干细胞解冻 🕸 复苏方法（干细胞复 🕊 苏的需要多长时间）
- 作者: 胡嘉倪
- 来源: 投稿
- 2025-06-21
1、干细胞解冻 🌴 复苏方 🌻 法
干细胞 🦄 解冻复 🐦 苏方法
材料：干细胞冻存管或安瓿 🍀
37°C 水浴 🦁
解 🐋 冻 🦈 液（例如 1X PBS 或 🐘 HBSS）
培养基培养 🌸 皿或培养瓶
移液管显微镜
步骤：
1. 快 🐵 速 🐘 解冻 🐠 ：
从 🦢 液氮罐中取 🐟 出冻存管或安瓿 🌿 。
将 🌷 其立即放入 37°C 的水浴中，轻，轻摇晃直 🦈 到内容物解冻。
通常 🦁 需 🦋 要 🐶 13 分钟。
2. 稀释 🦍 解冻液：
将解冻后 🐞 的细 💮 胞立即转移到含有解冻液的培养皿或培养瓶中 🕸 。
解冻液体积应为细胞 🌺 冻存体积的 510 倍。
轻柔地混合，以 🐈 去除可能存在的冷冻 🐼 保护剂残留物。
3. 离 🌲 心 🐎 （可选）：
将细胞悬液离心 🌷 510 分钟，800 x g，4°C。
小心地吸出上清液，不要扰动细胞团 🌵 。
4. 重 💮 悬：
使用培养 🦟 基将细胞重 🐘 悬，并计数细 🐬 胞密度。
调整细胞密度至 🕸 所 🐅 需浓度。
5. 接 🪴 种 🌵 ：
将细胞接种到培 🕸 养 🕸 皿或培养瓶 🌲 中，并根据培养要求进行培养。
提示：使用经过验证的解冻液 🐱 ，以最大 🪴 限度 🦋 地提高细胞活性。
快速解 🐱 冻对于 💐 最小化细胞损伤 🌾 至关重要。
不要过度稀释细胞，因为这会降 🐅 低细胞存活率。
在解冻 🦅 后立即接种细胞，以避免细胞损伤。
在使用前，请检查 🦋 细胞是否出现任何损伤或污染迹象。
2、干细胞 🕷 复苏的需要多长时间
干细胞复苏的时间因干细 🐎 胞的类型和冷冻保存方法而异。
胚 🐳 胎 🐒 干细胞和诱导多能干细 🐺 胞 (iPSC)
冷冻 🕸 在液氮中：数小时至几 🌲 天 🌼
造血 🦆 干 🌹 细胞 🦆 (HSC)
冷冻在 🐧 液氮中：数小时至几天 🦉
冻干 🦄 （冷冻干燥）：数分钟至 🌺 数 🐬 小时
间充 🐧 质 🦁 干 🌵 细胞 (MSC)
冷冻在液氮 🌵 中：数小时至几天
冷 🐼 藏（4°C）：几分钟至数 🐎 小时 🐺
脂肪组 🌴 织 🌷 来源 🍁 的干细胞 (ASCs)
冷冻在液 🕷 氮中：数 🦄 小时至几天
冷藏（4°C）：几分钟至数小 🦁 时
复苏过程通常涉及将 🐞 干细胞从储存中取出，然，后将它们溶解在培养基中并将 🌵 其转移到培养皿或培养瓶中进行培养复苏。时间取决于：
干细胞储存的持续时 🌹 间
冷冻 🦢 保存方 🌷 法
复苏培养基的成分 🦈
培养 🌵 箱条 🌻 件
一般 🦍 来说，复苏 🦁 过程大约需 🦅 要：
液氮冷冻：数小 🐕 时至小时 24
冷 🌴 冻 🕷 干燥：几分钟至数小时
冷 🐳 藏：几分 🌳 钟至数小时
3、干细胞解冻复 🌳 苏方法有 🍁 哪些
干细胞解冻复 🐛 苏方法
1. 水 🐵 浴法 🐎
将含有干细胞的冷冻管放入的 37°C 水 🐎 浴中，每 2 分钟旋 🌸 转一次。
