人间充质 🌿 干细胞标准（人 🕊 间充质干细胞治疗重症肝病多中心临床研究）

1、人间充质干细胞标准 💐

国 🍀 际标 🐳 准化 🐳 组织 (ISO) 细胞治疗产品标准 (ISCT)

ISCT 2006 年 🐛 标 🕸 准 🐠

来源：成人骨髓、脂、肪组织 🐘 脐带血或其他胎儿来 🌾 源

标记：以 CD34、CD45 和 CD73 为阳性以 🐘 ，或和为 CD14 阴性 🐬 CD11b、CD31、CD45RA HLADR

培 🦆 养：在非 🐡 血清培养基中 🦅 ，不含生长因子

表型 🐞 ：保持 🐬 原有组织特征

增殖能力：体外增殖 🐴 超 🐈 过 50 代次

分化能 🍁 力：多向分化成软骨骨、肌、腱、脂肪和神 🐺 经细胞

免 🦅 疫调节特性：抑制 T 细胞 ☘ 增殖，促进免疫耐受

ISCT 2019 年标 🐵 准 🕷

涵盖了 ISCT 2006 年标 🐠 准 💐 的所有内容

增加了一些额外的要求 🐘 ：

制造过程的标准 🦆 化和 🐠 验证

产品释放测试 🐕 ，包括安全性和有效性

患者 🌾 监测和不 ☘ 良事件报告 🌿

产 🍁 品 🌲 追溯系统

美国食品药品监 🌲 督管理局 (FDA)

21 CFR 641.65：骨髓 🐴 中的间充质干细胞

用于修复骨损伤 🦄 或软骨损伤

具体标准基于批准的适 🐳 应症 🐴

21 CFR 1271.10：真皮脂肪组织中 🌻 的 🐶 间充质干 🐋 细胞

用于 🐕 治疗严重 🐈 烧伤 🦋

具体标准基于批准的适 🕸 应症

日本厚生劳 🐛 动省 🐠 (MHLW)

生物再 🐧 生医疗 🍀 技术政策指引

规范细胞治疗产品的临床研究和商业化 💐

包 🦄 括 🐒 符合 ISCT 标准的 🐋 要求

对特定适应 🐬 症有额 🦄 外 🌵 的具体标准

欧 🐺 洲药品管理局 (EMA)

