甘肃大鼠原代干细胞价格（甘肃 🐕 大鼠原代干细胞价格多少）
- 作者: 刘伊湉
- 来源: 投稿
- 2025-06-27
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4、大鼠脂肪干 🦢 细胞原代培养
大鼠脂 🦉 肪干细胞 🕊 原代培养
材料：健康 🌸 大鼠 🦍
无菌手术器械 🦟
胰蛋白 🦍 酶消 🐺 化液
含 10% FBS 的 DMEM 培 🐱 养 🕊 基
阿霉素安放 🐳 细胞 🐠 的 💐 培养皿
步骤：1. 大 🐯 鼠准 🌷 备
麻醉 🦄 大 🦅 鼠 🌷 。
消毒 🐝 腹部区域。
2. 脂肪组 🦁 织采集
在腹白线上切 🦢 开 🍁 一个小切 🦍 口。
小心 🌴 取出腹腔脂肪垫。
将 🐡 脂 🌴 肪垫置于无 🦅 菌培养皿中。
3. 消 🌼 化
用胰蛋白酶溶液覆盖脂 🌾 肪组织，每克组织使用 12 mL 消化液。
在 37°C、5% CO2 下孵育 3060 分钟，或直至组织变软 🌷 。
每 🍀 隔 🦁 15 分钟轻柔晃动培养皿。
4. 终 🦈 止 🐎 消 🐛 化
加入等体积的含的 10% FBS 培 DMEM 养 🐅 基，终止消化 🌳 。
用移液管充 🐅 分 🌾 吹打组织，将其解聚成 🕸 单细胞悬液。
5. 离心和过 🦄 滤
将细胞悬液在 🕊 300 g 下离心 5 分钟。
弃 🦈 去上清液 🦋 ，收集沉淀 🐦 。
用 🦁 70 μm 滤 🌺 网过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片。
6. 红细胞 🌵 裂解
用 1 mL 红细 🌾 胞裂解液重悬细胞沉淀。
孵育 510 分钟，或直 🌲 至红细 🐧 胞完全 🌿 裂解。
用含 10% FBS 的 DMEM 培养基稀释 🌷 10 倍，终止裂解。
7. 细胞计 🐎 数和 🐡 接种
用血细胞计数板 🐘 计数细胞数目。
根据所需的细胞密 🐝 度，将细胞接种到安 🐘 放细胞的培养皿中。
加入含 10% FBS 的 DMEM 培养 🌷 基，淹没细胞。
8. 培 🐈 养 🦅
将细胞置于 37°C、5% CO2 下培 🦅 养。
每 23 天 🌻 更换培 🌷 养基 🦄 。
提示：为维 🐶 持细胞分化潜 🌲 力，定期加入阿霉素 (200 ng/mL)。
定期监 🐕 测细胞形态 🐵 和生长情况。
大约 🌾 需要 710 天才能获得 🌺 稳定的原代大鼠 🌾 脂肪干细胞培养物。
