牙周膜干细胞研究进展（牙 🐯 周 🦊 膜干细胞原代提取）
- 作者: 李穆川
- 来源: 投稿
- 2025-06-26
1、牙周膜干 🐝 细胞 💮 研究进展
牙周膜干细 🦆 胞研究进展
牙周 🍀 膜干细胞 (PDLSCs) 是存在于牙周膜中的多能干细胞。它们具有自我更新和分化为多种 🌹 细胞类型的独特能力，这。使得它们成为牙科再生领域的潜在候选者
分化潜力PDLSCs 已被证明能够分化成各种细胞类型，包括成牙本质细胞成、纤、维细胞破骨细胞和脂肪细胞。这种分化能。力使其能够参与牙周组织的形成和再 🐕 生
再生应用PDLSCs 在牙周再生中的潜在 🦟 应用 🐈 包括：
牙槽骨再生： PDLSCs 可用于再生牙槽骨缺损 🦅 ，从而为牙科植入物提供稳定的基础。
牙龈再生： PDLSCs 可用于再生受 🦁 损的牙 🍁 龈组织，改 🕷 善牙周健康和美观。
根分叉缺损修复： PDLSCs 可用于修复根分叉处的组织缺损，防止进一步 🌿 的牙周 🕷 疾病。
组 🌷 织工程支架
PDLSCs 通常与组织工程 🌴 支架结合使用，以指导其分化和组织形成。天，然和合成材料如胶原蛋白、羟，基磷灰石和聚合物已被探索用于组织工程 🐵 支架 PDLScs 。
免疫调节特 🌻 性 🦄
PDLSCs 还具有免疫调节特性，这使其 💐 在牙周再生中具有额外的优势。它，们。能够 🦋 抑制免疫反应防止植入物排斥和破坏性炎症
当前挑战和未 🌷 来方向
尽管取得 🐈 了进 🐈 展，PDLSCs 研，究仍面临一些挑战包括 🌴 ：
异质性： PDLSCs 具有异质性，其特性和分化潜力可能因供体 🦉 和 🐵 分离方法而异。
运输和移植： 找到有效且安全的运输和移植 PDLSCs 方法至关重要，以实 🦈 现临床 🐶 应用。
规模化 🌸 生 🐞 产： 为了广泛的临床应用，需要开发规 🐡 模化生产的 PDLSCs 方法。
未来 PDLScs 研究的方向 🌲 包 🐧 括 🦁 ：
优化分化： 确定培养条件和调节 💮 因子 🌷 ，以改善 PDLSCs 的特 🐼 异性分化。
改进支 🍀 架 🌳 设计设计： 定制支架，以促进 PDLSCs 的附着、增殖和 🦄 分化。
阐明免疫调节机制： 进一步研究 PDLSCs 的免疫 🐎 调节特性，以开发新的 🦟 治疗策略。
结论牙周膜干细胞 (PDLSCs) 在牙周再生中显示出巨大 ☘ 的潜力。它们的分化能力、免。疫调节特性和与组织工程支架的兼容性使其成为修复和再生受损牙 🐋 周组织的有希望的候选者持 🐬 续的研究和创新有望进一步完善的 PDLSCs 应用，并。为牙科再生领域带来新的治疗选择
2、牙周膜干细 💐 胞 🦍 原代提取
牙周 🌻 膜干细胞原代提取
材料新鲜 🪴 拔 🌸 出的牙周病牙 🌹 齿
αMEM 培 🌵 养基
四环素双(2吡啶基 🦁 )嘧 🌺 啶 (Puromycin)
鼠表 🐼 皮生长因子 🐒 (EGF)
纤维母细 🌸 胞 🌵 生长因 🦈 子2 (FGF2)
胰 🪴 蛋白酶
胶原酶DNase I
细 🐛 胞分离培养基 🦈
血清塑料组织培养 🐎 皿和培 🐴 养 🦉 板
方法1. 牙 🐞 周膜组 🐶 织分离 🦢
将牙齿根部分 💐 别放置在 💮 无 🕸 菌培养皿中。
使用显微 🦋 解剖钳小心地从牙根表 🦋 面刮除牙周膜 🌼 组织。
将 🌳 收集的组织悬浮 🐞 在αMEM 培 🐳 养基中。
2. 酶 🦄 消 🐅 化 🐎
将 🐋 组织悬浮液转移到 🦍 50 mL 离心管中。
加入胰蛋白 🐅 酶 (0.25%) 和胶原 🐒 酶 (0.1%)，并孵育 1 小时，37°C。
在离心机 🐒 中以离心 300 x g 分 5 钟。
除去上清液 🐳 ，并用αMEM 培养基重悬细胞。
3. DNase 处 🐅 理 🦊
加入 DNase I (10 U/mL)，并孵育 🐕 15 分 🐎 钟 🐬 ，37°C。
在 🦁 离心机中以离心 300 x g 分 5 钟。
除去上清液，并用细 🐞 胞分离培养基重悬细 🐕 胞。
4. 细胞 🐝 筛 🕷 选 🌺
将细胞悬浮液转 💮 移 🐠 到含有 Puromycin (1 μg/mL) 的细胞分离培养基 🐞 中。
