干细胞制备标准操作（干细胞制备标准操 🌼 作方法）
- 作者: 朱星睿
- 来源: 投稿
- 2025-08-19
1、干细胞 🐦 制备标准操作
干细胞制备 🐎 标准操作 🌹
1. 材 🍁 料 🐡
无 🐅 菌细胞培养皿
无菌细 🦢 胞培养基
无 🐬 菌 💐 吸管 🐬
刮板胰蛋 🐶 白 💐 酶 💮
EDTA
PBS离心机
细胞 🕸 计数板
培养 🐱 箱（37°C，5% CO2）
2. 细 🦆 胞获取
从器官或组 🌺 织中取材
用无菌剪刀和镊子 🐴 切割样本
将样本洗涤并 🦊 切成小块 🌷
加 🐺 入胰蛋白酶并消化 🦊 组织
3. 离心 🌵 和重悬
将 🌼 消化后的组织悬浮液离心
丢弃 🐧 上清 🌸 液
用培养基 🌹 重悬细胞
4. 培 🐞 养 🌻
将细胞接种到无 🐱 菌培养皿 🦁 中
加 🕸 入培养 🐵 基 🍀
放入37°C，5% CO2的培 🦟 养箱中培养
5. 传 🐅 代
当细胞长至约80%融合 🐈 时进 🌷 行传代
用胰蛋白酶消 🐈 化细胞 🕸
加入 🐛 EDTA终止消 🍀 化
离心细胞并用培 🌷 养 🐯 基重悬
传代细 🐕 胞至新 🌳 培 🐺 养皿
6. 冷 🐎 冻保 🐺 存 🐠
将 🐶 细胞离心并 🐳 丢弃上 🌻 清液
加 🌷 入 🐘 冷 🌴 冻保存液（如DMSO）重悬细胞
逐步降 🌾 低温度（20°C、80°C、196°C）
将细 🌴 胞储存在 🌵 液氮中 🐝
7. 质 🌷 量 🐯 控制
定期 🦁 监测细胞形态 🐬 和增殖
检测细 🌺 胞污染物 🌾 （如支 🦋 原体和细菌）
鉴定细胞表 🐵 面标志物以确认细胞身份
8. 记 🐎 录 🦁
记录细胞 🌵 培 🐞 养的日期和时间
记 🐞 录传代次数
记录冷 🦍 冻保 🐧 存和解冻的日期和 🦄 时间
记录 🐱 质 🐟 量控制结果
9. 安全注意 🍁 事 🐈 项 🌼
始终佩戴手 🍁 套和实验室 🐵 服
处理 🐋 生物材料时使用 🐳 生物安 🐼 全柜
废弃物按生物危 🐱 害处理 🐞
2、干细胞制备标准操作方 🌾 法
干细 🦅 胞 🦍 制备标准操作流程 (SOP)
目的本标准操作流 🦊 程 (SOP) 了干细胞制备的详细步骤，以确保安全有效地获取和培养干细胞。
范围该 SOP 适用于所有涉及干细胞制备的实验 🐺 室人 🌷 员 🌾 ，包括研究人员、技术人员和学生。
责任实验室主 🌿 任负责监 🦆 督干细胞制备过程。
实验室人 🐎 员负责遵循本 SOP 并记录所有步骤。
材料无 💮 血 🌾 清培养 🍁 基
血清生 🦅 长 🌼 因 🍁 子
抗生素抗真菌 🐠 剂 🐞
细 🦈 胞 🐅 培养瓶 🐛
培养板移液管
显微镜
步骤
1. 细 🕷 胞 🌻 采集 🦆
从适当的来源（例如骨髓、外、周血脐带血）采集细 🌺 胞。
使用无菌技术并遵守所 🦉 有生物安全措施。
2. 细胞 🐠 分离 🦋
根据细胞类 🕸 型选 🐒 择适当的分离方法（例如 🌴 密度梯度离心）。
将分离的细胞洗涤 🐧 并重悬于无血清培养基中。
3. 细胞计数和 🦢 活力 🕊 测定 🐱
使用细胞计数器或血细胞分析仪 🌼 计数细胞。
使用 trypan 蓝或其 🦊 他方法评估细胞活力。
4. 细胞培养 🐛
将细胞接种到 🍀 含有血清、生、长因子抗生素和抗真菌剂的培养基中。
根据细胞类型选择合适的培养基 🐎 和孵育条件 🌹 。
5. 细胞扩 🌷 增 🦆
定期培养细胞以去除 🌿 死亡细胞并增加细胞数量。
监测细胞生长 🦆 并根据 🌻 需要分割培养物 🌺 。
6. 细胞表 🕊 征
使用流式细胞术、免疫细胞化学或 🐱 其他方法表征 🌵 细 🌷 胞。
确 🐒 认细胞类型 🌴 和分化状态。
7. 细 🌴 胞冻 🐳 存 🐺
将细胞悬浮在含有二甲基亚砜 (DMSO) 的冷冻 🪴 保存液中。
根据制造商的说明冷 🐡 冻细胞。
记录记录所 🐧 有步骤，包括 🐎 ：
细胞来 🦁 源
分离方法 🐠
培 🐋 养 🐎 条 🐬 件
