小鼠外周血干细胞分离（小鼠外周血淋巴细胞分离实 🐕 验报告）
- 作者: 朱闰颜
- 来源: 投稿
- 2025-05-15
1、小 🍀 鼠外周血干细胞分离
小 🦉 鼠 🦊 外 🦈 周血干细胞分离
材料：小鼠
抗 🐘 凝 🦆 血剂（如肝素 🐶 ）
淋巴细 🌺 胞分 🌷 离 🐕 液
离心机移液枪
培养皿
磁 🐕 珠（针对 🐯 干细胞表面标记）
磁性 🦋 分离 🦄 架
步骤：1. 采集 💮 外周血
对 🐈 小鼠 🐕 进行麻醉。
从眼眶后 🌳 静脉或尾静脉采集至少 1 mL 外周血，并加入含有抗凝血 🌳 剂（如肝素 💐 ）的管中。
2. 淋巴细胞 🐶 分离
将全 💮 血转移到含淋巴 🐅 细胞分离液的离心管中。
以 400 x g 离 🐅 心 30 分钟 🌹 。
取出 💮 位于分离液和血浆界面 🐬 上的淋巴细胞层。
3. 移除 🐋 红 🌷 细 🦋 胞
将淋巴细胞悬浮 🦅 液转移 🐅 到新离心管中。
加 🌳 入 🐧 红细胞溶液并孵育 5 分钟。
补充培养基并以 400 x g 离心 🐺 5 分钟。
4. 磁性分 🐺 离干细 🐅 胞
将 🐝 磁珠与 🦟 淋巴细胞混 🦢 合并孵育 30 分钟。
将混合 🍀 物转移 🐬 到磁性分离架上。
将 💐 磁 🪴 性分离架静置分 5 钟，让磁珠与干细胞结合 🦆 。
收集磁珠上结合的干 🐵 细 🌵 胞磁（性 🐕 细胞）。
5. 洗涤 🪴 和收集干细 🌴 胞 🐬
将磁性细 🌸 胞洗涤并以适当的培养基重悬浮。
再次进行磁性分离以进一步纯化干细 🐝 胞。
收 🐋 集纯 🐈 化的干细胞 🐡 悬浮液。
结果：本方法将分离出小鼠外周血干细胞，这些干细胞 🐱 可用于进一步研 🐧 究或 🐈 实验。
2、小鼠外周血淋巴细胞 🕊 分离实验 🦉 报告
小鼠外周血淋巴细胞 🦄 分离实验报告
实验 🐳 目的：
从小 🕸 鼠外周血中分离淋巴细胞。
评估分离后淋巴细胞 🐕 的纯度和活力。
材料和方 ☘ 法 🐛 ：
材料：小鼠
采 🐴 血管（含抗凝 🕷 剂 🌻 ，如 EDTA）
离心机FicollPaque 密 🦟 度梯度液
PBS（pH 7.2）
流 🦉 式 🦉 细 🌸 胞仪
标记 🕷 抗体 🐎 ：CD3FITC、CD19PE、7AAD
方法：小 🐅 鼠 🐧 采血：
将 🌵 小鼠麻 🕊 醉。
从小鼠 🌷 眼眶静脉采血约 1 mL。
淋 🌻 巴 🌼 细胞 🐧 分离：
将全血转 🐴 移到含 FicollPaque 密度梯度液的离心管中。
以 🐼 400 x g 离心 30 分 🦉 钟 🌻 ，室温。
分 🌸 离出单核细胞层（位于密度梯度液和血浆之间）。
将单核 🍁 细胞层转移到新的离心管中，用 PBS 洗涤两次。
淋 🍁 巴细胞 🐦 纯化（可选）：
使用磁珠或流 🐡 式细胞分选技术 💐 进一步纯化淋巴细胞。
淋巴细 🐕 胞 🐘 活力评估 🐼 ：
用 🌸 7AAD 染色淋巴细胞 🐱 以确定细胞活力 🐈 。
使用流 🌹 式细胞 🦁 仪分析活细胞（7AAD 阴性）的百分比。
结果：分 🐒 离产 🐶 量 🕸 ：
分离后淋巴细胞的 🐺 产量约为每 🐛 毫升血 🦅 液 12 x 10^6 个细胞。
纯度：流式细胞术 🐎 分析显示 🐅 细胞，CD3+ T 和细胞 CD19+ B 的纯度分别 🦉 为和 >90% >85%。
活力：7AAD 染色检测 💐 显示，分 🌿 离后的淋巴细胞活力 >95%。
讨论：成功分离了纯度和活力都很高的外 🦆 周血淋巴细胞分离。后的淋巴细胞可用于各种免疫学研究，如细胞培 🐴 养、流。式细胞术分析和功能检测
