🐋 人精原干细胞的培养原理（人精原干细胞 🌷 的培养方法）
- 作者: 刘慈音
- 来源: 投稿
- 2025-06-04
1、人精原 🐼 干 🐎 细胞的培养原理
人胚胎干细胞（hESC）的培 🌾 养原 🐟 理
人胚胎干细胞 (hESC) 是来自早期人类胚胎的未分化 🌷 细胞。它们具有自我更新并分化为几乎所有身体细胞类型的能力，这。使得它们具有巨大的治疗潜力
hESC 分离 🦈 和 🐛 培养过程：
1. 胚胎来 🐘 源：hESC 通常是从冷冻的体外受精胚胎中获取的，这些胚胎是捐赠 🌷 的或过剩的。
2. 内细胞团分离：受精后 5 至 6 天，将胚胎解离并形成内细胞团 (ICM)。ICM 是。一组构成胚胎内部的未分 🦈 化细胞
3. 离心培 🐬 养：ICM 被放置在含血清的培养基中 🐡 离心，以去 🍁 除外部营养层。
4. 贴壁培养：ICM 细胞被贴壁培养在含有细胞 Feeder 层的培养皿上 💮 细胞层。Feeder 提供支持和生 💐 长因子，以维持的 hESC 未。分化状态
5. 培养基成 🌷 分 🐝 培养基：hESC 通常含有人或鼠血清、FGF2、LIF 和 B27 补充剂等成分。这些成分支持 🐎 hESC 的、生。长自我更新和基因表达
自我更 💐 新和分化：
在适当的培养条件下，hESC 可自我更新并保持 🦅 未分化状态。通 🐟 ，过改变 🐱 培养基成分或添加生长因子可以诱导分化 hESC 为，各种细胞类型包括：
神 🦉 经 🦁 细 🐝 胞
心肌细胞 🐡
骨细胞软骨 🐧 细胞 🐞
胰腺 🐈 细 🌾 胞 🌷
关键 🌵 注意事项：
污染：维持无污染的培养环境至关重要，以防止细菌 🐶 或真菌 ☘ 感染。
生长因子：FGF2 和 LIF 等生长因子对于 hESC 的自我 🐴 更新和分化至关重要。
Feeder 细胞层：某些 🌾 hESC 系 Feeder 需 🌼 要细胞 🦊 层才能维持其未分化状态。
培养基更换：定期更换培养 🐞 基对于去 💮 除废物和 🐦 提供新鲜营养至关重要。
质量控制：定期进行细胞表型分析和分化能力 🍀 测试，以确保 hESC 的 ☘ 质量和一致性。
2、人精原 🦉 干细胞 🐳 的培养方法
人精原 🕸 干细胞的培养方 🌻 法 ☘
材料：人 🐞 睾丸组织
Dulbecco's Modified Eagle's Medium/Nutrient Mixture F12 (DMEM/F12)
StemPro? hESC SFM 基底培 🦅 养 🌼 基
2% B27 补 🌷 充 🌸 剂 🪴
1% L谷 💐 氨 🐞 酰胺 🐯
100 U/mL 青 🦍 霉素 🐱 链霉素 🐞
重组 💐 人 🌼 FGF2
重 🐺 组人 🦉 GDNF
重组人 🌳 TGFβ1
重 🐡 组 🌲 人 🐱 LIF
囊泡 🌿 培养板 🦄 培 🌸 养/皿
Coating Matrix 用 24 或 48 孔 🌸 培养板 🕷
方法：1. 睾丸 🐟 组织获 🐬 取和睾丸细胞悬液制备：
从经伦理 🐶 委员会批准的人类 🌴 供体 🐎 中获取睾丸组织。
用无 💐 菌 PBS 冲洗睾丸组织，切成 🐵 小块 🐧 。
在睾丸组织消化液（含胶原酶 IV 和透明质酸酶）中消化 3060 分钟 🐼 。
通过 70 μm 细胞滤网过滤消化液，获得睾 🦆 丸细胞悬 🐝 液。
2. 睾 🌹 丸 🐠 细 🐳 胞的富集：
将睾丸细胞 🐞 悬液离心（300 x g，5 分钟），去 🐯 除沉淀物。
在抗抗 CD34 体或其他合适的精原干细胞标记物抗体中孵育 🌸 睾丸细胞。
使用磁珠分选或分选 FACS 方法富集标记的睾丸 🌵 细胞。
3. 精 🐕 原干细胞的扩增：
将富 🌺 集的睾丸细胞培 🦄 养在 Coating Matrix 涂层的培 🍁 养皿培养/板中。
使用 StemPro? hESC SFM 基底培养 🌲 基，补充补充 2% B27 剂 💮 、1% L谷氨酰胺和 100 U/mL 青霉素链霉素。
添加重组 🌼 人 FGF2 (20 ng/mL)、GDNF (20 ng/mL)、TGFβ1 (10 ng/mL) 和 LIF (10 ng/mL) 等生长因子。
4. 培养条 🐠 件 🪴 ：