表 🐡 征结果
冻存日 🌾 期 🐒
质量控制定期检 🦈 查培养 🐟 基、生长因子和其 🐡 他试剂的质量。
监测 🦆 细胞污染并采取适当的预防措施 🌺 。
定期验证细胞 🐎 表征结果。
安 🐛 全 🐕 注意事项
遵循所有 🍁 生物安全措施。
处理细胞时穿戴手 🐒 套 🦟 和防护服 🦉 。
将未使用的细胞和培养基作为生物危 🦢 险废 🐵 物处理。
修订历史日期：
修订：
3、干细胞 🐧 制备中心准入条件
干细胞 🐡 制备 🐺 中心准入条件 🐦
一、基 🦄 本条 🌼 件 🐼
具有独立法人 🌳 资 🌿 格。
符 🌳 合《干细胞临床研 🌲 究管理办法》的 🌿 相关规定。
具有完善的质量管理体系 🌵 。
拥有符合国家相关技术标 🐕 准的设施和设备 🐧 。
具备合 💐 格 🐱 的专业技术人员。
二、技术 🐈 条 🐒 件
拥 🐯 有干细 🌿 胞制备技 🌺 术。
具 🐈 有 🌾 干细胞 🦄 鉴定鉴定技术。
具有干细胞培养和储存技术 🌺 。
具有干细胞制备 🐺 质量 🌻 控 🌳 制技术。
三、人 🐦 员 🦋 条件
负责人具有 🦟 硕士以上学位，并具有5年以上相关专业工作经验。
技术人员具有大学 🐯 本科以上学历，并具有3年以上 🦈 相关专业工作经验。
质 🐎 量管理人员具有大学本科以上学历，并具有相关质量管理工作经验。
四、设施和设备 🌹 条件 🐈
具备独立的干细胞制备、鉴、定、培养储存和质量控制设施 🦆 。
配备 🦁 必要的设备，包括：
生物安全柜和 🦈 超净工作台
显微镜 🌷 和细胞培养箱 🐳
离心机 🌿 和细胞计数器
液氮 🐳 罐和冷冻保 🕊 存仪
五、质 🦉 量管 🐱 理 🌷 体系条件
建立完 🦍 善的 🦈 质量管理体系，包括：
标 🌷 准操 🐡 作规 🌾 程（SOP）
质量管理手册和程序 🐶 文件
记录 🍁 管 🐈 理 🦟 程序
内部 🌺 审核和管理评审程序
偏差处理程序 🌷
六 🌺 、其他条件
具有良好信誉和社会 🐱 责任感。
遵守 🦊 国家 🦟 相关法律法、规和技 🐧 术标准。
接受相 🐵 关行政管理 🕊 部门的监督管理。
4、浙 🌼 江省干细胞制备中心
浙江省干 🐈 细胞制备中 🕊 心 ☘
简介浙江省干细胞制备中心是经国家卫生健康委员会批准成立的，集干细胞采集制备、储、存和临床应用为一体的综合性干细 🐶 胞库中心。位，于杭州市余杭区占地面积约2000平，方，米、拥、有。先进的设备和技术致力于为患者提供安全有效高质量的干细胞产品
服务范围干 🐡 细胞采集：包括脐带血、骨、髓脂肪等组织的干细胞采集。
干细胞制备：对采集 🌾 的干细胞进行分离、培养和扩增，满足临床使 🐬 用的要求。
干细胞储存：中心 🌹 采用先进的低 🐅 温储存技术，确保干细 🌹 胞的长期保存和活力。
临床应 🦉 用：中心与多家医 💮 院合作，为患者提供干细胞移植和再生治疗等临床服 💐 务。
技术优势GMP标准：中GMP心严格按照标准进行干细胞采 🌸 集、制备和储存，确保产品的安全性和质量。
细胞分选技术：中心拥有先进的细胞分选技术，可，以从采集的干细胞中分离 🐒 出纯度高的特定细胞类型满足不同的临床需求。
再生医学技术：中心开展干 🐺 细胞分化诱导、组织工程等再生医学技术研究，为患者提供新的治疗手段。
临床应用血液 🐝 系统 🦟 疾病：白血病、淋、巴瘤再生障碍性 🐕 贫血等。
免 🌴 疫系统疾病：红斑狼疮 🐦 、类风湿关 🐳 节炎等。
神经系统疾病：帕金森病、阿尔茨 🌷 海默病等 🌴 。
心血 🌿 管系统疾 🐵 病心：肌梗死心、力衰竭等。
其他疾病：肝衰竭、肾衰竭、皮肤损伤 🦅 等。
社会意义浙江省干细胞制备中心作为干细 🍁 胞技术发展的先驱为，患，者提供高质量的干细胞产品和临床服务推动了干细胞医学的发展中心。还，积，极。与国内外学术机构合作促进干细胞技术在疾病治疗和再生医学领域的应用为提高人民群众健康水平做出贡献
