老鼠干细胞原 🕷 代 💮 培养（小鼠胚胎干细胞培养基）
- 作者: 杨鹿绫
- 来源: 投稿
- 2025-08-18
1、老鼠干细胞原代培 🦢 养
老鼠干 🌻 细 🌷 胞原代培养 🐋
简介：原代培养是一种将细胞直接从活体组织中分离并培养在体外的手段。老鼠干细胞原代培养涉及将干细胞从老鼠胚胎或组织中提 🦍 取并在，适。当的培养条件下进行培养
步骤：1. 组 🦁 织收 🌵 集：
收集胚胎或组织（例如骨髓、脂 🦄 肪组织）。
2. 组 🐡 织消 🌹 化：
使用 🌸 酶（例如胶原酶）将组织解离成单个 🕊 细 🌸 胞悬液。
3. 细胞 🦈 分离：
通过离心或磁性分离法 🌴 从悬液中提取干细胞。
4. 培 🦄 养 🦄 ：
将干细胞接种到培养皿或培养瓶中 🦢 。
使用含生长 🌳 因 🦊 子和营养物质的培养基培养细胞。
提供合适的培养条件，例如温度、CO2浓度和湿 🐕 度。
5. 传 🕷 代 🐈 ：
当细胞达到约 80% 的汇合度时，通过消化 🌵 和重新接种将其传代到新 🌺 的培养容器 🦟 中。
培 🌿 养 🐴 条 🦊 件：
培养基：含 🐴 ESRL、LIF 或其他生长因 🌴 子的专 🐡 用干细胞培养基。
温度：37°C 恒温箱 🐶 。
CO2 浓 🐝 度：510%。
湿度 🐱 ：95% 以上 🍁 。
应用：老鼠干细胞原代培养广 🌹 泛用于 💮 研究和应用 🐞 ，包括：
干 🐶 细胞 🐈 生物学研 🐱 究。
疾病建模 🌸 和药物筛选。
再 🐒 生医学 🐕 和组织工程。
细胞治疗和靶向治 🐕 疗 🦄 。
优势：保留原 🐦 细 🐺 胞的特性和功能 🐠 。
可提供大量 🐠 纯化 💐 细胞。
为研究和治疗提供了 🌻 一 🐺 个强 🐳 大的工具。
局限性：有限的细 🐼 胞分裂次 🍀 数，称为 💐 衰老。
污染风险，例如 🐳 微 🌼 生物和非目标细胞。
需要特 🐴 殊的培养条件和技术。
2、小鼠胚胎干细胞培养基 🌹
基 🐦 础 🐝 培养基配 🌷 方：
杜尔伯克改良鹰 🐅 氏培 🦊 养基 ☘ (DMEM)，高葡萄糖
胎牛 🌷 血 🐱 清 (FBS)，15%
白蛋白 🐧 (人来源)，1 mg/mL
谷 🦄 氨酰胺 🦄 ，2 mM
β巯 🌸 基乙醇 🦍 ，0.1 mM
非必需 💮 氨基酸 🌲 溶 🌻 液，1X
青霉 🕸 素 🕷 /链霉素，100 U/mL
其他添 🌵 加剂：
白 🌺 细胞介素 🐈 2 (IL2)，1000 U/mL
白 🌸 细胞介 🐟 素6 (IL6)，10 ng/mL
白细胞介 🐋 素11 (IL11)，10 ng/mL
LIF (白 🌼 血病 🦈 抑制因 🐧 子)，1000 U/mL
PD（MEK 抑 🦈 制 🐳 剂），1 μM
CHIR99021（GSK3β 抑制 🐬 剂），3 μM
A8301（FGF2 受 🐝 体 🪴 抑制剂），1 μM
培养条件 🐅 ：
培养 🌹 板或培养皿涂抹明胶或聚 🌾 L鸟氨酸
37°C
5% CO2
每 23 天更换 🪴 培 🦍 养基 🦊
传代：使用胰蛋白酶EDTA 溶液或刮 🌻 板传代细胞
将细胞分裂 🌺 比例为 1:41:8
传代后，加 🦆 入 🦈 新鲜培养基并补充生长 🦉 因子
注意：培养 💮 基配方和 🌾 添加剂可能因不同 🦉 的研究实验室而异。
根据细胞系的不同，可能需要调整 🌸 培养条件。
定 🐵 期监测培养基以确保 🍀 无菌 🐕 。
传 🍀 代时应小心处理细胞，以避免 🌷 损坏或污染。
3、小鼠骨髓 🦢 干细胞培养 🐈
小 🌺 鼠骨髓 🌲 干细胞培养
材料：小鼠 🦆 骨 🦊 髓 🐟
Dulbecco's改良伊格 🌷 尔培养基 (DMEM)
10% 小 🦆 牛 🐅 血清 🕸
1% 青霉 🦄 素/链霉素
细胞因子 🌹 （GMCSF、IL3 等）
步骤：1. 分离骨髓 🌹 干细 🌿 胞 🐘 ：
