iesc干细胞培养（干细胞培养视频教 ☘ 程）

1、iesc干细胞 🦋 培 🕷 养

IESC 干细 🌳 胞培 🐶 养

诱导多能干细胞 (iPSC) 是一种通过将体细胞重新编程为多能干细胞而产生的干细胞是的一种。IESC 亚 iPSC 型 🍀 ，已通过，插。入特定基因而专门优化 🐺 以增强其产生胰岛细胞的能力

IESC 干细胞培养需 🐘 要以下条 🌹 件 🦟 ：

培养基：含 B27 补充剂、亮、氨、酸 🌴 谷氨 🐧 酰胺转铁蛋白和 FGF2 的基础培 🌲 养基，例如 DMEM/F12。

培养基补充剂：Y27632（ROCK 抑制 🌸 剂）和抑制 🕸 剂 🐞 PD（MEK ）。

培 🦟 养皿：涂有马大素或 Matrigel Matrix 的 🪴 培 🕸 养皿。

1. 解冻细胞 🌵 ：将冷冻的 IESC 干细胞快速解 🌷 冻，并使用预热的培养基稀释。

2. 去除冷冻保护剂：将细 🐧 胞离 💐 心 🕊 并洗涤，以去除冷冻保护剂。

3. 接种：将细胞接种到涂有基 🍁 质的培养皿 🦊 中，密 🐱 度为每平方厘米 50,000100,000 个细胞。

4. 培养：在培 🐠 养 37°C、5% CO2 箱中培 🐠 养细胞。每 🐼 。天更换培养基

5. 分化：添加分化因子（例如，KGF、EGF 和 VEGF）诱导 🌴 细胞 🌿 向胰岛细胞分化。

6. 胰岛细胞形成：培养 23 周后细胞，将形成胰岛 🐡 细胞状 🌺 簇。

定期监测培养物对 🐎 于确保细胞健康 🐶 和胰岛细胞分化至关重要监测。包括：

形态评估：检查细胞 🐯 的外观和生长模 🦅 式，确保它们是健康 🐠 的和未分化的。

免疫荧光染 🌷 色：使用胰岛细胞特异 🐟 性标记物（例如胰岛，素、C肽）对细胞，进 🦆 行染色以监测分化。

基因表达 🪴 分析：进行 qRTPCR 或 RNA 测序以分析 🦄 分化相关基因的表达。

IESC 干细胞培养用于 🐺 以下应 🍁 用：

糖尿病治疗：产生胰岛细胞用于移植，以治疗 1 型糖尿 🌳 病。

药物发现：研究药 🐧 物对胰岛细胞功能的影响。

疾病建模：创建用于研究糖尿病和其他胰腺疾病的细 🐧 胞模 🦟 型。

2、干细胞培养视频教程 🕸

干 🌷 细胞培养 🦁 视频教程 🌵

第 💐 1 节 🌲 ：简 🍁 介

什么是 💮 干 ☘ 细胞 🐡 ？

干细 🐝 胞的类型 🐺

干细胞 🌲 培养 🦆 的 🌻 目的

第 2 节：干细胞培 🐒 养基和培 🦅 养器皿

干细 🐞 胞培养基的成 🪴 分 🐺 和选择

培养基的制 🐞 备和 🐧 灭菌

培养器皿的 🐝 选择 🌾 和准 🐛 备

第 3 节：细胞 🦅 解冻和培养

解冻冷 🪴 冻的干细胞 🌷

将干细胞接种到培 🌸 养器皿中

培养基更换和培养条件 🐬

第 4 节：细 💐 胞传 🐦 代和扩增 🌾

细胞传代 🕊 的时 🐟 间和方法

传代时 🕊 细胞密 🌷 度和培养基 🦢 体积的计算

培养基更 🌳 换和培 🐬 养条 🐧 件

第 🐒 5 节：细胞 🕸 冷冻 🐡 保存

冷 🍀 冻保存干细胞的原因

冷 🐶 冻保存方案和选择

冷冻 🐳 保 💮 存程序

第 6 节：细胞鉴别 🌲 和表征

干细 🐎 胞 🌳 的表型特征

流式细胞术、免疫细胞化学和 qPCR 等 🐛 鉴别方法

细 🐵 胞功 🌴 能分析

第 7 节：干 💐 细胞分化

干细 🦋 胞分化的诱 🐴 导因素

不 🕷 同类型干细胞 🌿 的分化 🕊 方案

促进干细胞 🐋 分化 🐒 的培养条件

