PBMC诱导干细胞（人pbmc诱导 🕸 巨噬细胞过程详解）
- 作者: 张苏酥
- 来源: 投稿
- 2025-05-22
1、PBMC诱导干细胞 🌳
外周血单核细胞诱 🌾 导多能干细胞（iPSC）
定义：外周血单核细胞诱导多能干 🌴 细 🐴 胞（PBMCiPSC）是通过向外周血单核细胞（PBMC）引入重编程因子而产生的人类诱导多能干细胞（iPSC）。
来源：PBMC是 🦢 从外周 🌸 血中分离出的白细胞，包括单核细胞、淋巴细胞和粒细 🦍 胞。
重编程技 🌷 术：
PBMCiPSC的重编程通常使用以下方法 🌺 之一进行：
病毒介导：使用携带 🐠 重编程因子的逆转录病毒或慢病毒感染 PBMC。
转座子介导：使用带有重编程因子整合酶的 🐘 转座子系统 🐞 将重编程因子整合到 PBMC 基因 🐛 组中。
化学介导：使用小分子化合物或蛋白质激活 PBMC 中内源 🦅 性重编程途径。
优点：无创性：PBMC 可以通过简单的血液采集获得，这是一种无创性程 🌼 序。
高效率：PBMC 中存 🍀 在大量可重编程细胞，导 🐅 致较高的诱导效率。
患者特异性：PBMCiPSC 可以从患 🌹 者自身产生，使其成为个性化医学理想的研究工具。
缺点：病毒整合 🐋 风险：使用病毒介导的重编程方法可 🌹 能导致随机整合 🦈 ，增加突变风险。
免 🐟 疫排 🌼 斥：PBMCiPSC是同种异体细胞，如，果用于 🦟 治疗目的可能引发免疫排斥反应。
转录记忆：PBMC 可能 🐶 保留其血 🕊 液来源的转录 🦊 记忆，从而影响的 iPSC 分化潜力。
应用：PBMCiPSC 已用于广泛 🌹 的研究和治疗 🌷 应用 🕸 ，包括：
疾病建模：研究疾病机 🐋 制和开发新疗法。
药物筛选：测 🐯 试药物的安全性和 🐟 有效性。
细胞治疗：为再生医学和替代组织工程产生 🐼 患者特异性细 🐵 胞。
个性化医学：开 🐯 发量 🦋 身定制的医疗干预措 🐞 施。
2、人 🐧 pbmc诱导巨噬细胞过程详解
人PBMC诱导巨噬 🌺 细胞过 ☘ 程详 🕷 解
诱导人外周血单核细胞（PBMC）分化为巨噬细胞是一个广泛用于免疫学和细胞生物学研究的体外过程。以PBMC下 🐱 步骤详细描述了使用细胞因子和血清因子从诱导巨噬细胞的过程：
材料人PBMC（新鲜 🦁 分离或 🐦 冷冻 🦅 的）
RPMI 1640 培 🕊 养 🍀 基 🦋
10% 胎牛 🌾 血清（FBS）
巨噬细胞集落 🦊 刺激因 🐱 子 🌲 （MCSF）
格兰氏阴性链霉菌素血清 🐞 （GMCSF）
培养板或 🐎 培养瓶
步骤1. PBMC分离 🐠
如果使用新鲜的PBMC，请使用密度梯度离心法从全 🐝 血中分离PBMC。
如果使用 🐵 冷冻的PBMC，请 🐺 将其按照制造商的说明进行复苏。
2. 细胞 🐟 培 🌺 养 🐒
将PBMC接种到含有 RPMI 1640 培养 🐘 基 + 10% FBS 的 🐝 培养板 ☘ 或培养瓶中。
细胞密 🦅 度应为每毫升培养基 12 x 10^6 个 🕊 细胞 🌻 。
加入MCSF (50 ng/mL) 和 GMCSF (10 ng/mL) 诱导巨噬细胞分化 🐒 。
3. 培养 🐝 条 🦆 件 🌿
将细 🐼 胞培养在 37°C、5% CO2 的潮 🪴 湿 🦁 孵箱中。
每 🌸 隔23天更换培养基和 🐵 补充细胞因子。
4. 巨噬 🪴 细胞分化 🐬
培养 57 天后，PBMC 将分化为巨噬细胞 🐳 。
诱导的巨 🐡 噬细胞将表现出吞噬作用、抗原提呈和细胞因子产生等巨噬细胞特性。
5. 收 🐒 获巨噬细胞