将小 🐬 鼠处死 🐼 。
收 🐬 集股 🐋 骨 🐝 和胫骨。
用无菌 PBS 冲洗骨骼，去除软组 🐅 织 🌺 。
用 16G 針頭 🦁 從骨 🐴 骼末端抽吸 🦁 骨髓。
2. 紅 🍁 血球 🌳 裂 🍁 解：
將骨髓懸濁 🐝 液與 🐱 紅血球裂解緩衝液（155 mM NH4Cl、10 mM KHCO3、0.1 mM EDTA）按 1:5 的比例混 🌲 合。
室溫 🌻 孵 🍀 育 5 分鐘 🦄 。
用無菌 PBS 洗滌 🍁 細胞。
3. 細胞 🐅 培養 🐋 ：
將 🐞 細胞懸浮在含 10% 小牛血清、1% 青霉素/链 🦍 霉素的 DMEM 中。
加入適當的細 🌷 胞因 🌿 子（例 🦅 如 GMCSF、IL3）。
將細胞接種到 🐱 培養皿中，密度約為 15 x 10^5 個細胞/cm^2。
將培 🪴 養皿置於 5% CO2、37°C 的培養箱中培養。
4. 培 🌲 養維護 🌿 ：
每 🐡 隔 23 天更换培養基 🦊 。
可根 🌲 據需要添加新鮮細胞因子。
根據細胞生長情 🐴 況，每 57 天傳代細胞 🕊 。
注意 🦆 事項：
確 🦈 保無菌操作，以防止細胞污 🦍 染 🌸 。
選擇合適的細胞因 🦊 子 💐 ，以促 🦈 進骨髓干細胞的增殖和分化。
監測 🐦 細胞生長，並根據需要調節培養 💮 條件。
傳代細胞時使用 🐟 新 🍁 鮮培 🌷 養基，以避免細胞衰竭。
4、鼠 🐯 肝细胞的原代培养
鼠 🐼 肝细胞 🐡 的原代培养
简介原代培养是指从活体组织中分 🐴 离并 🐎 培养其细胞，以保持其原始特性。鼠，肝细胞。的原代培养广泛用于研究肝脏的生物学和病理生理学 🐬 以及开发新的治疗方法
材料SpragueDawley 雄性大 🦍 鼠（68 周 🌹 龄 🌾 ）
Hank's 平衡 🍀 盐溶液 🐞 (HBSS)
0.05% 胰蛋白 🦈 酶溶 🐠 液 🐳
95% 乙醇 🌺
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)/F12 培养基 🦄
10% 胎牛血清 🪴 (FBS)
抗生素抗 🌳 真 🦊 菌混合 💮 液
步骤1. 大鼠麻醉和开腹：将大鼠麻 🐞 醉开腹，切取肝脏。
2. 肝脏灌注和消化：通过门静脉向 🦈 肝脏灌注 HBSS，然后注入 0.05% 胰，蛋白酶溶液在 37°C 下消化 1520 分钟。
3. 细胞分离：将消化后的组织转移到培养皿中，用培养 DMEM/F12 基终止消化。轻。轻吹打细胞 🦟 以释放肝细胞
4. 过滤和离心：将悬 🐝 浮液通过 🐝 过滤 100 μm 器过滤，去除残骸。然后将细胞在 500 x g 下离心 5 分。钟
5. 细胞复苏：将沉淀物重悬于含 10% FBS 和抗生素抗 🐴 真菌混合液的 DMEM/F12 培养基中。
6. 接种和培养：将细胞接种到预先涂有胶原或 Matrigel 的培养板或培养皿中。在培养 🦊 37°C、5% CO2 箱中培养 2448 小。时
7. 换液 🐯 ：移除培养基并用新鲜的 🐎 含有的培养基 FBS 补充。每 23 天。更换培养 🕸 基一次
优化消化时间应 🦁 根据 🌷 批次进行优化。过。度的消化会损害 🐝 细胞活力
培养基中 FBS 的浓 🌻 度可 💮 根据特定应用进行调 🦢 整。
底物的选择（胶原或 Matrigel）可影响细胞 🐒 形态 🕸 和附着。
培养条 🦁 件（温度 🪴 、CO2 浓度培养、基成分）应严格控制以确保培养的一致性。
应用鼠肝细胞 🌵 原代培养可用 🐘 于研究：
肝脏 🐝 解 💐 毒和代谢
药物代谢和转 🦁 运
肝癌 🐳 和肝 🦆 炎 🐝
新疗法 ☘ 和药 🐎 物筛选
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