第 🦉 8 节：常见 🦈 问题和故障排除

细胞 🦄 贴壁失败

细 🐬 胞生 🌷 长缓慢或停止

细 🦟 胞 🐒 污染 🐈

第 🪴 9 节：高级 🌺 技术 🐴

干细 🕷 胞三维培养 🌴

器官芯片系统 🐯

干细胞 🍁 工 🌴 程 🐋

附加 🍁 资源：

干细胞 🐛 培养 🦉 手册

科 🦁 学 🌿 期 🐈 刊文章

网络 🕷 研 🐒 讨会和 ☘ 课程

3、干 🌲 细胞培养是做什么

干细胞培养是一种将干细胞在受控条件下 🕸 分离、扩增和培养到所需数量和 🦁 类型的过程。其目的是：

研究研究：干细胞的生物学特性 🌷 、分化潜能和再生能力，以便 💐 开发 🐟 新的治疗方法。

再生医学：培养出大量健康的干细胞，用于修复 🐴 或再生受损或 🐕 患病的组 🦆 织和器官。

细胞治疗：将培养出的干细胞注射或移植到患者体内，以治疗，各种疾病如 🐟 血液疾病、神经 🦟 退行性疾病和心脏病。

药物筛选 🐛 ：使用干细胞作为 🐴 模型系统筛选，潜，在的药物和疗法以评 🐅 估其对细胞生长、分化和毒性的影响。

生物 🐬 工程：利用干细胞创建三维组织 🦟 模型或 🦈 器官样组织用，于研究疾病机制和开发新疗法。

干 🌾 细胞培养 🐳 涉及以下步骤 🐝 ：

干细胞分离：从胚胎 🐘 胎、盘或成年组织中 🐈 分离出干细 🦋 胞。

培 🌷 养基和生长因子 🐺 ：使用专门的培养基 🐦 和生长因子，促进干细胞的生长和扩增。

无菌环境：在无菌条件下培养 🌻 干细胞，防止污染。

分化诱 🌺 导：通过添加特定的诱导剂或生长因子，将，干细胞诱导分化为特定的细胞类型例如神经元或心肌细胞。

质量控制 🪴 ：监测干细胞的生长、形态和标记物表达，以确保其质量和安全性。

4、ipsc干细胞 🕊 培养

iPSC 干细胞 🐈 培 🕊 养

iPSC 细胞 🐞 系 💮

无血清 🦢 培 🐠 养 🦅 基（如 mTeSR Plus?）

ROCK 抑制剂 🐞 （Y27632）

细 🍁 胞培 🕸 养 🦟 箱

培养步骤 ☘ ：

1. 复 🪴 苏 🌸 iPSC 细胞：

解冻 🦟 iPSC 细胞并加入无 🪴 血 🐶 清培养基中。

将细胞悬液转移到预先涂有 🐛 基 🐒 质的培 🌼 养板中。

加 🦢 入 💐 ROCK 抑制剂以防止细胞凋亡 🌷 。

2. 培 🐯 养 iPSC 细 🌹 胞：

将细 🕊 胞置于 37°C、5% CO2 的 🌸 培养箱中。

每 23 天更换 🐞 一次培养基。

细胞生长 🌺 融合形成群体。

3. 传代 iPSC 细胞 🌸 ：

当群体达到 7090% 的融 🐼 合度时，可以传代。

吸出 🐛 培养基并加 🐧 入传代 🐟 酶。

孵育 510 分 🦊 钟，轻轻吹打细胞以松散。

加入无血清培养 🍁 基以终止传代酶活性 🦁 。

将细胞悬液转移到新的预先涂有 🦆 基质的培养板中。

培养 🐧 基成分：

mTeSR Plus? 无血清培 🐛 养基包含以下成分：

DMEM/F12 培养基 ☘

基因组序列的完全转录组补 🦉 充剂

L谷 🐎 氨 🐛 酰 🦈 胺

抗生素（青霉素和链 🐺 霉 🦅 素）

足量生长因子 🐬 促进 iPSC 细胞生长和增殖

注意事 💐 项：

使 💮 用无血清培养基以保持 iPSC 细胞的多能性。

ROCK 抑制剂在复苏和传代时至关重要 🐅 ，以防止 🌴 细胞凋亡。

定期监测细胞形态和 🌷 融合度，以确定合适 🦊 的传代时间。

避免过度 🕸 传代，因为这可能会导致 iPSC 细胞分化或获得染色 🐛 体异常。