大鼠脂肪干细胞的签订（大鼠脂肪间充质干细 🦢 胞提取）
- 作者: 王旭川
- 来源: 投稿
- 2025-08-15
1、大鼠脂肪干细 🦆 胞的签订 🌻
大鼠脂 🦉 肪干细胞 🦆 的分离 🦉
材料：新鲜的 🐎 大鼠脂肪组织
磷 🌸 酸 🐱 缓冲 🐺 液（PBS）
胶原 🐝 酶 IV
胰蛋 🐧 白 🐦 酶
培养 🌾 基 🐘 （含 🐼 10% FBS）
过滤 🕷 网（70 μm）
步骤：1. 脂肪组织收集：小 🌷 心切除大鼠体内的脂 🍁 肪组织，并将其 🦁 放入含的 PBS 无菌培养皿中。
2. 酶消化：将胶原酶 IV 和胰蛋白酶溶解在 PBS 中，制成最终浓度分别为和 0.1% 的消化 0.25% 液将。脂，肪组织转移到消化液中在 37°C 孵育 🌷 12 小，时。期间不断搅拌
3. 过滤和离心：将组织悬液过滤过 70 μm 的过滤网，以去除未消化的组织碎片 🐟 将滤液。收，集到离心管中 🦟 在离心 1200 rpm 分 10 钟。
4. 细胞分离离：心后，上清液中含有 🦟 浮起的脂肪细胞。小心，翼，翼。地吸出上清液收 🐟 集沉淀的细胞即脂肪 🐒 干细胞
5. 培养：将脂肪干细胞重新悬浮在培养基中，接种到培养皿中在培养。箱中培 🐳 养 37°C、5% CO2 。
提示：使用新鲜的脂 ☘ 肪 🌴 组织可提高细胞活力和 🐡 产量。
酶消化时 🦢 间会影响细胞产 🐈 量和质量。优化消化。条件以获得最佳 🦈 结果
小 🌹 心操作以避免损伤 🐺 细 🦢 胞。
可以使用流式细胞 🌲 仪对脂肪 🐒 干细胞进行免疫表型分析，验证其细胞类型。
2、大鼠脂肪间充质干细 🦉 胞提取
大鼠脂肪 🐅 间充质干细胞的提取
材料：大鼠
脂肪组织（皮下或内 🦍 脏脂 🐝 肪）
游离 🐠 酶混合物 🐈 （胶原 🐬 酶 I 和 II）
生理 🐋 盐水 🐺
70% 乙 🌺 醇 🐬
培 🦍 养 🌴 基（如 🌲 DMEM/F12）
抗生素抗真菌 🕷 液（如青霉素链霉素两 🐧 性霉素 B）
血清（如胎牛 🍀 血清 🌿 ）
步骤：1. 组织 🦋 采集：
麻醉大鼠并处死 🌻 。
移除脂肪组 🐡 织，并立即放入生 🐘 理盐水 🐎 中冲洗。
2. 消 🐎 毒 🍁 ：
用 70% 乙醇对脂肪组织进行消 🌳 毒。
3. 消化 🐋 ：
将 🍀 脂肪组织剪成 🌼 小块（约 🪴 12 mm3）。
将 脂肪组织转 🦊 移到含有游离酶混合物的消化缓冲液中（如 0.2% 胶原酶 I 和胶原酶 0.1% 在 II，生理盐水中制备）。
于 37°C 下孵 🦍 育 🐺 12 小时，不断搅拌 🦆 。
4. 细 🌾 胞离心：
将消 🌳 化后的悬液离心（1500 rpm，10 分钟）。
除 🐛 去上清液。
5. 红 🦁 细胞 🦊 裂 🌷 解：
加入 🦅 红细胞裂解缓冲液（如缓冲 🕊 液 🐋 ACK 至细胞）沉淀中，并孵育 510 分（钟根据红细胞数量）。
离 🕊 心 🌾 （1500 rpm，5 分 🌺 钟）。
除去 🐺 上清 🦋 液。
6. 细 🐎 胞培养：
将细胞沉淀重悬于 💮 培养基中，并加入抗 🦄 生素抗真菌液和血清。
将细胞接种到培养皿 🪴 或 🕸 培养瓶中。
放置于 37°C、5% CO2 的 🐧 培养箱中培养。
7. 细 🌼 胞 🌷 传 ☘ 代：
当细胞达 🐠 到约 80% 融合 🌾 度时，进行传代。
用胰蛋白酶消化细胞，并用 🌿 培养基 🌸 终止消 🐒 化。
离心细 🌴 胞并重悬于 🌻 新鲜培养基中。
接种到新的培养容 🐵 器中。
提示：游离酶混合物的浓度和孵 💮 育时间可能因脂肪组 🌻 织来源和消化效率而异。
为了获得更高 🦄 的产率，可 🐠 ，以，使用脂肪组织消化液包含其 🕷 他酶如脂酶。
可以通过 🌴 流 🪴 式细胞术或免疫组化染色等技术鉴定脂肪间充质干细 🐠 胞。
3、大鼠脂 🍁 肪干细胞原代培养
大鼠 🐱 脂肪干细胞原 🦈 代培养 💮
材料：雄性 🌴 SpragueDawley 大鼠（约 🐟 150200 克）
