培养 🐯 胚胎干细胞条件（胚胎干细胞 🦍 培养需要的条件有哪些）
- 作者: 李妍兮
- 来源: 投稿
- 2025-09-23
1、培 🌸 养胚 🪴 胎干细胞条件
培养胚胎干细胞的条件 🐼
基质：基 💮 质培 🌸 养基 🌺 （feeder free）
裸露的培 🦍 养 🌹 皿（Matrigel、Vitronectin、Laminin）
灭活 🦅 的 MEF（小鼠胚胎成纤维 🐅 细胞）
培养基：基础培养 🌼 基 🦊 ：DMEM/F12 或培养基 N2
血清替 🐵 代剂：B27 补充剂或补充剂 N2
生长因子：基本成纤维细胞生长因子 (bFGF) 或表 🦢 皮生长 🌷 因子 (EGF)
其他添加剂：白 🦍 蛋白、谷、氨酰 💐 胺 🐋 抗生素
培 🐳 养 🐅 环 🐴 境：
温 🐯 度 🦢 ：37°C
气 🍀 氛 🦆 ：5% CO2、95% 空 🐧 气
湿 🌺 度 🕊 ：95% 以 🦆 上
优化 🐱 条 🕸 件 🦊 ：
生长因子 🌳 浓 🐞 度：bFGF 或 EGF 的最佳浓度应根据所使用的特定细胞系进行确定。
培养基刷新频率 🌿 培养基：应每 23 天刷新一次，以提供新鲜的生长因子和营养物质 🦅 。
培养皿 🌲 预处理培养：基板（Matrigel 等）的预处理可改善细胞附着和增殖 🕸 。
细胞密度：最佳细胞密度会 🐝 根据细胞系而异，但通常在 20,00050,000 个细胞/厘米2 之间。
避免分化：通过 🕊 提供最 🦆 佳培养条件，如 🌼 ，适当的生长因子浓度和避免接触分化因子可以维持胚胎干细胞的未分化状态。
其 🐅 他注意 🐱 事项 🐵 ：
胚胎干细 🌵 胞培 🐬 养需要严格的无菌技 🦋 术，以防止污染。
细 🐼 胞应定期 🐵 传代以保持其活力。
培养基和生 🦉 长因子应每 🐞 批新鲜配制 🐳 。
应监测细胞形态和分化标 🌴 志物，以确保培养物的纯度和健康。
2、胚胎干细胞培养需要的条 🌹 件有哪些
胚胎干细胞培养 🐬 所需条件
1. 无血清 🐋 培养基
胚胎 🍁 干细胞 🕸 必须在无血清条件下培养，以防止血清中的生长因子和抑制因子的干 🐳 扰。
2. 条件培养 🦊 基
培养基中 🐶 需要添加条件性培养基，如 B27 补充剂或 N2 混，合物以提供必要的生长因 🐵 子和营养物质。
3. 胚胎纤维母细胞（MEF）或合 🌿 成基 🌺 质
胚胎干细 🐼 胞通常需要 MEF 或合成基质，作为培养基的底层。MEF 提，供。生长因子基质支持细胞 🌿 附着 🐬 和增殖
4. 激酶抑制 🍁 剂 🐒
培养基 🕷 中添加激酶抑制剂 🐺 ，如 Y27632 或 🐶 CHIR99021，以抑制细胞分化。
5. 氧气 🦄 浓 🦊 度 🕷
胚胎干细胞培 🐦 养的最佳氧气浓度为 35%。
6. 温 🌹 度 🦟
胚胎干细胞在 37℃ 温度 🐦 条件下培养。
7. 培养 🦄 皿类 🐝 型 🌴
胚胎 🦢 干细胞通 🐱 常在表面经过处理的培 🦍 养皿中培养，促进细胞附着。
8. 传 🌴 代
胚胎 🐧 干细胞需 🍁 要定期传代，以保持其特性。通常每隔 47 天传代。一次
9. 冷冻 🐝 保 🕊 存 💮
胚胎干细胞可以冷冻保存 🦉 以供长期储存。通常使用液氮冷冻法以保，持细胞。的活力
3、胚胎干细 🕷 胞培养属于胚 🐒 胎工程吗
4、胚胎干细胞培养二 🐞 氧化碳 🦅 的作用
胚胎干细胞培养中二氧化碳的作 🦢 用
二氧 🦉 化碳 (CO2) 在胚 🦄 胎干细胞 (ESC) 培养 🐞 中至关重要，因为它：
1. 调 💐 节细 🦆 胞 🪴 pH 值：
ESC 培 🌻 养 🐘 基通常含 🐘 有 510% 的 CO2。
CO2 溶 🐵 解于培养基中，形，成 🌷 碳酸并释放氢 🪴 离子 (H+)。
这 🐒 些 H+ 离子与培养基中的碳 🦈 酸氢盐离子 (HCO3) 反应，形成 CO2 和水 (H2O)。
这一反 ☘ 应使培养基的 pH 值保持在生理范围内 (大约这 7.4)，是生 ESC 长和生存所必需的。
2. 促进细胞增殖 🐺 和分化 🕸 ：
CO2 已 🌹 被证明可以促进 ESC 的增殖和分化。
适量的 CO2 刺激细胞外信号调节激酶 (ERK) 通路，这是 🐒 细胞增殖 ☘ 和分化 🕊 的关键信号途径。
3. 抑 🌸 制污 🍀 染 🕷 ：
CO2 有助于抑制培养物中的细菌和 🌲 真 🐯 菌污染。
CO2 溶解于培养基中时，会形 🐦 成 pH 较，低的酸性环境这对许多污染微生物是不利的。
4. 维持 🐼 多 🦍 能性 🐦 ：
CO2 已被证明可以 🐟 帮助维持 ESC 的多能性，即它们分化为不同细 🦁 胞类型的能力。
CO2 缺乏可能会导致 🐼 ESC 分化并失去其多 🦁 能 🐛 性。
二 🐅 氧化 🌹 碳浓度要求：
ESC 培养所需的 🌳 最佳 CO2 浓度取决于 ESC 系和培养条件。通常建议使用：
510%： 适用于 🐺 大多数 🌲 ESC 系。
低于 5%： 可能 🦊 导致细 🦁 胞分化。
高于 10%： 可 🐈 能 🌲 对细 🌴 胞有毒。
培养箱中的二氧 🐵 化碳调节：
在 ESC 培养中，通常使用培养箱来 🐈 调节 CO2 浓度培养箱。配，备 CO2 有。传感器和控制器以监测和调节培 🐞 养箱 🌻 内的水平
二氧化碳在胚胎干细胞培养中起着至关重要的作用，因为 🌷 它调节细胞 pH 值、促、进细胞增殖和分化抑制污染并维持多能性。适当的 CO2 浓度 🐞 对于成功和高质量的培养至关重要 ESC 。
