干细胞 🌹 复苏方法步骤（干细胞复苏的需要多长时间）
- 作者: 李知栀
- 来源: 投稿
- 2025-06-21
1、干细 🐴 胞复苏 🌼 方法步骤
干细胞复苏方法步骤 🦈
1. 解 🐕 冻 🐒 干细胞
取出干细胞冷冻管，在 37°C 水浴 🐦 中快速解冻 (12 分钟)。
不要过度 🌳 解冻细胞。
解冻后，迅速将其转移到预热的完全培养基 🌾 中。
2. 稀 🦟 释和 💐 洗 🕸 涤细胞
用 🕸 预热培养基将 🐎 细胞 🐛 稀释 10 倍。
轻柔 🌸 地离 🦈 心细胞 5 分钟，300 x g。
移除上 🦅 清液，用预热培养基冲洗细胞。
3. 计数和 🌸 接种细胞
使用 🌺 血细胞计 🌻 数仪计数细胞。
根据 🌵 细胞密度和接种要求 🌺 接种细胞。
4. 培养细 🦅 胞 🐘
将细 🐬 胞悬液接种到培养皿或培养瓶中。
将细胞置于潮 🐧 湿 🦊 的 37°C 孵箱中，5% CO2。
监控细胞生长，并在需要时 🌾 更换 🐼 培养基 🐯 。
5. 细胞粘 🌺 附和 🐬 增殖
细胞将在 🐶 培养基中 💐 粘附到培养表 🦅 面。
细胞将开 🦈 始增殖并形成一个单层。
6. 传 🐶 代细胞 🦊
当 🐘 细胞达 🦈 到 7080% 融合时，将其传代到新培养 🌷 皿或培养瓶中。
用胰蛋白酶 🦁 消化细胞并将其转移到新 🐞 的 🦢 培养基中。
注意事项使用无菌技术 🌻 进 🦋 行整个 🌳 过程。
轻 🐠 轻处理细胞，避免损坏。
不要 🕸 过度暴露细胞于空气。
使用新 🌿 鲜且合格的培养基和试 🦄 剂 🐠 。
定期监测细胞 🕷 生长并更换培养基。
2、干细胞复苏的需要 🦄 多长时间 🌿
干细胞复苏所需的时间取决于多种因素，包括 🌹 ：
干细胞来源：胚胎干细胞比成体干细 🐵 胞复苏更快 🌼 。
干细胞类型：不同 🐠 的 🐵 干细胞类型具有不同的复苏 🦆 速率。
培养条件培养：基 🐳 、温度和氧气水 🐋 平会影响复苏 🐡 速率。
复苏方法：不同的复苏方法，如，酶消化或机械解离会有不同的复苏 ☘ 时间。
一般来说，胚胎干细胞在 🐞 25 天，内复苏而成体干细胞在天内复苏 514 具体。时。间可能因上述因素 🌿 而异 🦍
3、干细胞复苏方法步 🍀 骤包括
干细胞复苏 🐝 方法步骤
1. 室 🌿 温 🪴 复苏：
将 🐴 冷冻管从液氮罐 🐴 中取出，放置在室 🐡 温下 510 分钟。
轻柔转 🌲 动冷冻管，使细 🦉 胞悬浮液均匀解 🐟 冻。
2. 水浴 🌴 复苏 🦟 （37℃）：
将冷冻管放入装有 37℃ 水 💮 浴的容器中，每 15 秒轻轻摇晃一次 🐦 。
继续复苏直至细胞悬浮液完全解冻 🦟 。
3. 去除冷 🦋 冻保护 🌳 剂：
将细胞 🕊 悬浮液转移到含 🐱 冷冻保护剂 🌺 去除剂的培养基中。
轻 🐒 柔离 🌳 心（200 x g，5 分 🐳 钟）。
弃去 🐝 上清液，用新鲜培养基重悬细胞。
4. 计 🌴 数和活力检测：
用血细胞计数板或流式 🐺 细胞仪计数细胞。
使用台 🐋 盼蓝染料或 🐶 其他方法 🌷 检测细胞活力。
5. 接种到培养 🐴 皿或培养 🕷 瓶中 🦍 ：
将活细胞接种到 🐝 含相应 🐒 生长因子的培养基 🐧 中。
根 🐅 据细胞密度和 🌳 培养条件调整接种体积。
6. 培 🐦 养和监 💮 测 🌷 ：
将培养皿或培养瓶 🪴 置于 🌲 培养 37℃、5% CO2 箱中 🐱 。
定期 💐 监测细胞增 🦈 殖、形态和分化情况。
4、干 🌿 细胞复苏方 🐅 法步骤图
干细胞复苏方法步骤 🐼 图 🐱
步骤 1：准备好所需的材料 🐯
液氮罐装有细 🐠 胞 🐕 培养基的锥形瓶
吸管移液枪
移 🐵 液枪 🌿 吸头 🦈
培养皿 🐝 或培养瓶
生物 🕸 安 🌼 全 🦄 柜
冰浴步骤 🌷 2：取出细胞容器 🐕
从液氮罐中 🌹 取 ☘ 出细 🐺 胞容器。
快速将容器浸入冰 🌲 浴中 23 分 🐒 钟。
步 🐟 骤 🦉 3：消毒容器
用 70% 酒精棉球 🦟 消毒容器的 🐠 外 🌹 部。
步骤 🐘 4：解冻 🐝 细胞
从 🐝 容器中快速 🐵 移除细胞。
将细 🐳 胞直接放入预 🐘 热的细胞培养 🌷 基中。
轻 🌺 柔地晃动容器以 🌹 悬浮细胞。
步 🦢 骤 💮 5：稀释细胞
吸取细胞悬液 🦆 并转移到锥形瓶中。
用新鲜细胞培养基稀释 🐟 细 🐞 胞至所需浓度。
步骤 6：离 🦈 心细 🌹 胞
将细 🦁 胞悬 🦟 液离心 🦊 510 分钟，1200 rpm。
小 🐕 心 🐒 移除上清液。
步骤 🐵 7：重 🌺 悬 🌸 细胞
用 🌸 新 🐡 鲜细胞 🐱 培养基重悬细胞沉淀。
步骤 8：培养 🕊 细 🐈 胞 🦢
将细胞 🐵 接种到培养皿或 🐵 培养瓶中。
按照细胞类型特定的培养条 🦉 件进行培养。
步骤 9：更 🐺 换培养基
在培养的前 24 小 🐴 时内，更换培 🦍 养基以去除 🌿 残留的 DMSO。
以后每 23 天更换一次培 🐘 养基。
步骤 🐱 10：监 🦅 测细胞生长 🌷
定期检查细胞生长情 🐡 况。
当细胞达到 8090% 的汇合度时，传代或冷冻细胞 🐠 。
