提取幼鼠神经干细胞（小鼠神经干细胞的分离及培养实验 🐠 ）
- 作者: 王洛屿
- 来源: 投稿
- 2025-05-12
1、提取幼鼠神经 🦟 干细胞
材料：幼鼠 🕷 (出生 🌾 后 🐼 35 天)
无 🕷 菌 💮 培养基 🕊 ：DMEM/F12
神 🌴 经干细胞培养 ☘ 基
解剖器 🐒 械 🌿 （镊子、剪、刀 🦆 解剖剪）
培养皿培养瓶
培养液
离心机
步骤：
1. 解剖 🦟 幼鼠 🌵 ：
在无菌条件 🐼 下，将幼鼠 🐟 麻 💮 醉。
用剪刀沿背部中线 🐕 切开皮肤和肌肉。
小心移除 🦍 大脑。
2. 分离脑组 🦟 织 🕊 ：
将大脑转移至无菌 🐋 培 🌿 养皿中，在中 PBS 冲洗。
用镊子 🐒 小 🕊 心移除脑 🐱 膜。
分离出海马体 🐈 、皮质和基底神经节等感兴趣的脑组织区域 🐬 。
3. 消化组织 🐕 ：
将脑组织转移至 🌴 装有消化酶（如胰蛋白酶 🌺 或胶原酶）的培养 🌴 皿中。
在 37°C 孵育 🦉 1530 分钟，轻轻震 💮 荡 🐘 。
用 🐶 无菌培养基终止消化。
4. 离心 💐 和重悬 🐠 ：
将细胞悬液转移至离 🌷 心管中，在 1000 x g 的速 🐼 度下离心 5 分钟。
吸出上清液，用神 🌾 经干细胞培养基重悬 🐯 细胞沉淀。
5. 过滤和计 🌸 数：
将细胞 🐶 悬 🦉 液通过细胞过 40 μm 滤器过滤。
用血细胞计 🐯 数板计数细胞。
6. 培 🦍 养 🌿 ：
将细胞 🐛 以 100,000200,000 个 🐕 细胞/mL 的密度 🌿 接种到培养瓶或培养皿中。
在 37°C、5% CO2 的条件下培 🐺 养 💐 。
每 23 天更换培 🐝 养 🌲 基。
注意：整个 🦊 过程必须 🐬 在无菌条 💮 件下进行。
使用 🌳 新鲜的幼鼠组织对于获得健康的神经干细胞至关重要。
优化消化 🐴 条件以获得最大 🌷 的产率和细胞活力。
定期监测培养 🌴 物并更 🌲 换培养基，以 🐘 保持细胞健康。
2、小鼠神经干细胞的 🐒 分离及培养 🐝 实验
实验 💮 名称：小鼠神经干 🐘 细胞的分离及 💮 培养
目的：分离和培 🌷 养小鼠 🐎 神经干细胞。
为 🌳 神经科学研究 🐴 提供实验材料 🕊 。
材料：小 🦅 鼠脑组 🐧 织： embryonic day 14 (E14) 或小鼠 postnatal day 0 (P0)
HEPES 缓冲液 🐕 ： 10 mM HEPES、140 mM NaCl、5 mM KCl、1 mM MgCl2、1 mM CaCl2
神经营养因子混合物： B27（无维生素 🌸 A）、N2、EGF、FGF2
培养 🌷 基培养基： NeurobasalA
TrypLE Express： 胰蛋白酶 🐕 EDTA 溶液 🐦
过 🐴 滤网： 40 μm、70 μm
培 🦋 养 🐠 皿： 6 孔板 🐈 或培养瓶
培 🌴 养 🦁 箱 🐕 ： 5% CO2、37°C
方法：1. 分离神经干 🐼 细胞：
用无菌技术将 🦟 小鼠脑 🐝 组织取出，放入冷 HEPES 缓冲液中。
用剪刀或解剖 🦋 刀将脑组织剪碎。
用 40 μm 过滤 🦅 网过滤组织悬液，去除大的细胞碎片。
用 70 μm 过 🍀 滤网过 🦋 滤悬液，收集细胞。
2. 培养 🐴 神 🦟 经 🐬 干细胞：