结论：本实验建立了从外周血中分离小鼠淋巴细胞的有 🕊 效方法分离。后的淋巴细胞具有高纯度 🐟 和活力，适。合于进一步的研究
3、小鼠神经干细胞的分 🐳 离及 🍁 培养实验
小鼠神经干细胞的分 🐺 离及培养实 🌿 验
材料和仪 🐈 器 🌳 ：
E14 小鼠胚 🐳 胎 🐡
Hank's 平衡 🦋 盐溶 🦊 液 🐴 (HBSS)
胰 💐 蛋 🐒 白 🌾 酶
DNase I
神 💮 经元 🪴 培养 🐋 基
培养瓶和培养板 ☘
显微镜无菌 🐝 操作 🐝 台 🦉
实 🌹 验步骤：
1. 解剖胚 🦉 胎
在无菌操作台上取出 E14 小鼠胚胎，将其放入盛有 HBSS 的培 🌺 养皿 🐘 中。
用剪 🐡 刀沿着胚 💐 胎纵向切 🦊 开，小心取出脑组织。
2. 解 🌸 离脑 🐧 组 🐳 织
将脑组织剪成小块，放入 🐋 装有 1ml 胰蛋白 🐕 酶溶液 💐 的离心管中。
在 37°C 孵育 20 分 🍁 钟，每分 🐕 钟 5 轻 🕸 轻吹打一次。
用 1ml 神 🦉 经元培养基终止酶解反应。
3. 去 🌾 除细 🦟 胞 🦋 碎片
将细胞悬液过滤通过细胞 🌿 过滤 40μm 网，去除 🦁 细胞碎片。
用神经元培养基将细胞悬液 🐡 稀 💐 释 ☘ 至 10ml。
4. 离心 🐝 并 🐦 重 🌴 悬
将细胞悬 🐶 液离心 🕸 5 分钟，1000rpm。
弃去上清液，用 1ml 神经元培养 🦄 基重悬沉淀。
5. 培 🌲 养神经干细胞
将细胞悬液接种 🦟 到预先涂有聚 🌸 赖氨酸的培养瓶或 🦈 培养板中。
在 37°C、5% CO2 培养箱中 🌴 培养。
结果：经过几天培养，细胞开始增殖 🐘 并形 💐 成神经干细胞集落。
神 🐧 经干细胞集 🕸 落呈圆形或卵圆形，具有明亮的细胞体和较少的突起。
注意：所有 ☘ 操作必须在无 🐞 菌 🐘 条件下进行。
培 🐱 养基应每隔 23 天更换一次。
神经干 🐼 细胞集落可以进一步分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细 🐛 胞。
4、小鼠造血 🕷 干 🐺 细胞分离 试剂盒
小鼠造血干细胞分离试剂 🌾 盒
产 🕸 品详 🌷 情 🌷
小鼠造血干细胞分离试剂盒是一款全面的试剂套件，专为从小鼠骨 🌻 髓或外周 🦁 血中纯化造血干细胞 (HSC) 而设计。该试剂盒包含高纯度抗体、磁，珠和缓冲液可通过磁分离技术高效分离 HSC。
特点高纯 🦆 度：试剂盒中的抗体经过严格筛选和优化，可特异性结 💐 合 🌷 HSC 表面标记物。
高效：磁珠具有出色的磁性 🌵 ，可快速 🌿 和彻底地捕获 HSC。
方便：试剂 🌷 盒操作简便，包，含详细的说明书指导用户完成每个步骤。
可扩展：该试剂盒可 🐟 用于分离小批量或 🌿 大批量 HSC。
组分CD34 抗 🌺 体偶联 🐶 磁珠 🌲
CD45R (B220) 抗体偶联 🐴 磁珠
TER119 抗体偶 🌵 联 🌼 磁 🌳 珠
Gr1 抗 🐶 体偶联 🕊 磁珠 🐟
磁分 🐱 离 🌼 柱 🐶
洗涤缓冲 🐴 液 🦉
离心管应用
该试剂 🌸 盒可用于各种 🕸 应用，包 🦆 括：
体 🌺 外 🕊 HSC 研究
HSC 移 🦋 植 🦋
干细胞 🦢 治 🕸 疗 🐧 开发
造血系统 🌹 疾 🦈 病的 🌿 研究
存储条件 🕊
保 🪴 存 🐅 于 🕸 28°C。
避免冻融 🐧 。
注意该 🌸 试剂盒仅供研究使用。
使用前 🐟 应阅 🦊 读随 🌼 附的说明书。
个人 🌾 防护装备 🐬 是必要的。