当巨噬细胞完全分化 🌴 后，可以通过 🦈 轻柔的刮除法或胰蛋白酶消化法从培养物中收获。
收获的巨噬细胞可 🌳 以用 🐘 于各种实验，例如吞噬作用分析、免疫表型和功能研究。
提示使用 🌾 高纯度的PBMC对于成功诱导 🐬 巨噬细胞至关重要 ☘ 。
在 🐴 培养期间 🍀 监测细胞活力，并根据需要调整 🦍 细胞因子浓度。
诱导 🍀 的巨噬细胞 🐬 可以进一步极化为 M1（促炎性）或 M2（抗炎性 🦢 ）亚群，具体取决于刺激物和培养条件。
3、pbmc诱导巨噬 🐦 细胞过程
PBMC 诱导巨噬细 🐺 胞的分化过 🐅 程
外周 🌹 血单核 ☘ 细胞 (PBMC) 的分离
从外周血 🐶 中收 🐝 集全血 🌿 。
通 🍁 过 🐒 密度梯 🌷 度离心分离 PBMC。
PBMC 的 🌷 培 🦄 养 🕊
将 PBMC 以 12 x 10^6 细胞 🕸 /mL 的密度接种在 🌿 培养基中。
加入巨 🦊 噬细胞集落刺激因子 (MCSF) 或巨噬细胞刺激蛋白 (GMCSF) 等刺激因子。
集落形成培养 714 天，PBMC 将分化为 🌷 巨噬 🌲 细胞集落 🐎 。
这些集落包含未 🦉 成 🌷 熟的巨噬细胞。
成熟通过以下步 🐎 骤进一步 🐵 分化巨噬 🌾 细胞：
加入干扰素 🦄 γ (IFNγ) 或脂多糖 🌻 (LPS) 等 🐼 成熟因子。
延 🦄 长培养 🐼 时间。
产物释放成熟的巨噬细胞会释 🐠 放炎性细胞因子和趋化因子，包括：
肿瘤坏死 🐞 因子 🌷 α (TNFα)
白细 🌹 胞介素1β (IL1β)
趋化因子单 🌷 核细胞趋化蛋白1 (MCP1)
功能表征通 🌿 过以下方法表征巨噬细胞 🕊 的功能：
吞 🦄 噬作用测定
炎症反 🐬 应检测 🐝
抗原呈 🦆 递能 🌷 力分析
4、pbmc诱导巨噬细 🕸 胞
外周血单核细胞 🌻 （PBMC）诱导巨噬细胞
简介外周血单核细胞（PBMC）是循环血液中的一组白细胞，包括单核细胞和淋巴细胞。PBMC 可，以。分，化为各种免疫细胞包括巨噬细胞巨噬细胞是重要的免疫细胞具有吞噬异物和病 🐼 原体、呈。现抗原并调节炎症反应的 🐦 能力
诱导程序PBMC 诱导巨噬细胞的典型程 🪴 序如下：
1. 采集PBMC：从健康供体或患者的血液 🦈 中分离PBMC。
2. 培养在 🦟 富含血清的培养基中：将培 🌵 养在含 PBMC 有血清（通常为胎牛血清的）完全培养基中。
3. 加入巨噬细胞集落刺激因 🐘 子 (MCSF)：MCSF 是一种细胞 🦈 因子，促进 🌸 单核细胞分化为巨噬细胞。将 MCSF 添加。到培养基中
4. 培养 🌿 710 天：在培 🐯 养 37°C、5% CO2 PBMC。
5. 收获巨噬细胞：培养 🐈 期结束 🪴 时，从培养 🐵 基中收获粘附的巨噬细胞。
培养基用于诱导 PBMC 巨噬细胞 🐯 的培养基通常含有以下 🦢 成分：
RPMI 1640 培 🦋 养基
10% 胎 🌻 牛血 🦈 清 🐈
1% 青 🐬 霉素链 🐳 霉素 🐦
50 ng/mL 人 🌼 MCSF
表征诱导 🐕 的巨噬细胞可以使用以下标记进行表征 🦢 ：
表 🐒 面 🌷 标 🦋 记：CD11b、CD14、CD68
功 🐈 能标 🐛 记 🐒 ：吞噬作用、趋、化性炎症介质产生
应用PBMC 诱 🦁 导的巨噬细胞可用于各种 🦁 研究和应 🌸 用，例如：
免疫反应研究研究：巨噬细胞在炎症、感染和自身免疫性疾病中的作 🐞 用。
药物筛查 🦋 筛：选影响 🦊 巨噬细胞功能的药物。
细胞疗法：开发巨 🐒 噬细胞为免疫治 🐵 疗药物。