Dulbecco's Modified Eagle's Medium（DMEM）含 🦁 10% 胎牛 ☘ 血清（FBS）
胶 🦅 原酶 🐛 IV (2 mg/mL)
脂肪消化 🐅 酶（0.1%）
胰 🦢 蛋白 🦢 酶（0.1%）
离心机培养皿
移液管
无菌操 🐳 作 🐞 台 🦍
步骤：1. 大鼠麻醉和处死：将大鼠用戊巴比妥钠麻醉 🌹 （50 mg/kg，腹腔注射）。然。后进行颈 🌵 椎脱臼处死 🍀
2. 脂肪组 🌲 织分离：从腹部区域无菌切 🐴 取脂肪垫。去。除多余的结 🐎 缔组织和血管
3. 酶消化：将脂肪组织剪成小 🍁 块，加 🐈 入含有胶原酶 IV 的 DMEM/FBS 溶液中。在 37°C 摇床上消化 🕸 小 12 时。
4. 离心和收集：消化后，将悬浮液离心（1200 g，10 分钟收集 🦄 ）。沉。淀 🌵 细胞
5. 细胞分离：将沉 🦊 淀细胞重悬于含脂肪消化酶和胰蛋白酶的 DMEM/FBS 溶液中。在 37°C 摇床上消化分 3060 钟。
6. 离心和收集：消化后，再次离 🐡 心悬浮液（1200 g，10 分钟收集）。沉。淀脂肪干细胞
7. 细胞 🦋 培养：将脂肪干细胞重悬于含有 10% FBS 的培养 🐕 DMEM 基中，并接种到培养皿中。在 37°C、5% CO2 条。件下培养
8. 培养基更换：每隔 23 天 🐝 更换培养基，去除脱落的细胞和细胞 🌴 碎片。
9. 细胞传代：当细 🐺 胞达到 8090% 的融合时，将其 🐼 传代到新 🐧 的培养皿中。
注 🐒 意 🦈 事项 🦉 ：
严格遵守无菌操作 🐱 ，以防止培养物污染。
消化时间取决 🦈 于脂肪组 🐦 织 🦉 的厚度和大小。
适当 🐳 平衡脂肪消化酶和胰蛋白酶的浓度，以，最大限度 🕷 地释放脂肪干细 🦟 胞同时最小化细胞损伤。
培养基中 FBS 的浓度可以根据细胞生 💮 长和增殖需求进行调整。
4、脂肪干细胞 🐞 研究应用现状
脂肪干细胞研究 🦉 应用 🐟 现状
脂肪干细胞 (ASCs) 是 🪴 一种多能干细胞，具，有分化为多种细胞类型的潜力包括脂肪细胞、软骨 🌼 细胞和神经细胞。它，们。广泛分布于全身脂肪组 🐼 织中易于获取和分离这些特性使得 ASCs 成为。再生医学和组织工程研究极具吸引力的候选者
临床应用脂肪移植： ASCs 可用于增强脂肪移植的存活率和体积，从而改善美观 💮 和 🐎 修复损伤的组织。
组织修复： ASCs 已成功用于修复 🌸 各种组织，包括软骨骨、头、心 🌳 脏和皮肤。它，们。能分泌生长因子和促进血管生成促进组织再生
免疫调节： ASCs 具有免疫调节特性，可以抑制免疫 🐼 反应和促进组织修复。它。们 🌸 已被 🐵 用于治疗自身免疫性疾病和炎症性疾病
抗衰老： ASCs 能分泌多种生长因子 🐞 ，可以延缓衰老 🌹 过程和改善组织功能。它。们被认为是抗衰老治疗的潜在选择 🐳
研究应用疾病建模： ASCs 可用于 🦅 建立体内疾病模型，例如肥胖、糖尿病和心血管疾病。这。有助于研究疾病的机制和开发新的治疗方法
药物筛选： ASCs 可用于筛选候选药物的有效性和安全性。它们能对药物进行体内反应，提。供有关药物的机制和剂量的信 🦊 息
干细胞治疗策略： 研究人员正在探索 ASCs 作为治疗各种疾病的干 🌹 细胞疗法。这 ASCs 些策略包括使用修复受损组织、调 🍀 。节 🐝 免疫系统和提供支持性微环境
挑 🐳 战和展望 🦟
尽管 ASCs 在再生 🦢 医学方面具有巨大潜力，但仍面临 🐡 一 🐝 些挑战：
分化控制： 确保分化 ASCs 为所需 🌹 细胞类型并获 🕸 得完全功能仍然是一个困 🐘 难。
免疫排斥： 使 🌿 用异体 ASCs 可 🐈 能引发免 💮 疫排斥，需要免疫抑制治疗。
标 🐳 准化： ASCs 的提取、培养和分 🐡 化条件需要标准化，以确保治疗的 🦉 一致性。
克服这些挑战将有望进一步推动 ASCs 在再生医学和组织工程中的应用。随着研究的不断深入 🐴 有望，ASCs 成为修复组织损伤、治。疗疾病和延缓 💐 衰老的有效工具