CAT 标准 1：人类 🐴 骨髓来源间充质 🦢 干细胞

制造和 🐡 释放 🐎 测试的通用标准

基 🌷 于 ISCT 标准

CAT 标准 2：人类脂肪来源间充质干 🌵 细胞

特 🐋 定于 🐈 脂 🐈 肪来源干细胞的标准

基 ☘ 于 ISCT 标准和 🌼 EMA 指 🐞 南

2、人间充质干细胞 🌾 治疗重症肝病多中心临床研究

人 🐧 间充质干细 🌻 胞治疗重症肝病多中心临床研究

重症肝病是一种致死率高的疾 🌳 病，目前缺乏 🦍 有效的治 🐶 疗方法。

间充质干细胞 (MSC) 具有 🕊 免疫调节和组织 🐟 修复的特性，被认为是一种 🌴 潜在的治疗选择。

多中心 🐬 、随、机、对照双盲 🍁 临 🦆 床研究。

招募 200 名重症肝病患者，随机分配至 MSC 治疗组 🐬 或安慰剂组。

MSC 组 🌵 MSC 患者将 🕷 接受自体或同种异 🐞 体输注。

主要终点：90 天肝脏移 🍀 植率或 🌼 死亡率。

严 🌷 重肝 🐋 病患者，包括急性肝衰 🐱 竭、失代偿性肝硬化和慢性肝炎。

ChildPugh 分级 C 或 🐠 以上。

年 🦉 龄 1865 岁。

严 🌸 重感 🐯 染 🐘

恶 🌻 性肿瘤

活动 🐠 性肝炎 🌷

移 🐦 植禁 🪴 忌症

MSC 组：静脉输 🐈 注自体或同种异体 MSC，剂量为 1×10^6 个细胞/千克体重。

安慰剂组：静脉 🦋 输 🦁 注生理盐水作为安慰剂。

患 🐞 者将在输注前输注 🐕 、后 1、3、6、12、18 和 24 个月进行随访。

评估指标包括：肝 🐦 功能、炎、症标志物生 🦍 活质量和不良事件 🦈 。

MSC 治疗组与安慰 🐎 剂组相比，90 天肝脏移植率或死亡率降 🌿 低。

MSC 治疗 🌼 组肝功能改善，炎，症标志物降低生活质量提高。

MSC 治疗 🍀 安全性良好，不良事件发生率低。

这项研究将为重症肝病患者提供新的治疗 🌸 选择。如果治疗 MSC 被证明是安全有效的，它，可。能会改变重症 🐟 肝病的治疗格局提高患者的预后

3、人 🐕 间充质干细 🐞 胞培养基说明书

人间充质干细胞培 🕷 养基说明书

人间充质干 🐈 细胞培养基是一种无血清无、动物成分的培养基，专门用于体外培养人骨髓间充质干细胞 (MSC)。该培养基，含有生长因子和其他必需营养素可支持的生长 MSC 增、殖。和分化

基础培养基（含无机盐、维生素和微量元 🐠 素）

生长因子：成纤维细胞生长因子 (FGF)、表皮生长因子 (EGF)、血小板衍生生长因 🐅 子 (PDGF)

其 🌼 他补充剂

培养基应 🕸 在 4°C 下避光保存 🌷 。

不 🐘 要冷冻培养基。

培 🐧 养基使用 🐝 前的准备

在使用前，将，培养基从冰 🌷 箱中 🌷 取 🦍 出在室温下回温至 1525°C。

轻柔地 🐈 晃动培养基瓶以均匀混 🐒 合。

1. 在无菌条件下，将 MSC 接种到预先涂有培 🌺 养基或胶 🐘 原蛋白的培养皿或培养瓶中。

2. 添加足够的培养基以覆 🐦 盖细胞。建议的接种密度为每平方厘米 个细胞。

3. 将培养物置于 37°C、5% CO2 的培 🌾 养箱中。

4. 每 23 天更换一次培养 🐡 基。

5. 当细胞达到 7080% 的汇合度时，进行传 🐕 代。

1. 移 🦈 除培养基并用 🦊 无菌 PBS 冲洗细胞。

2. 用胰酶 🐧 或其他适 🌲 当的解离剂 🌹 解离细胞。

3. 钝化胰 💐 酶，并用 🐎 新鲜培养基重悬细胞 🌿 。

4. 将细胞接种到新鲜的 🌿 培养皿或培养 🌺 瓶中。

培养基维护 🦅

培养基需 🌷 要每 23 天更换 🌹 一次 🐛 。

旧培养基应小心 🦅 移除，避免破 🌼 坏细胞。

新培 🌳 养基应预先加温至 🐦 37°C。

仅将培养基用于体外 🪴 培养。

避免 🐵 接 🐕 触皮肤和眼 🌸 睛。

在无菌条 💐 件下处理培养基和 🐒 细胞。

培养基仅供研究用途 🐦 ，不得用于 🦍 临床应用。

4、成人间充质干细胞怎么提 🌺 取?

成 🐦 人间充质干细胞 🌷 提取方法

1. 组织活 🌼 检 💐

抽取骨髓：从骨盆或胸骨抽取骨 🐺 髓 🐧 ，富含间充质干细胞。

皮下脂肪抽吸术：从腹部或大腿抽取皮下脂肪组织，也 🦢 含有间充质干细胞。

2. 周 🦉 围 🐠 血采集

白细胞分离术：从外周血中分离出单核细胞，其中包含间充质干细胞 🐵 。

3. 脐带血 🐅 采 🐬 集 🦢

从 🦉 新生儿的脐带血中收集脐 🐝 带血干细胞 🐞 ，其中包括间充质干细胞。

4. 羊膜液采 🐬 集

从怀孕母亲的羊膜腔中收集羊膜液 🐟 ，含有间充质干细胞。

提取 🌾 过 🌿 程：

提取过程因具体来源而异，但 🐼 通常涉 🐺 及以下步骤：

1. 样本采集：使用 🐱 上述方法采集样 💮 本。

2. 酶处理：使 🐼 用酶（如胶原酶）消化组织，释放间充质干细胞。

3. 梯度离心 🌻 ：使用梯度离心法将间充质干细胞与其他细胞分离开来。

4. 细胞贴壁：将收集 🐛 的细胞接种到培养皿中，间充质干细胞会贴壁生长。

5. 克隆形成：将细胞培养成克 🐝 隆，每个克隆来源于单个间充质干细胞。

6. 鉴定：使用表面标记物（如 CD73、CD90、CD105）对 🐘 间充质干细胞进行鉴定。

提取 🪴 的间充质干细胞可用于各种研究和治疗应用，包括组织再生、免疫调节和疾病治疗。