暨大干细胞操作流程（细胞免 🐦 疫荧光操作流程）
- 作者: 陈茁沅
- 来源: 投稿
- 2025-08-18
1、暨大干细胞操作 🐕 流程
暨南大学干细胞操作流程 🌷
一、实 🐟 验准备 🐬
1. 实验人员培训：所有参与干细胞操作的人员须接受适 🌻 当的 🕊 培训和认证。
2. 实验设备和材料：准备必 🌺 要的设备（如超净工作台、二氧化碳培养箱材料如）、无（血、清培养）基生长因子和试剂。
3. 清洁和消毒清洁和消毒：工作区 🐘 域和所有使用的设备。
二 🐶 、干 🐞 细胞 🌾 培养
1. 从无 🐱 菌来源获取干细胞从无菌来源：如 🌿 （脐带血、骨髓）提取干细胞。
2. 接种干细胞培养基：将干细胞悬 🐺 液接种到含有适当生 🦢 长因子的无血清培养基中。
3. 培养 🌳 条 🍁 件：将细胞放置在 37°C、5% 二氧化碳 🐈 的培养箱中培养。
4. 监测和维持培养：定 🕷 期监测细胞生长，更换培养基并根据需要补 🐬 充 🐝 生长因子。
三、干细胞 🌼 传代
1. 传代时间：当细胞达 🐕 到 8090% 的汇合 🌿 度时，进行 🐛 传代。
2. 酶解 🐡 ：用胰蛋白酶或 TrypLE 等酶解液处理细胞以将其从培养皿中剥离。
3. 计数 🐱 和重悬 🌳 计数：细胞并重悬在新鲜培养基 🌷 中。
4. 重新接种 🦊 ：将细胞 🐶 重新接种到新的培养皿中继续培养。
四、干 🦄 细 🐝 胞分 💐 化
1. 分化诱导：添加适当的诱导因子或培养 🌼 条件以诱导干细胞 🐬 分化为所需的谱系。
2. 分化监测：通过免疫 🦅 表型 🌷 分析 🌺 、RTPCR 或其他方法监测分化过程。
3. 纯化 🐧 分化细胞：使用细胞分选技术或其 🌷 他方法纯化 🐯 所分化的细胞。
五、干细胞冷 🌸 冻保存 🐱
1. 细胞冻 🌿 存：将细胞悬液在含 💐 有 DMSO 或其他冷冻保护剂的冷 🍀 冻液中冷冻。
2. 液氮储存：将冻存的细胞保存 🦢 在液氮罐中。
3. 复苏：在需要时，将 🐛 冻存细 🐋 胞复苏。
六 🐞 、质量 🐴 控制
1. 细胞鉴定定：期进 🌼 行细胞鉴定以验证细胞特 🌲 性，如免疫表型、分化能力 🪴 等。
2. 微生 🐧 物监测：对培养物进行定期微生物监测以确保无菌性。
3. 记录 🌼 保存记录：所 ☘ 有实验步骤、观察结果和质量控制数据。
注意：始终遵循良好 🌺 的实验室规范 (GLP)。
使用个人防护装 🐋 备 🐠 （如 🐬 手套、口、罩护目镜）。
按照机 🐬 构安全 ☘ 协议处理危险物质。
在进 🐶 行任何操作之前，请咨询有经验 🐯 的研究人 🌲 员。
2、细胞免 🦁 疫荧光操作流程
细胞免 🌼 疫荧光操作流程
材料：细 🐶 胞样本 🐦
一抗和二抗 🌷
阻断液封闭液
免疫荧光染 🐳 色剂（例如 DAPI）
载玻片步骤：
1. 细 🦋 胞准 🐠 备 🦢
将细胞接种在载玻片上，并培养至所需密度 🌳 。
移除培养基并用 🌿 PBS 洗涤细胞。
2. 固 🐳 化 🦢
用 🦢 4% 多聚甲醛固定细胞 15 分钟。
用 PBS 洗 🐧 涤 🐋 细胞 🐴 。
3. 透 🐱 化 🐦
用 0.1% Triton X100 透化 🦈 细胞 10 分 🍀 钟。
用 PBS 洗 🌵 涤 🐝 细胞 🪴 。
4. 阻 🐛 断 🦍
用 5% 牛血 🦈 清白蛋白或其 💐 他阻断剂阻 🐋 断细胞 1 小时。
用 🐘 PBS 洗涤 🦁 细胞。
5. 一 🐋 抗孵 🐋 育
用 🐺 稀 🐦 释的 🐡 一抗孵育细胞过夜（4°C）。
用 🐛 PBS 洗 🌾 涤细胞 🌷 。
6. 二抗 ☘ 孵育
用稀释的二抗孵 🌵 育细胞 1 小时 🐎 （室温 🐼 ）。