将细 🐞 胞培 🐅 养在 37°C、5% CO2 的培养箱中。
每隔 23 天更 🌹 换 🕷 培养基 🐡 。
根据需要进 🍁 行传代。
5. 精原干细胞的表 🐱 征 🦉 ：
使用免疫荧光染色和 RTPCR 分析来表征 🦋 精原干细 🐼 胞的形态和分子标记（如 PLZF、VASA、OCT4）。
进行功能分析，如精子 🐝 分化潜 🕊 能评估。
注意事项 🐒 ：
严格遵守无菌操 🦟 作程序 🦋 。
使 💮 用高质量的试剂和材料。
优化生长因子浓度和培 🐴 养 🍀 条件，以最大 🐈 化精原干细胞的扩增和分化。
使用合适的生物安全措施，因为睾丸组织可能含有 🐅 传染性病原体 🕸 。
3、人 🌻 精原干细胞 🍁 的培养条件
培养基：基 🦋 础培养基：无血清无 💐 动物成 🌼 分培养基，如 mTeSR?1
生 🕊 长因 🐼 子：bFGF、EGF、TPO
其他添 🌹 加 🐛 剂：胰岛 🦄 素、AsA、P/S
培养环 🦊 境：
CO2 孵 🪴 箱：5% CO2
温 🐶 度 🐼 ：37°C
无菌 🕸 条件 🐒
培 🦟 养基 🌿 更 🌳 换：
每 12 天更换 🕷 培养基
细 🐶 胞传 🐕 代：
当细胞融合达 7080% 时传代 🐴
使 🍁 用 Accutase? 酶 🦅 解细胞
传 🌿 代比例 🐒 为 🦆 1:4 至 1:6
具 🐧 体 🐬 培养 🕊 步骤：
1. 将人精原干细胞培养在经过预先涂 🐴 层的培养皿 🦟 或培养瓶中。
2. 加入含生长因子和添加剂的 🐴 基础 🐴 培养基。
3. 根 🐝 据细胞融合 🕊 度每 12 天更换培养基。
4. 当细胞融 💐 合度达 7080% 时，用 Accutase? 酶解细胞 🌾 。
5. 将细胞 🐵 以 1:4 至 1:6 的比例接种到新鲜 🦅 的培养皿或培养瓶中。
培 🌼 养注意 🐛 事项：
定 🕷 期监测细胞形态 🕸 和融合度。
避免过度传 🌷 代，因为这可能会导致 💐 细胞分化或衰老。
使用高品质的试剂，以确保细胞 🐴 培 🦆 养的成功。
4、精原干细胞体 🌿 外培养 🐱
精原干细胞体 🌷 外培养
精原干细胞 (SSC) 是男性生殖系统中具有自我更新和分化潜能的干细胞，对于精子生产至关重要。体外培养 SSC 可以为研究生殖生物学、开。发生殖技术和治疗男性不育提供宝贵 🌾 的工具
步骤精原干细 🌷 胞体 🌷 外培养通常涉及 🐒 以下步骤：
取材：从人类或动 🐶 物睾丸中取 🐝 出 🐈 组织。
酶 🌵 解：使 🐯 用酶将组织分解 🐱 成单个细胞。
分离：通过免疫磁珠 🌿 或流式细胞术分离 🦆 出 SSC。
培养：将 SSC 接种到培养基中，该培 💮 养基含有生长因子和营养物质。
维持：定期更换 ☘ 培养基并监测细胞 🐯 状态 🐴 。
培养基精原干细胞 🐟 体外培养 🐎 通常使用含有多种成分的培养基，包 🌹 括：
基 🌳 础培养基：提供必要的生长营养物质。
生长因 🦉 子 🐵 ：刺激细胞增殖和分化，例如和 GDNF FGF2。
抗生素 💐 ：防止细菌污染 🦋 。
血清：提供生长因子和其他促 🕷 进细胞生长的物质。
挑战体外培 🐎 养 🦁 SSC 具有挑战性，包括 🌹 ：
细胞 ☘ 存活：SSC 在体外环境中容易死亡。
自 ☘ 我 🐈 更新和分化：维持 SSC 的自我更新能力和分化 🐺 潜力至关重要。
培养条件培养：基和培养条件必须优 🐱 化以支持 🐬 SSC 的 ☘ 生长和发育。
应用精 🌸 原干细胞体 🌲 外培养具有广泛的应 🌸 用，包括：
生殖生物学研究研究：的 SSC 分子机 🌻 制 🌼 分、化途径和凋亡 🌴 机制。
生殖技术开 🌷 发：探索用 🐞 于治疗男性不育的新方法 🐳 ，例如 SSC 移植和精子产生体外培养。
男性生殖系统疾 🦟 病的建模：在体外创建 SSC 相关疾病的模型以促进诊断和治疗的开发。
进展近几十年来 🦁 ，精原干细胞体外培养取得了显着进展。改进的培养基、新的分离技术和对分 SSC 子。机制的深入理解提高了培养的成功率和培养的细胞质量
结论精原干细胞体外培养是一项重要的技术，为男性生 🕷 殖生物学研究和生殖技术开发提供了宝贵的工具。随，着该领域持续进展体外培养 SSC 有。望在未来为男 🌺 性不 🐦 育治疗和生殖健康做出重大贡献
