外泌体和干细胞鉴定wb（成体干细胞 🦅 活 🐘 体鉴定）
- 作者: 郭瑶吉
- 来源: 投稿
- 2025-05-12
1、外泌 🐝 体和干细胞鉴定wb
外泌体 🐛 鉴定
免疫印迹法（Western blot）是鉴定外泌体蛋白标志物的常见方法。典型的外泌体标 🐘 志物包括 🦊 ：
跨 🌿 膜 🐱 蛋 🐧 白（TM）： CD63、CD9、CD81
细 🐺 胞内蛋白（IC）： 热休 🕸 克蛋白70 (HSP70)、吞吐素蛋白 🐒 2 (Tsg101)
排 🪴 除蛋白（DE）： 内整合素β1（β1Integrin）
步骤：1. 外泌体提取：从细胞培 🐡 养 🦆 上清 🐯 或其他来源中提取外泌体。
2. 蛋白 🐵 质定量：使用 BCA 法或其他方法定量蛋白质浓度。
3. 样品制备：将蛋白质样品与 🌻 样品缓冲液 🐼 混合，煮沸 🐴 以变性蛋白质。
4. 凝胶电泳：将样品加载到聚丙烯酰胺凝胶上，进行电泳 🐟 分离蛋 🌻 白质。
5. 转印：将分离的 🐶 蛋白质 🐱 转移到硝酸纤维素膜上。
6. 封闭：用含非特 🌲 异性蛋 🌸 白（例如奶粉）的溶液封闭薄 🦢 膜，以减少非特异性结合。
7. 一抗 🐕 孵 🦟 育：用针对目标蛋白标志物的抗体孵育薄膜。
8. 二抗孵育：用与一抗物种相匹配的标记二抗（HRP 偶联或荧光偶联孵育 🐵 ）薄膜。
9. 显色或荧光检测：使 🕷 用化学发光剂或荧光扫描仪检测与一抗结合的二抗，从而可视化目标蛋白。
干细胞 🐦 鉴定 🦟
免疫印迹法也可用于鉴定干细胞特定标志物。常见的标志 🕷 物 🐅 包括：
胚胎干 🦈 细胞（ESC）： Oct4、Sox2、Nanog
诱导多 🦅 能干细胞（iPSC）： Oct4、Sox2、Klf4、cMyc
间充质干细 🦊 胞（MSC）： CD29、CD44、CD73、CD90、CD105
步 🐶 骤：与外泌体鉴定类似。
注意 🐬 事 🐼 项 🦍 ：
使用高质量的抗体 🦄 和缓冲液。
优化一 🐕 抗孵育和二抗孵 🐯 育条件 🌿 。
对 🦈 空白对照（未加入目标蛋白的样品）进行检测，以确定非特异性结合。
结合其他方法（如流式细胞术或免疫组 🦟 化）进行综合鉴定。
2、成体干 🦟 细胞活 🦁 体鉴定
成体干细 🌷 胞活体鉴定
定义成体干细 🐯 胞活体鉴定是指在 🌻 活体动物中直接鉴定和追踪成体干细胞的实验方法。通过活体成像技术，可以观察干细胞的定位、迁，移和。分化过程为研究干细胞的功能和应用提供重要信息
方法1. 标签技 🌴 术 🌹 ：
病毒载体：利用重组病毒 🦋 载体（如腺病毒、慢病毒）将荧光蛋白或其他标签基因导入干细胞，从而对干细胞进行标记。
转 🐈 基因小鼠：利用转基因技术，生成表达特定标签蛋白 🌹 的干细胞小鼠。
2. 成像技术 🐠 ：
双光子显微镜：具有较深的成像深度和低光毒性 🦉 ，可用于追踪活体 🦄 动物中的干细胞。
光 🐟 声成像 🐬 ：利用光与声的相互作用，可用于检测特定标签蛋白或标记物。
荧光内窥镜：可 💮 用于实时观察内腔器官中的干细胞。
3. 体内追踪 🦋 ：
细胞追踪：将标记的干细胞注射 🦈 到动物体内，并 🦉 随时间推移追 🐦 踪其迁移和分化。
免疫组织化学：利用特异性抗体检测 🌳 组织切片中的标签蛋白，从 🌵 而定位 💐 和鉴定干细胞。
优势活体监测：允许在活体动物中直接观 🌳 察干细胞的行为。
非 🪴 侵入性：与传统的体外实验相比，活体鉴定 🐵 无需取出组织或细胞 🐋 。
动态观察：可以追踪 🍁 干细胞 🕸 随时间推移的变化，包括 💮 迁移、分化和功能。
应用研究干细胞在 🐺 组织 🌺 损伤和再生中的作用。
评估干细胞移 🌾 植的安全性和有效性。
探 🐒 索干细胞调控疾病进展的机制。
开 🐳 发新的干 🕊 细胞 ☘ 疗法。
