干细胞的冻结条件有哪些（干细胞的冻结条件 🐺 有哪些方面）
- 作者: 陈茁沅
- 来源: 投稿
- 2025-06-08
1、干细胞的冻结条 🐈 件有哪些
干 🦁 细 🐬 胞冻结条件 🌲
1. 温 🦊 度 🐬
液 🐠 氮温度（196°C）。
缓慢降温至80°C，然 🦈 后快速降至 🕷 液氮温度 🐟 。
2. 冷冻保护 🐶 剂
二甲基亚 🐼 砜 (DMSO)
丙二醇聚 🕸 乙 🐠 二醇 🦋
蔗糖3. 冷冻 🪴 速 🦊 率
12°C/分钟，缓慢冷却以防止细胞损伤 🦢 。
4. 冷 🦢 冻培 🐅 养基 🌾
无血 🦊 清培养基或含血清 20% 的培养基。
5. 冷 🌴 冻容器 🍀
冷 🌷 冻管或 🍀 安瓿。
必须耐受液氮温度 🌺 。
6. 冷 🦆 冻 🌴 时间
至 🌻 少 🦄 24 小时或更长 🕷 时间。
7. 解 ☘ 冻 🐛 条件 🐼
37°C 水 🐶 浴 🐯 中 🐯 快速解冻。
缓慢解 🍁 冻（在室温下或 4°C 冰箱中）可减少细胞损伤。
其他注 🌾 意事项：
干细胞应尽可 🐒 能在传代后的早 🐬 期阶段冷冻 🌹 。
冷冻前应给 🌷 予新鲜培养基。
避免过度冻 🐋 结（超过 6 个月），因为它 🌺 会导致细胞活力下降 🌻 。
解冻后立 🐘 即去除冷冻保护剂（例 💐 如，通过离心洗涤）。
重新培养前应立即接种 🕸 解冻的细 🦆 胞。
2、干细胞的 🐳 冻结 🦄 条件有哪些方面
干 🌵 细胞冻结 🦆 条件 🌿
1. 冷冻 🦆 剂
二甲 🐒 基亚砜 (DMSO)
乙二醇甘油
2. 冷冻 💮 温 🐅 度 🌺
80°C
135°C
196°C (液 🦟 氮)
3. 冷 🍁 冻 🌷 速率
12°C/min
1020°C/min
50100°C/min
4. 保 🐴 护 🍁 剂 🐳
白蛋白纤 🦋 维蛋 🌾 白 🪴 原
人 🐒 血 🐧 清白 🐞 蛋白
5. 细 🌼 胞浓度
1 x 10^6 1 x 10^8 个细 🦄 胞/mL
6. 培养基类型 🕸
无 🐈 血 🌴 清 🐘 培养基
血 ☘ 清培养 🐳 基 🌾
7. 冷 🐯 冻 🐳 容 🦄 器
冷冻管冷冻瓶
哭管
8. 储存方 🐎 式
液氮罐机械 🐛 冷 🐋 冻 🦉 机
9. 融 🐡 化 🕊 速率 🕸
快 🌷 速融化 🐳 (37°C 水浴)
缓慢融化 🐶 (室温)
10. 融 🦋 化介质
完全培养 🐈 基
含 🦁 血清的培 🌺 养基
3、干细胞的冻结条 🐯 件有哪 🐠 些方法
干 🦋 细胞冻 💮 结 🌾 方法
1. 程 🐋 序控温冷冻法
将细胞缓慢冷却 🐳 到 80°C，然后转移到液氮中 (196°C) 进行长期储 🦅 存。
优点 🐶 ：相对 🦆 简 🐘 单，成，本低细胞存活率高。
缺点：需要专门的设 🌾 备 🐞 ，可能导致细胞损伤。
2. 玻璃化冷 🐘 冻 🦢 法
使 🐕 用高浓度的冷冻保护剂溶液，将细胞 🍁 直接置于液氮中。
优点：无 🐦 需 🦢 程序控 🦊 温，细胞损伤更小。
缺点 🐋 ：需要高技能操作，细胞存活 🐦 率可能较低。
3. 干 🌿 冰冷冻 🐯 法 🦅
将细胞悬浮在冷冻保护剂溶液中，然 🌲 后放置在 🐼 干冰 (约 78°C) 上。
优点：简 🌺 单、成本 🐬 低，适用于小体积 🕷 样品。
缺点：细胞 🐶 损 🦉 伤较大，长期储存效果不佳。
4. 液 🕸 氮蒸气 🐕 冷冻 💮 法
将细胞悬浮在 🌺 冷冻保护剂溶液中，然 🐎 后放置 🦊 在液氮蒸气中 (150°C)。
优点：与程序控 🐈 温冷冻法类 🦋 似，但细胞损伤更小。
缺点：操作相对复杂，需要专门的设 🌾 备。
5. 冻干 🌸 法
将 🦄 细 🐵 胞冻结后进行升华干燥，去除水 🌲 分。
优 🐈 点：长 🐝 期 🐳 储存效果好，细胞损伤极小。
缺点：操作复杂，成，本高细 🌿 胞存活率可能较低。
其他 🦉 考 🐟 虑 🐕 因素
除了冷冻方法外，以下 🐡 因素也影响干细胞冻存的 🌺 成功率：
冷冻保护 🐅 剂溶液的 🌸 类型和 🌿 浓度
细胞的 🌿 类型和 🦢 状态
冷 🪴 冻容器的密封性
解冻过程中的复苏 🐞 条件
4、干细 🐯 胞的冻结条件有哪些呢
干细胞 🦢 冻结条件
1. 冷冻 🐼 温度：
80°C 机械 🐳 冰箱
196°C 液氮罐 🐟
2. 冷冻 🐶 保护剂：
二甲 🐛 基 🦢 亚砜 🐎 (DMSO)
甘油3. 冷冻速 ☘ 率 🦍 ：
每 🦟 分 🌾 钟 12°C（缓慢冷冻）
每分钟 1020°C（快速 🍀 冷冻）
4. 冷冻 🐬 容器：
冷却盒冷冻管
冷冻瓶
5. 复 🦢 苏 🪴 条 🐱 件：
解冻 🌿 温 🐱 度 🐎 ：37°C
解冻介质：含血清和抗生素的 🐎 培养基
其他条 🐦 件 🐒 ：
细胞浓度：1 x 10^61 x 10^8 个细 🪴 胞 🦄 /毫升 🌳
培养基：含血清 🌴 和生长 🕸 因子的完全培养基
冷冻前处理：去除 🦈 悬浮 🐬 细胞、洗涤 🦅 并浓缩细胞
冷冻 🐴 后储存 🕊 ：液氮罐或机械冰箱