将收集到的细 🐠 胞重悬于 NeurobasalA 培养基中，加入神经营养因 🌿 子混合物。
将 🐒 细胞播种到 🐅 培养 🌷 皿或培养瓶中。
将培养物放在 37°C、5% CO2 的 🐠 培养 🕸 箱中。
每隔 23 天更换 🐴 培养基。
3. 鉴 🌸 定神经干细 🌲 胞：
免疫细胞化学： 使用 Nestin、GFAP 和 Sox2 等神经干细胞标志物进行免疫细 🌳 胞化学染色。
自我更新能力： 将神经干细胞培养成神经球 🐝 ，观察其是否 🌹 能分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞。
预 🐒 期 🌵 结果：
分离出的小 🪴 鼠神经干细胞应呈 🦟 现出神经干细胞的形态和免疫表型。
在适当的培养条 🐱 件下，神经 🦆 干细胞应能够自我更新和 🐎 分化。
注意 🦍 事 🕷 项 🐒 ：
使用无菌技 🦆 术是 🦄 至关重要的，以避免污染培 🕷 养物。
神经营养因子混合物对神经干细胞的 🌹 生长和分化至关重要。
培养基必须定期 🌷 更换，以提供营养物质并去除代谢废物。
3、提取幼鼠 🐡 神经干细胞的方法
材料：幼鼠 🍁 （出 🐅 生后 🐋 13 天）
无血清培 🐞 养 🐈 基（DMEM/F12）
胰蛋 🌵 白 🦆 酶（0.25%）
神 🐶 经干细胞 🐎 培 🐱 养基（含有 EGF 和 bFGF）
培养皿移液枪
离心机
生 🐧 物 🐕 安全柜 🦟
步骤：1. 准备工作区 🦉 ：在生物安全柜内，用 70% 酒精消毒所有材料和表面。
2. 处理幼鼠处：死幼鼠 🦉 ，使用无菌技术移除头部。
3. 移除大 🐬 脑：用消毒过的移液 🐺 枪小心地将大脑分离出来，并将其转移到装有无血清培养基 🐋 的培养皿中。
4. 组织 🌷 解离：在 🦋 培养 🐞 皿中，用胰蛋白酶消化大脑 1520 分钟（37°C，孵箱中）。
5. 终止消化：加入相同 🐞 体积的神经干细胞培养基以终止消化。
6. 过滤 🕊 ：用 70 微米过 🌼 滤网过 🐼 滤细胞悬液，去除任何未消化的大块组织。
7. 离心：在 300 x g 下离 🐛 心细胞 🐎 悬 🐱 液 5 分钟。
8. 重悬：小心地去除上清液，用神经干细胞培养基重悬细 🐕 胞。
9. 种子：将细胞悬液接种 🌼 到预先包被的培养皿中。
培 🌿 养和扩 💮 增：
将培养皿置于 37°C、5% CO2 孵 🌻 箱 🍁 中。
每 23 天更换一 🐧 半 🐝 培养 🦊 基。
当神经干细胞 🍀 长到 🐴 约 80% 融合时 🐳 ，使用 Accumax 或 TrypLE 从培养皿中传代细胞。
注意：本协议使用幼鼠神经干细胞，但 🦈 可以根据需要进行修改以提取其他物种或年龄的神经干细胞。
确保所有材料在使用 🐘 前均已消 🐳 毒。
始 🦟 终 🌲 使用无菌 🐝 技术。
优化培养条件可 🕊 能需要根据使用的特定培养基和培养皿进行实验。
4、提取幼鼠神经干细胞多少 🦄 钱
抱歉，我，无，法提供有关提取幼鼠神经干细胞费用的信息因为这是一个专业领域需要专业知识和研 🐦 究我。建。议咨询 🪴 兽医或神经科学家以 🌸 获取准确信息
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