人胚胎干细胞培养 🦟 基（人胚胎 🦍 干细胞培养基中谷氨酰胺的浓度）
- 作者: 郭沁芒
- 来源: 投稿
- 2025-05-10
1、人 🐴 胚胎干 🕷 细胞培养基
人胚 🐡 胎干细 🦁 胞 🌾 培养基
人胚 🐦 胎干细胞培养基是用于培 🐵 养和维持人胚胎干细胞（hESC）在体外的专门配制培 🌼 养基。它包含满足 hESC 特。定生长和增殖要求的关键成分
基本 🌷 成分：
基础 🌵 培养基：通常 🐝 是高糖 Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) 或 🦢 Knockout Dulbecco's Modified Eagle's Medium (KODMEM)
血清替代 🐈 剂：例如人血清白 🌲 蛋白 (HSA)、牛胎血清 (FBS) 或血清替代 knockout (KSR)
生长因子：基本成纤维细胞生长因子 (bFGF)、表皮生 🕸 长 🌿 因子 (EGF) 或转化生长因子 α (TGFα)
抗生素：例如青霉 🦋 素链霉素或嘌呤霉素青霉素
L谷氨酰胺：必 🐳 需氨基酸
非必需氨基酸：丙酮酸盐和盐酸乙醇 🐯 胺
β巯基 🐱 乙 🕊 醇 🦁 ：还原剂
胰岛 🌲 素转移蛋白：提高细胞 🪴 存活率
额外成分 ☘ ：
小分子：抑制剂、激活剂或 🐦 特定信号通路的调制剂
条件培养基：从其他细胞类型（例如喂养者细胞）分 🐬 泌的培 🕸 养基
生长基 🌷 质：胶 🐎 原、明胶或聚 🐅 L鸟氨酸
选择培养基的因素 🐘 ：
hESC 品系：不 hESC 同的品系可能需要 🐬 特定 🦈 的培 🐺 养条件。
培养目的培养：基可以针对不同的目的优化，例如保持未分化的状态 🌼 或促 🐅 进分化。
成本和可用性：培养基 💮 的 🐳 成分和配制成本可能会有所不同。
培养 🐅 基维 🦢 护：
人胚胎干细胞培养基需要定期更换，通常每23天更换，一次以保持无菌 🦢 环境并提供新鲜养分培养基。应储存在 4°C，避。免反复冻融
2、人 🍀 胚胎 🐱 干细胞培养基中谷氨酰胺的浓度
人胚胎干细胞 🐒 培养基中谷氨酰 🌷 胺的浓 🐵 度
谷氨酰胺是人胚胎干细胞 (hESC) 培养基中不可或缺 🐴 的补充剂，对于细胞的存活、生长和分化至关重要。建。议的谷氨酰胺浓度因培养基成分和培养条件而异
典型浓 🐘 度范 🐅 围：
2 毫摩尔 (mM)：适用于标准 DMEM 培 🐕 养基，含有 4.5 克/升葡萄糖。
4 mM：适用于富含 🐒 葡萄糖 (高糖培养基，如 DMEM/F12) 或含，有其他 🦁 碳源的培养基如无血清培养基或培养基 mTeSR? 。
注意事 🌿 项 🌲 ：
过高的 🐼 谷氨酰胺浓度可能会导致细胞毒性或干扰细胞分化。
过低的谷氨酰胺浓度 🐋 会限制细胞 🐟 生长和存活。
新鲜制备的培养基应 🐋 含有适当浓度的谷氨酰胺 🌻 。
储存超过 24 小 🐝 时的培 🦊 养基会显着降低 🦍 谷氨酰胺浓度。
使用谷 🐝 氨酰胺稳定剂（如 StabiliGlutamine?）可延长培养基中谷氨酰 🦟 胺的稳定性。
具体 🦅 培 🐴 养基建 🦟 议：
DMEM/F12 培养基：4 mM 谷氨酰胺 🪴
mTeSR? 培 🍁 养基 🐞 ：4 mM 谷氨酰胺
TeSR?E8? 培养基 🐯 ：2 mM 谷 🦄 氨酰 🌳 胺
