反复冻融裂解干细胞（反复冻 🐛 融裂解大肠杆菌）
- 作者: 郭伊婳
- 来源: 投稿
- 2025-10-07
1、反复冻 🐝 融 🦆 裂解干细胞
反复 🐛 冻融裂 🌷 解干细 🐈 胞
反复 ☘ 冻融 🌷 裂解干细胞是一种用于从细胞培养物中提取生物分子的技术。它 🌾 涉及以下步骤：
1. 细胞冻存：将细 🐼 胞悬浮 🐕 液冷却至超低温(80°C或液氮温度)以保存细胞活性。
2. 细胞融解 🌷 ：冻存的细胞在的37°C培养基中缓慢融化。
3. 细胞裂解：使用裂解缓冲液破坏细胞膜和细胞器膜，释 🐒 放细胞内容物。
4. 离心离心：细胞裂 🦢 解液以去除 🐛 细 🦊 胞碎片。
5. 收集上清液收集：离心 🕊 后的上清液，其中含有感兴趣的生物分子。
优点：比其 🐼 他细 🐦 胞裂解方法更为有效 🐘 和温和。
不 🐧 会破坏生物分子 🦋 的结构和 🦍 活性。
可以 🐼 从多种细胞类型中提取生物分子。
缺点：冻融过程可能会 🦈 损害细胞膜 🍀 ，导致细胞 🍀 死亡。
设 🦅 备和试剂 🌲 成本高。
过程耗 🌺 时。
应用：反复冻融裂解干 🐒 细胞用于提取以下生物分子：
DNARNA
蛋白质
代谢物
该 🌺 技术还用 🕷 于 🐅 以下目的：
干细 ☘ 胞系转 🐅 染
干 🐎 细胞分选
干细胞培养物的质 🌹 量控制
2、反 💐 复冻融裂解大 🐎 肠杆菌
反 🐅 复冻融裂解大肠杆菌 🦁 的步骤
反复冻融裂解法是一种 🦍 破坏细菌细胞膜和释 🐕 放细胞内物 🐘 质的简单方法。该方法利用反复冷冻和解冻循环，导。致细胞膜形成晶体并破裂
材料：大 🐴 肠杆 🦉 菌细胞悬浮液
冰浴液氮
步骤：
1. 收获细胞：将 🦈 大肠杆菌细胞培养物离心并 🦆 收集细胞沉淀。
2. 悬浮细胞：将细胞沉淀重新 🌴 悬浮在适当的缓冲液中（如 1x PBS），浓度约为 1 x 10^9 个细胞/毫升。
3. 首次冷冻：将细胞悬浮液转移到 1.5 毫升离心 🦆 管中 🦢 ，并置于冰浴中 🐯 。
4. 首次解冻：将离心管从冰浴中取出，并在室温下涡 🦢 旋 💮 1 分 🐱 钟。
5. 重复冷冻和解冻：将离心管重新置于冰浴中 🍁 5 分钟，然后重复步骤 4，总 🐋 共进行 34 次冷冻和解冻循环 🐼 。
6. 澄清：将细胞悬浮液在 12,000 x g 下离心 10 分钟以去 🐠 除未 🐯 裂解的细胞和细胞碎片将澄清的裂解液。转。移到新的离心管中
注 🌻 意事项 🌸 ：
在进行离心 🐟 之前彻 🐶 底涡旋 🌳 细胞悬浮液，以确保均匀裂解。
如果细胞难以裂解，可以延长 🐘 冷冻时间或增加冷冻和解冻循 🦉 环次 🦁 数。
裂解 🌸 液可用于进一步分析，例如 SDSPAGE 或 Western blotting。
3、细胞反复冻融裂解时 🦄 间
1015 分 🌲 钟
4、反复冻融法裂解 🌹 细胞
反复冻融法裂 🦟 解细胞
反复冻融法是一种物理细胞裂解技术，通，过反 🐳 复冻融细胞来破坏 🐟 细胞膜和细胞结构释放细胞内容物。
原理：当细胞冻 🦍 结时细胞，内，水分形成冰 🌹 晶造成细胞质收缩和 🐴 细胞膜畸变。
解 🐡 冻时，冰，晶，融 🕊 化细胞膨胀同时细胞 🐺 膜的畸变加剧。
多次重复冻融过程会使细胞膜承 💐 受机械压力，最终 🦋 破裂。
步骤：1. 细 🐡 胞悬浮：将细胞悬浮在适当的缓冲液中。
2. 冻结：将细胞悬浮液快速冷却至80°C或液 🐎 氮中。
3. 解冻：将冻结的 🐬 细胞悬浮液快速 🐋 解冻至 🐝 室温或37°C。
4. 重复冻融：根 🦆 据 🌻 需要重复冻融步骤多次（通常为次35）。
5. 离心离心：细胞悬 🌻 浮液以去除 🐟 细胞碎片。
6. 上清 💮 液 🍁 收集收集：裂解细胞的上清液，即细 🌹 胞提取物。
优点：简单 🐧 易行，无 🌻 需特殊设备。
对 🐯 大多数细胞类型有效。
不需要使用裂解剂或酶，避 🦁 免对细胞成分的干扰。
缺点：可能会导致 🦆 某 🐺 些蛋 🐧 白质变性或降解。
对于一些坚固的细 🕷 胞，可能需要添加裂解 🦟 剂或其他辅助手段。
应用：反 🐧 复冻融法广泛用于：
蛋白质 ☘ 提取 🐝
核 🌺 酸 🦋 提 🐝 取
细胞 ☘ 组分 🌺 分 🐶 析
病毒培养 🐴