当管内冰晶融化后 🐅 ，立 💐 即取出。
2. 流动水浴 🐱 法
将含有干细胞的冷冻管置于 37°C 流动的水浴中 🐞 ，持续 5 分钟。
每分钟旋转一次，以 🐯 确保 🐱 均匀解 🌲 冻。
3. 酶 🐟 解 🐒 法 ☘
将冻存液从液氮中取出，立即加入含胰蛋白酶的培 🕊 养基中 🐘 。
在 37°C 下 🦅 孵育 510 分钟，直到细胞完全解冻。
4. 机 🌹 械解冻 🐬 法
使用解冻仪或振荡器来解冻冻存液 🌸 。
设定 🪴 温 🐋 度为 37°C，时 🌺 间为 25 分钟。
5. 微波解 🐎 冻 🦟 法 🐋
只适 🐕 用于含有 DMSO 保护剂的 🐦 冻存液。
将冻 🍀 存液放入微波炉中，低 🌺 功率解冻 1030 秒。
每 10 秒暂停一次 🌺 ，旋，转管子以防止 🦆 温度过高 🦆 。
解冻复 🐱 苏后的 🐝 处理
稀 🐋 释冻存液：使用预热的完全培养基稀释 🦟 冻存液，以去 🦟 除任何残留的 DMSO 或其他冷冻保护剂。
离心：在 300 x g 下离心 5 分钟，去除 🐴 细胞碎片和培养 🐦 基废液。
重悬：将沉淀细胞重悬在新鲜的培养 🌾 基中。
培养：将 🐡 细胞转移到预 🦈 温至 37°C 的培养 🌲 皿或培养瓶中。
监测：观察细胞活力和生长 🌼 状况，确保 🐱 复苏 🐶 成功。
4、干细胞解冻复 🐶 苏方法是什 🐈 么
干细胞 🌳 解冻复苏方法
材料：干细胞 🍁 悬浮 🕸 液 🐱
无 🌲 菌培 🐞 养基 🐋
培 ☘ 养 🐯 瓶或培养板
水 🐅 浴锅 🐦 或 🌸 细胞加热器
移液管细胞 🐞 计 🐒 数器
步骤：1. 解冻 🐝 干 🦁 细 🌷 胞悬浮液
将 🦉 冷冻管从液氮中取出。
将冷冻管置于水浴 🦅 锅或细胞 🕊 加热器中 🦆 加热，37°C 约 2 分，钟或直到液氮蒸发。
轻柔地摇晃冷冻管，以分解任 🦉 何冰块。避。免剧 💮 烈振荡
2. 稀释干细胞悬浮液 🌿
使用无菌移液管稀释 🌳 干 💮 细胞悬浮液。建议的稀释倍数为 1:10。
例如如，果冷冻管中含有 1 mL 干，细胞悬浮液则 ☘ 将其加入 🐵 9 mL 预，热的培养基中得到 10 mL 稀释后的悬 🌳 浮液。
3. 离 🌳 心 🦉
将稀释后 🦍 的悬浮液离心 5 分钟，1000 × g，室温。
小心地吸 🦍 出上清液。
4. 重 🌷 悬细 🍁 胞 🦟
使用预热的培养基重悬细胞沉 🐟 淀悬。浮。液的体积应与解冻前相同
例如如，果冷冻管中含有 1 mL 干 🌷 ，细 1 mL 胞悬浮液则使 🌻 用培养 🐡 基重悬。
5. 计 🐎 算细胞数量和 🍀 活性 🦍
使用细胞计数器计算解冻后 🐟 的细胞数 🐘 量和活性。
如 🌺 果活性细胞的数量低于 70%，则不建议使用 🐅 这些干细胞。
6. 培 🦉 养 🌴
将重悬的干细胞转移到培养 🦈 瓶或培养板中。
加入 🐅 预热的培养基，使培养基完 🦋 全覆盖 🐘 细胞。
将培 🪴 养物置于 🐴 37°C、5% CO2 的 🍀 培养箱中培养。
