神经干细胞分离培养（小鼠 🐠 神经干细胞的分 🦊 离及培养实验）
- 作者: 李荞映
- 来源: 投稿
- 2025-06-10
1、神经干细胞 🦢 分离培 🌾 养
神经干细胞分离培 🕷 养
神经干细胞是具有自我更新和多向分化潜能的未成熟细胞，可以产生神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞等神经细胞神经干细胞分。离，培、养是。一种从 🌷 组织中分离和扩 🪴 增神经干细胞 🐅 的技术用于研究神经发育神经再生和神经疾病治疗
神经干细 🌷 胞 🐯 来源 🌼
神经干细胞可以 🕸 从以下来源分离：
胚胎 🐵 组 🐎 织胚胎： 神经管 🐶
胎儿 🐧 组织胎儿 💮 ： 大脑
成人组织成人： 海 🌲 马和嗅 🐴 球 🐶
分离方法神经干细胞 🕷 分离通常采用以下方法：
机械 🐵 分离： 利用组织剪切和离心分离出细胞。
酶消化 🍁 ： 使用蛋白酶或胰蛋白酶消化组 🍁 织以解离细胞。
免疫磁珠分离： 使用靶向神经干细胞表面标志物的免疫 🐧 磁珠选择性分离细胞。
流式细胞术分选： 基于细胞表型对其进 🌴 行分选。
培养 🌴 基 🐅 和生长因 🦈 子
神 🐟 经干细胞培养需要特定 🌹 的培养基，该培养基含有促进其生长和增殖的生长因子。常见的使用包 🦅 括：
基础培养基： 神 🌳 经基 🌴 础培养基（NB）或杜氏改良鹰氏培养基（DMEM）
生长因子： 表皮生长因 🐧 子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、神经 🦢 生长因子（NGF）
培养条件神经干 🌲 细胞培养通常在以 🐠 下条件下进行：
温度 🦢 ： 37°C
二氧 🌻 化碳浓 🐋 度： 5%
培养皿类型： 无血清培养皿或多聚赖氨酸包被培 🌼 养皿
培养基更换： 每隔 23 天更换新鲜 🐬 培养基
扩增和 🦄 传 🐋 代
神经干细胞可以通过传代来扩增传代。涉及将细胞从小培养基转移到大培养基中以，提。供。新鲜的生长因子和养分神经干细胞可以传代多 🦄 次而仍保持其自我更新和分化潜能
应用神经干细胞分离培养在广泛的 🕸 应用中具有研究和治 🐋 疗意义，包括：
神经发育研究研究神 🦊 经： 细胞的命运确定、分化和迁移 🐶 。
神经再生： 潜在 🐝 用于 🐯 治疗中风、脊髓损伤和其他神经损伤。
神经疾 🦄 病治疗： 可作为细胞疗法用于帕金森病、阿尔茨海默病和多发性硬化症。
药 🦄 物筛选： 用于筛选和开发针对神经疾病的新药物。
2、小鼠神经干 🐱 细胞的分离及培养实验
小鼠神经干细胞的分离 🌵 及 🐧 培养 🐠 实验
材 🐞 料 🐠 和 🐘 试剂
雄 🐝 性 🦊 或雌性小鼠或 (C57BL/6 其他品系)
生理盐 🌹 水
解剖 🌾 工具 (剪刀、镊子)
培养基：神經幹細胞培 🍁 養基（NSBM）
胰蛋白 🦋 酶溶液 🦟
多肽酶 🐝 溶液（如 Collagenase IV 或 Papain）
机 🐒 械组织研磨仪或 🌾 剪刀 🐱
培养 🕊 瓶 🌵 和培养板
神经球生长因子 (EGF) 和成纤维细胞生长 🦈 因子 (FGF)
10% 小牛 🌼 血 🐒 清 (FCS)
方法1. 神经 🐦 干 🐬 细胞的 🐼 分离
安乐死小鼠 🌷 。
将头部斩 🐝 首 🪴 并置于培养皿中。
用剪刀纵向剪开颅骨 🕸 并移除大脑。
将大 💮 脑置于盛有冷生理 🦁 盐水的培养皿中。
用镊子小 🐘 心地去 🌵 除脑膜 🦈 。
将大脑转移到 🐘 盛有胰蛋 🌻 白酶溶液（37°C）的培养皿中。孵育 3060 分钟，或。根据所用胰蛋白酶的浓度进行调整
用多肽 🍀 酶溶液（37°C）进一步孵 🌹 育 2060 分钟。
用 🐯 机械组织研磨仪或剪刀将组织研磨 🐋 成单细 🦁 胞悬液。
2. 神 🐒 经干细胞 🐘 的富集
使用离心机将单细胞悬液离 🦄 心 5 分钟，1500 rpm。
收集上清液并 🌲 将其转移到一个新的培养皿中。
再次离心上清液 🐘 10 分钟，1800 rpm。
收集 🐋 沉淀物，即富含神经干细胞的细胞群。
3. 神经 🦢 干 🐘 细胞的培养
将富 🦈 含神经干细胞的细 🕸 胞群重悬在 NSBM 中。
将细 🐅 胞种在预先包被有聚 L赖氨酸或其他基 🍁 质的 🦉 培养瓶或培养板中。
加入 EGF 和 FGF 等生长 🌼 因子。
