM + 10% FBS。
5. 克 ☘ 隆筛 🦉 选：
使用限释克隆技术选 🪴 择出单克隆 🐎 PDLSCs。
6. 鉴 🐕 定 🦢 ：
通过 🌷 免疫表型检 🕷 测 (例 🐱 如 CD90、CD105、CD73) 鉴定 PDLSCs。
通过多向分化潜能检测 (成 🐳 骨 🐯 成、牙、周膜成神经) 证 🐘 实 PDLSCs 的干细胞特性。
注 💐 意事 🦅 项：
提取方法应谨慎，以最大程 🦟 度地减少细胞损伤。
培养条件应优化，以维 🍁 持 PDLSCs 的干性。
克隆筛选 🌼 对于获得纯净的克隆 PDLSC 至关重要。
鉴定是确保 PDLSCs 质量 🦅 的关键 🦅 步 🦅 骤。
应用：PDLSCs 有望 🦍 应用于以下领 🐳 域：
牙周 🍀 组织再生
骨和牙本质 🐝 缺损修 🐯 复
神经 🌲 再 🌾 生
牙科组 🍁 织工程
3、牙周膜干细胞提 🌺 取方法 🦆
牙周 🍁 膜干细胞提 🌷 取方 🐵 法
1. 手术提取 🐘 法
在 🐯 局部 🦅 麻醉下在，牙龈内切一个小的切口以 🐝 暴露牙周膜组织。
使用显微手术刀 🦋 具小心地从牙周膜中采集组织样本。
将样本转移到培养基中进 🕊 行进一步处理。
2. 非手 🌸 术提取法
牙龈沟冲 🦅 洗方法：
将生理盐水或特殊溶 🐘 液冲洗 🕸 到牙龈沟中。
用 🦟 微型离心管收集冲洗液。
冲洗 🌸 液中含有 🌷 从牙周膜脱落的干细胞。
牙髓根尖孔冲洗方法 🐺 ：
在 🦉 局部麻醉下在，牙齿根尖穿孔。
使用生理盐水 🐱 或特殊 🐕 溶液 🕷 冲洗根管。
冲洗液 🕸 中含有从牙周膜脱 🌲 落的干细胞。
3. 分离 🦊 和培养
收 🌿 集的组织或冲洗液进行离 🌳 心以分离 🐳 干细胞。
将干细胞 🌷 接种在培养基中，并添加生长因子和抗生素。
在 🐟 无菌条件下，干 🐘 细胞将在培 🕸 养基中增殖和分化。
4. 表 🌼 征 🐈
使 🌾 用特异性标 🌷 记物（如STRO1、CD271、CD146）鉴定干 🍀 细胞。
评估干细胞的分化能力，例 🦁 如成骨成、牙本质 🐒 和成纤维细胞分化。
优 🐛 点 🐧 和缺点：
手 🦋 术 🐋 提 🐵 取法：
优点 🕊 ：高纯 💐 度干细胞。
缺点：侵入性，可能 🐴 引起术后不适。
非手术 🦉 提取法：
优点：非侵 🐒 入性 🐞 ，操作简单。
缺点：干细胞 🐈 纯度较 🐡 低 🌺 。
选择合适的提 🐵 取方 🐴 法取决于研究目的、可用资源和患者的个体情况。
4、牙周膜干细 🐕 胞原代培 🌷 养
牙周膜 🐈 干细胞原代培养
简介牙周膜干细胞 (PDLSCs) 是存在于牙周膜组织中具有多向分化潜能的间充质干细胞。原代培 🐅 养涉及将 PDLSCs 从。其原生环境中分离 🌾 并将其培养在体外
材料牙周膜 🐦 组织样本 🐅
培养基 🌾 （例如 DMEM 或 αMEM）
抗生素 🍀 （例如青霉素 🐞 /链霉素 🕸 ）
真菌抑制剂 🦈 （例如安 🍁 福特利霉素 B）
培 🌷 养皿或 🌻 培 🐴 养瓶
胰 🐱 蛋 💐 白酶 🌳
胶原酶方法
1. 样本采 💮 集：从健康捐赠者 💐 或患者的拔出牙 💮 或牙周手术中获取牙周膜组织。
2. 酶解：使用 🦁 胰蛋白酶和胶原酶溶液消化组织，释放 PDLSCs。
3. 分离：通过离心或密度梯度分离除去 🦢 细胞碎片 🌻 和杂质。
4. 接 🌴 种：将 🐛 接种 PDLSCs 到含有培养基、抗生素和真菌抑制剂的培养皿或培养瓶中。
5. 培养：在 37°C 和 5% CO2 的 🐺 培养箱 🌺 中培 🦆 养 PDLSCs。
6. 更换培养基：定期更换培 🐝 养基以清除废物和补充营养物质。
7. 传代：当细胞达到 8090% 的汇合度时 🦍 ，使 🦁 用胰蛋白酶消 🦆 化并传代细胞。
表征一 🕊 旦 💮 建立了原代培养，可以对 PDLSCs 进行表征以验证其身份和特性：
形态学：PDLSCs 通常 🦅 呈梭形或星形。
表面标记表：PDLSCs 达 🦉 干细胞标记，例 🐕 如 CD90、CD73、CD105。
分化潜能能：PDLSCs 够分化为成 🌿 骨细胞成、牙本质细胞和成纤维细胞。
应用牙周膜干细胞原代培养在牙周组织再生和修复 🐈 以及研究牙周疾病的机制中具 🦊 有广泛的应用：
组织工程：PDLSCs 可用于生成牙周再生 🌸 支架，以修复牙周缺损和 🕸 促进组织再生 🐈 。
牙周 🐵 疾病研究：原代 PDLSC 培养提供了一个体外模型，用于研究牙周疾 🌷 病的分子基础和治疗策略。
个性化治 🐕 疗：患者来源的 🕸 PDLSCs 可用于开发针对特定患者需求的个性化治疗。
通过原代培养，研究人员能够分离和表征 PDLSCs，并，将 🌿 其用于各种应用中 🌹 为牙周组织再生 💮 和修复开辟了新的途径。
