干细胞成球实验药物准备 🌷 （体外干细胞成球 🦄 实验）
- 作者: 刘嘉映
- 来源: 投稿
- 2025-06-07
1、干细胞成球实 🌿 验药物准备 🦊
干细 🐬 胞成球实验药物制备
材料：间充质干 🌺 细 🐼 胞 (MSC)
培养基（含 💮 生长因子）
牛血清蛋白 🐠 （BSA）
聚合硫酸软骨素 🐟 （CS）
胰酶离心机
培养皿或 🐶 培养瓶
步骤：1. 提取 🐯 和扩 🌹 增 MSC
从脂 🐘 肪组织 🐺 或骨髓中提取 MSC。
将 MSC 悬 🐦 浮在 🐒 培养基中 🌵 并进行扩增。
2. 制 🐠 备 CS 聚合物
将 CS 溶解在培养基中 🦄 ，形 🐠 成溶液 🍁 。
3. 将 MSC 悬浮 🐼 在 CS 溶液中
将扩增的 MSC 收集并悬浮在 🦢 CS 溶液中。
4. 培 🌴 养 🐞 成球
将 MSCCS 悬浮液 🐅 转移到培养皿或培养 🦍 瓶中 🐺 。
在 37°C、5% CO2 氛围 🐛 下培养 710 天。
5. 成球收 🪴 集 🐵 和评 🌲 估
使用离心机 🐬 将 🐠 成球从培养基中分离出 🐋 来。
用胰酶消化成球，以释放细 🐡 胞。
计数细胞并评估其活力 🦟 。
6. 药 🍁 物 🐛 制备
将成球 🌸 细胞悬浮在适当的缓冲 🕷 液中，如生 🌲 理盐水或 PBS。
根据需要添 🐧 加其 🕊 他成分，如药物化合物。
注 🐦 意 🌾 事 🦅 项：
使用高品质的 MSC 和培养基 🌷 。
精确测量 CS 浓度 🕸 和 MSCCS 悬浮液的体积。
在无 🐴 菌 🦄 条件下操作 🦆 。
优化培 🐒 养条件以获 🐵 得最大化成球形成。
2、体外干细胞 🐒 成球实验
体外干细胞 🐈 成球实验
目的评 🌸 估干 🌿 细胞自我更新和分化的能力
研究 🐞 干细胞 🌸 分化的影 🐠 响因素
开发干细胞移植和再 🌷 生医学 🦄 的治疗方法 🐝
原理干细胞悬浮在 🌴 培养基 🦅 中
细胞聚集形成细 🐛 胞团成（球）
成球 🐞 最初由干细胞组成，随着时间 🐘 的推移分化为各种细胞类型
实验步骤1. 细胞 🐵 培 🕷 养 🦈
将干细胞接种到 🦄 低附着培养皿或超低附着培 🐕 养皿中
加入含有生 🦋 长因子和培养基成分的培养基
2. 成球 🐘 形成
细胞在悬浮状态 🐋 下培养 🐯 数天至 💮 数周
细 🐠 胞聚集形成大小不 🌲 一的 🐛 成球
3. 成 ☘ 球计数和分 🐎 析 🦅
在显微镜下使用细胞计 🌿 数 🌿 板或流式细胞仪计数成球
评估 🌷 成球大小、形态和数量
4. 成球 🐬 分 🌵 化
通过免疫组化 ☘ 、流式细胞术或 RTPCR 分析成球中特异性细胞标志物的表达
评估成球分 🌵 化为特 🌲 定细胞类 🦟 型的潜力
变量干细胞类型（胚胎干细胞、成体干 🐶 细胞）
培养基成 🐎 分 🦆 （生长因子 🌷 培养基、补充剂）
培 🌷 养条件（悬浮培养、低 🌻 附着培养）
培养时间（成球形 🐛 成 🐠 和分化的持续时间 🌾 ）
应用干细胞自我更 🌴 新研 🦋 究：成球形成能力反映干细胞自我更新的能力。
干细胞分化研究：成球分化 🦅 分析揭示了干细胞 🕷 分化途 💮 径和分化潜能。
培养三维细胞模型：成球为 🐛 体外研究复杂组织和器官发 🌿 育提供了三维模 🐛 型。
再生医学：成球可用于移植到 🐴 受损或退化组织中，以促进组织修复和再生。
药物筛选 🐳 ：成球可用于筛选 💮 调节干细胞自我更新和分化 🐶 的药物。