结论：谷 🐯 氨酰胺在 hESC 培养中起着至关重要的作用，其最佳浓度取决于培养基的成分和培养条件 🐘 。维。持适当的谷氨酰胺浓度对于确保细胞健康和培养成功至关重要
3、人胚胎干细胞培养基怎么 🦉 配置
hESC培养基 🦉 配置 🍁
所需材 🐠 料 🦊 ：
DMEM/F12（基础 🕸 培养基）
B27补 🐶 充 🦢 液 🌵
N2补充 🌾 液
LIF（白 🌿 细胞 🌸 抑制因子）
戊二醛甘露糖
配置 🐬 步骤：
1. 准备基础培养 🐟 基：
在 500 mL DMEM/F12 中加入 10 mL B27 补 🍁 充液和补充液 10 mL N2 。
2. 添加生 🐧 长 🐱 因 🍁 子：
加 🕸 入 🌳 1000 U/mL LIF。
3. 添加 🌲 戊二醛 🐒 （可选）：
加入 0.1 μM 戊二醛以 🌻 抑 🐋 制细胞 🐈 增殖。
4. 添加甘露糖 🐡 （可选）：
加入 4 mM 甘露糖以 🌹 改善细胞存活 🐠 率和增殖。
5. 过滤 🐳 灭菌：
使用 🦈 0.22 μm 过滤器将 🦁 培养基过滤灭菌。
注意：使用新鲜制备的 🐒 培养基。
将培养 🐴 基储存在 4°C，最多保 💐 存 2 周。
使用前将培养基从冰箱中 🦅 取出并缓 🌹 慢温热至室温。
4、人 🕷 胚 🐧 胎干细胞培养基的作用
人胚胎干细胞培养基的作 🐱 用 🌲
人胚胎干细胞（hESC）培hESC养基在 🦈 维持的自我更新和分化 🌳 能力方面发挥着至关重要的作用培养基的。成分包括：
1. 基 🐘 本培养 ☘ 基
无血清培养基：最常用于培养hESC例，如鼠胚胎干细胞培养基（mESF）或 🐶 人类干细胞基础培养基（hESCFB）。它，们。提 🦊 供必要的营养和生长因子同时避免了动物血清的 🦁 使用
含 🐅 血清培养基含：有动物血清，如，胎，牛血清可提供额外的生长因子和其他成分但存在免疫排斥分、离和污染的 🐦 风险。
2. 生长 🌷 因 🕊 子 🐋
碱性成纤维细胞生长因 🐅 子 (bFGF)：促进hESC的自我 💮 更新。
表皮 🦁 生长因子 🐱 (EGF)：支持hESC的增殖和分化。
胰岛素样生长因子 1 (IGF1)：刺激hESC的 🌿 生长和 🌴 存活。
转化生长 🐦 因子α (TGFα)：促进hESC的增 🐯 殖 🐬 。
3. 补充物 🦆
白蛋白（BSA）：作 🐛 为蛋 🐳 白 🦅 质载体，中和生长因子并吸收毒素。
L谷氨酰胺：作为必需氨基酸，支持细胞代谢 🐛 。
青霉素/链霉素：作 ☘ 为抗生素，防止细 🐒 菌污染。
β巯基乙醇：作为抗氧化剂，保护细胞免受氧 🦄 化 🦅 应激。
4. 其他 🦈 成分
非必 🦍 需氨基酸：提供细胞增殖所需的营养。
矿物质：提供离子平衡和细胞功能所必 🐳 需的 🌻 营养 🌼 素。
缓冲剂：维 🕊 持培养基的 pH 值 🐳 。
培养基 🐛 的 🐼 选择
培养基的选择取决于的hESC特定研究或应用要求。对于hESC维持的自我更新和分化能力，无。血，清培养基。通常是首选对于需要分化的研究可能需要添加特定的生长因子或补充 🐬 物来引导分化
培 ☘ 养基更换
培养基应定期更换（通常每 23 天），以清除代谢废物和补充营养更换。频率可能 🐛 因使 🐠 用的培养基类型和的hESC生。长状态而异