每 🐦 23 天更换培养 🦁 基 💮 一次。
4. 神经干细胞的 🦁 分化
神经干细胞可 🌺 以通过改变培养条件来诱导分化为神经元、胶质细胞或其他神经细胞类型。
分化诱导通 🐠 常涉及特 🐞 定生长因 🌲 子的添加或培养基成分的改变。
培养时间和培养 🌷 条件根据 🕷 所需的细胞类型 🌾 而异。
提示使用 🌷 无菌操 🦋 作以防止 🐒 污染。
避 ☘ 免使用过多的胰蛋 🦋 白酶 🐱 或多肽酶，因为它们会损害细胞。
每次更换培养基时检查细胞形态 ☘ 以监测细胞健康状况。
根据所用的培 🦄 养基和生长因子调整 🐳 培养时间和培养条件。
培养神经干细胞需要一定的技能和经 🐎 验。建议在进行实验之前，向经验。丰富的 🌷 研究人员寻求指导
3、谷 🐱 氨酰胺对于神经干细胞培养
谷氨酰 🦄 胺对于神经干细 🍁 胞培养 🦟 的重要性
谷氨酰 🐯 胺是一种非必需 🌾 氨基酸，在神经干细胞培养中发挥着关键作用。它，参与了许多代谢途径对于神经干细胞的存活、增。殖和分化至关重要
代谢途径谷氨酰胺是三羧酸循环循环（TCA 的 🦋 ）关键中间体，产生能量并为其他生物合成途径提供前体 🦉 谷氨酰胺。还，参，与谷氨酰胺酰胺。化反应该反应会产生谷氨酰胺酰酪氨酸这是细胞增殖和分化的必需氨基酸
神经干 🐺 细胞存 🌻 活 💐
谷氨酰胺对于神经干细胞存活至关重要。在缺乏谷氨酰胺时神经干细胞，会。发，生，凋。亡谷氨酰胺被转化为谷氨酸谷氨酸是一种神经递质在神经细胞存活中起着重要作 🦅 用
神经干细 🦁 胞 🕷 增殖
谷 🌴 氨酰胺促进了神经干细胞的增殖。它提供了 TCA 循环的底物，为细胞。分，裂产生能量谷氨酰胺还参与嘌呤和嘧 💐 啶的合成这些是和合成的 DNA 基 RNA 本。组成部分
神 🌻 经干细胞 🌲 分化 🐱
谷氨酰胺影响神经干细胞的分化谷氨。酸谷氨酰 🦁 胺的，代，谢。产 🐳 。物是大脑中 🦋 主要的兴奋性神经递质谷氨酸水平的升高会促进神经干细胞向神经元分化
培养条件神经干细胞培养中谷氨酰胺 🌺 的最佳浓度取 🦉 决于 🌻 培养基和细胞类型。通常谷氨酰胺浓度，为 24 mM，但。对于某些细胞类型可能需要更高的浓度
结论谷氨酰胺对于神经干细胞培养至关重要 🌻 ，它，参与多种代谢途径对细胞存活、增殖和分化起着至关重要的作用。通 🐵 ，过。优化培养条件中谷氨酰 🕊 胺浓度可以确保神经干细胞的健康生长和功能
4、神经干 💮 细胞分离纯化方法
神经 🦈 干 🐡 细胞分离 🪴 纯化方法
神经干细胞 (NSC) 是具有自我更新能力和多向分化潜能的干细胞，在神经系 🍁 统发育和再生中起着至关重要的作用 🦆 的分。NSC 离。纯化对于研究其生物学特性和开发干细胞治疗策略至关重要
方法1. 机械 🕷 分 🌺 离 🌷
贴壁法：NSC 具有贴壁性，可通过在培养皿中培养组织样 🐶 品并去除非 🌲 贴壁 🦋 细胞来富集 NSC。
离心分离：NSC 密度大于其他细胞 🌳 类型，因此可以通过离心分离来富集。
2. 免疫 🐈 磁珠分离
抗体结合 NSC 表面特异性标记 🐬 ，磁 NSC 珠标记的抗体 🐠 可与结合。
将样品与磁珠孵 🐬 育，然后通过磁分离器收集标记 🍁 的 NSC。
常用的标记包括 🐴 Nestin、GFAP 和 CD133。
3. 荧光激活 🌼 细胞分选 (FACS)
使用针对 🐅 NSC 表面标 🕷 记的 🦉 荧光抗体对细胞进行标记。
标记的细胞 🐝 通过 FACS 仪器进行分选，收集 🐅 具有所需标记的 NSC。
4. 神经球形 🕊 成法
NSC 在培养中能形成神经球（由神经 🐺 元和神经胶质细胞组成的球状体）。
神经球可通过机械 🐈 或免疫磁珠 🐬 分离从培养物中分离出来。
5. 其 🐯 他方 🌵 法
免疫组化：使用 🌼 抗抗 NSC 体对细胞进行染色，并通过显微镜 🦊 鉴定 🐡 和收集 NSC。
流式细胞术：使用流式细胞仪分析细胞表面标记的表达，并收集符合 🦊 NSC 特征的细胞。
细胞培养：NSC 在特定的培养基和培养条件 🕊 下生长，可以富集和扩增 NSC。
选择方法选择 NSC 分离纯化方法取决于样本类型、所需纯度和可用的资源。机械分离和免疫磁珠分离是常用的方法可，提供高纯度和。FACS 神经球形成 🐳 法也可用于分离 NSC，但纯度可。能，较。低对于特定应用建议结合多种方法以获得最大的富集效果