培养 🐟 7 天，淘汰对 Puromycin 不耐受的非 🕊 干细胞。
漂洗细 🌾 胞，并用含有 EGF (10 ng/mL) 和 FGF2 (10 ng/mL) 的αMEM 培 🦁 养基重培养。
5. 培 🦋 养 🌸 和鉴 🐝 定
将干细胞转移 🐠 到 🌷 含血清的培养基中并培 🐟 养。
使用免疫表型标记和体外分 🦈 化测定来鉴 🌹 定牙周膜 🐠 干细胞。
结果该方法将 🌾 产生富 ☘ 含牙周膜干细胞的原代细胞悬浮液。这些干细胞可以进一步培养和鉴定，用。于牙周组织 🕊 工程和再生研究
3、牙周膜干细胞提取 🦄 方法 🐝
牙周膜干 🦋 细胞提取方法
牙周膜干细胞 (PDLC) 是位于牙根表面牙周膜中的多能干细胞。它们具有自我更新和分化为多 🦉 种组织类型（如骨、软骨、神经和血 🐘 管 🐘 的能）力。
提取方法 🦉 ：
1. 微 🐈 创提取：
使用手术刀或牙钻在牙根表面创建 🦅 一 🍀 个小切口。
使用牙周刮匙小心地刮擦牙周 🐘 膜，收集细胞。
2. 牙周翻 🍀 瓣 🦋 提取：
通过手术翻起牙龈 🍁 瓣，暴露牙根。
使用牙周刮匙 🐧 收集 🕸 牙 🌷 周膜细胞。
然后 🦉 将牙龈瓣放回原位。
3. 酶促消化 🐯 提取：
将牙 🌲 根表 🦈 面切碎 🌵 成小块。
用消化酶（如胶 🌾 原 🦋 酶或胰蛋白酶）处理切块，将细胞释放到培养液中。
4. 激光辅 🦆 助提取 🐳 ：
使用 🌼 激光软化牙周膜 🐘 使 🕸 ，其更容易提取。
然后使用微量 🌵 移 🐧 液器或牙周 🌿 刮匙收集细胞。
5. 微针 🦋 提 🌼 取 🦅 ：
使用 🌸 带有微针的设备在牙 🐠 龈表面创建多个小孔。
针头深入牙周膜，收集细 🦉 胞 🐠 。
提 🐵 取后的 🌿 处 🕸 理：
将收集到的细 🐈 胞用培养液清洗并离心。
然后分离出 🦊 干细胞 🐬 并 🌻 进行培养。
影 🌲 响 🪴 因 💐 素：
PDLC 提取的成功 🌾 受多种 🌹 因素影响，包括 🐎 ：
患 🦄 者年龄年：轻患者的 🐒 PDLC 收 🌴 获率更高。
提取部 🌵 位：后牙区域比前牙区域的 PDLC 含量 🌸 更高。
提取方法：微创提取和激 🌻 光辅助提取比其他方 ☘ 法更有效率。
技术熟练度：经验丰富的牙科医生会产生更高 🌷 的 PDLC 收获 🐼 率。
4、牙周膜干细胞原代 🕷 培养
牙周 🐬 膜干 🐦 细胞原代培养
简介牙周膜干细胞（PDLSCs）是一种存在于牙周膜中的多能间充质干细胞。它们具有 🌿 自我更新、向不同细胞类型分化的能力，并、且在牙周。组、织。再生创伤愈合和骨再生中发挥着重要作用原代培养是一种从新鲜组织中分离扩增和培养干细胞的方法
材料新 🦆 鲜的牙周 🐯 膜组 🍁 织
牙周膜干细胞培养 🐬 基（含生长因子和抗生素）
组织剪酶解 🐛 液（胶原酶 IV 和透明质酸酶）
培养皿移液管
培养箱
方法
1. 分离牙周膜组织：将新提取的牙齿在无菌条件下 🌻 从牙根上分离出牙周膜组织。
2. 酶解 🐼 ：将牙周膜组织切成小块，并置于含酶解液的培养皿中。在 37°C 下孵育 🐝 小 12 时，直。至组织解离成细胞悬液
3. 过 🌷 滤：使用细胞过滤器（70 μm）去除 🐳 未消化的组 🦁 织碎片。
4. 离心：将细胞悬 🐼 液离心 5 分钟，1200 rpm，去除上清液。
5. resuspend：将 💐 细胞重悬于牙周膜干细胞培 🐵 养基中 ☘ 。
6. 接种：将细胞接种到培养皿中，密 🌷 度为 510 x 10^3 个细胞 🐱 /cm^2。
7. 培养：将细胞置于 🐟 培养 37°C、5% CO2 箱中。每 23 天。更换培养基
鉴定为了确认原代培养 🦊 细胞是否为牙周膜干细 🌸 胞，可以使用以下 🦄 鉴定方法：
形态学：PDLSCs 在培养中 🐬 呈梭形 🐎 或多角形，具有明显的细胞核和胞质。
表面标记表：PDLSCs 达 🐟 干细胞标记物，如 CD146、CD105 和 STRO1。
多能分化能：PDLSCs 够 🦍 分化为成骨细胞成、牙 🦋 本质细胞和成纤维细胞等多个细胞类型。
应用牙周膜干细胞原代培养 🦢 在以下领域具有广泛的应 🦋 用 💮 ：
牙 🌻 周组织 🌸 再生
骨再生创伤 🐅 愈合 🌹
干细胞 🐬 研 🐺 究