用 🐅 PBS 洗涤 🌲 细胞 🐞 。
7. 染 🐵 核
用 🦅 DAPI 或其 🍀 他 🦁 核染料染色细胞 10 分钟。
用 PBS 洗 🐵 涤细胞。
8. 封 🕸 闭 🐟
用封 🐱 闭液封闭细胞，以减少非特异性结合。
用 PBS 洗涤 🐦 细 🐡 胞。
9. 安 🌾 装 🐴
将细胞用甘 🦈 油或其他安装介质 🌺 覆盖。
用载玻片覆盖细胞 🌻 。
显微镜观 🐒 察
使用 💮 荧光显 🌲 微镜观察细胞。
使用适当的 🌷 滤光片激 🐶 发和检测荧光。
注 🐵 意事项：
使用高 🐧 纯 🌺 度的试剂。
在操 🦊 作 🦁 过程 🐈 中保持无菌环境。
优化抗体稀释度和孵育时 🌼 间以获得 ☘ 最佳信号强度和特异性。
保护细胞 🐅 免受光照，以防 🍀 止荧光褪色。
3、液基细胞检查操 🐝 作流程
液 🦆 基细胞检查操作流程
1. 标 🐅 本采集 🐬
使用指定妇科检查刷收 🕷 集宫颈脱落细胞。
将刷子放入装有保 💮 存液 🐼 的容器中，并旋转10次以上。
取出 🦋 刷子，冲 🐒 ，洗刷头丢 🐕 弃刷子。
2. 标 🌴 本制片
将保存液倒入标本制 ☘ 片 🌺 的试管中。
使用移液 🌷 管吸取一定量的细胞悬液。
将细胞 🍁 悬液滴加 🐘 在载玻片上。
使用刮片 🍁 器将细 🌷 胞均 🦈 匀分散在载玻片上。
将载 🌵 玻片 🦊 风干 🌹 。
3. 标本 💐 染 🌾 色
使用帕氏染色法对标本进行染色 🌼 。
使用 🐧 自动染 🌳 色仪或手工染色。
染色 🌷 后观 🌸 察标本。
4. 标 🐟 本 🐒 评估 🐯
使 💐 用显 🐕 微镜观察 🌹 标本。
评估 🐕 细胞形态、核形态和细胞核 🐋 质比例。
根据Bethesda系 🌴 统对标本 ☘ 进行分 🦈 类。
5. 标本报 💮 告 🦋
撰写 🦁 液 🕊 基细胞检查报 🐅 告。
报告包 🌾 括标本分类、诊断结果和任何其他相关信息。
将报 💮 告发送给患者的医疗保健提 🐦 供者。
注 🐠 意事项：
确保使 🐬 用已注册和批准的液基细胞检查套件。
严格遵守 🦉 制片和染色协议 🕊 。
由合 🐕 格的病理学家 🌵 评估标 🌳 本。
患 🦍 者 🦁 应定期进行 🦢 液基细胞检查，以筛查宫颈癌前病变和宫颈癌。
4、细胞换 🌵 液的操作流程 🦟
细 🐒 胞换液的 🐛 的操 🐶 作流程
材料：培养基
无血 🕸 清培养基
培养皿 🐡 或瓶
吸管移液器
无菌瓶
培养箱
操作流程 🕊 ：
1. 准备无菌瓶：在无菌工作 🐎 台中，用无，血清培养基将一个无菌瓶润湿然后倒掉多余的培养基。
2. 移除旧培养基：使用吸管小心地从培养皿或 🐬 瓶中吸出旧培养基。尽量吸干 🌾 净旧培养基，但。不要吸起细 🐎 胞
3. 加入新鲜培养基：使用移液器将新鲜培养基缓慢地加入培养皿或瓶中加入。的培养 🌾 基。量应与之前的旧培养基量大致相同
4. 轻轻摇动轻轻摇动：培养皿或瓶，以 🕊 均匀混合新鲜培养基和 🦈 剩余的旧 🕸 培养基。
5. 转移细胞：使用移液器小心地将培养 🐧 皿或 🦁 瓶中的细胞转移到无菌瓶中。确。保将所 🐎 有细胞都转移过去
6. 重新润湿：用无血清培养基再次润湿之前的培养 🐘 皿或瓶，然后倒掉多余的培养基。
7. 孵育：将无菌瓶转移到培养箱中孵育孵育 🐬 。条 🐧 。件与之前的培养条件相同
注 🌷 意 🌸 事 🌻 项：
在 💐 整个过程中保持无菌操作。
用无血清培养基润湿培养皿或瓶可以去除 🌸 残留的培养基 🕷 ，从而防止细 🐋 胞附着。
不要 🐎 过度吸 🌲 取培养基，以免吸起细胞。
轻轻摇动培养皿或瓶 🐯 ，以避免 🐋 损坏 🐴 细胞。
孵育细胞 🐕 的时间根据细胞类型 🐱 和实验目的而定。
