牙周膜干细胞 🐒 分型鉴定（牙周膜干细胞用什 🌷 么培养基）
- 作者: 王洛屿
- 来源: 投稿
- 2025-08-17
1、牙周膜干 🐦 细胞分型 🐋 鉴定
牙周膜干细胞分 🌳 型鉴定的方法
牙周膜干细 🐕 胞 (PDLCs) 是来自牙周膜组织的多能干细胞。PDLCs 分。型鉴定对于理解其 🌿 生物 🐟 学特性和开发基于干细胞的牙周再生疗法至关重要以下是鉴定分型的 PDLCs 常用方法：
1. 表 🦄 面标志物 🐡 分析：
CD31、CD34: 内皮细胞标志物，排除内皮细胞 🐵 污 🌺 染。
CD45: 白细 💮 胞标志物，排除免疫细胞污染。
CD73: PDLCs 的阳性标 🐛 志物。
Stro1: 间充 🦋 质 🐼 干细胞标志物 🐴 。
2. 形态学 🐛 观察：
PDLCs 通常具有纺锤形或 🦈 多边形 🦆 形态。
3. 多向 🐦 分化潜 🐕 能：
PDLCs 能够分化为成骨 🐺 细胞 🌸 成、牙骨、质细胞成纤维细胞和脂肪细胞。
4. 克隆 🌷 形成试 🌹 验：
单个 PDLCs 能 🌲 够形成克隆，表明其具有自我更新和 🐋 增殖能力 🦉 。
5. 转 🕷 录组 🐺 分析 💐 ：
RNA 测序可以揭示 PDLCs 的 🦆 转录谱，识别其独特的基因表达模式。
6. 免疫组化 🐶 染色：
特 🌲 异性 🍁 抗体可用于检测 🐈 组织切片中的 PDLCs。
基于这 🦊 些方法的 🐳 PDLCs 亚群：
1. 成 🦈 骨 🕊 诱 💐 导 PDLCs:
表达较高的成骨相关 🐦 基因，如胶原 I 型 🦉 骨 🐱 、钙素和碱性磷酸酶。
2. 成牙 🪴 骨 🐎 质诱 🐞 导 PDLCs:
表达较高的成牙 🐴 骨质相关 🐝 基因，如牙本质蛋白牙 🦋 本质基质蛋白、和 1 釉质母质蛋白。
3. 成纤维样 🕷 PDLCs:
表 🐡 达较高的成纤维细胞相关基 🌺 因，如胶原 III 型 💐 纤维、连接蛋白和纤连蛋白。
鉴定牙周膜干 🍀 细胞分 🐡 型的 🌹 意义：
PDLCs 分型鉴 🐒 定具有 🐵 以下意义：
理解 PDLCs 的异 🦟 质性和特定亚群的生物学特 🌺 性。
优化 PDLCs 的体 🕸 外培养 🕊 和分化 🌵 诱导策略。
开发靶向特定 PDLCs 亚群的 🐬 再 🌸 生治疗方法。
2、牙周膜干细胞用什么培 🦉 养基
牙周膜干细胞的培 💐 养基通常包 🍀 含 🐘 以下成分：
基 🐒 础培 🍁 养 🐝 基：
αMEM（含利多卡 🐅 因 🦁 ）
DMEM/F12
血清：胎 🐛 牛血清 🐟 （FBS）
小 🐵 牛血 🐧 清（CS）
生长 🐟 因子：
表 🐴 皮生长 🕷 因 🌵 子（EGF）
基本成纤维细胞生长因子 🕷 （bFGF）
血 🌼 小板衍生生 🌲 长因子（PDGF）
血 🪴 管内皮 ☘ 生长因子（VEGF）
抗 🍀 生 🌼 素 🐧 ：
青 🐶 霉素链 🕊 霉 🦉 素
庆大霉素 🌷
其他：左旋 🌷 谷 🐒 氨酰胺
维生 🐵 素C
胰 🐴 岛 🍀 素转移蛋白
3、牙周膜干细胞原 🌴 代提取
牙周膜干细胞原 🐝 代提取
材料：健康的人 🦅 类牙周组织（经患者同意取得）
HBSS（含 🐛 2% 胎牛血 🐵 清 🦋 ）
0.25% 胰 🐝 蛋白酶 🦋 /EDTA
胶原酶 🌵 IV
机 🕸 械 🌺 解离器
细胞培 🦢 养基（含 15% 胎 🦁 牛血 🐶 清）
培养板 🦢 或 🐦 培养瓶
步骤：1. 组织收 🌹 集：从牙龈切除健康的人类牙周组织，清 🐞 洗后置于 HBSS 中。
2. 酶消化：将组织碎片放入含 0.25% 胰 🐕 蛋白酶/EDTA 的 HBSS 中 🐦 ，置于 37°C 水浴中孵育 30 分钟。
3. 机械解离 🌺 ：将消化后的组织用机械解 🦄 离器研磨至单细胞悬浮液。
4. 胶原酶处理：加入含 🐼 胶原酶 IV 的 HBSS，继续 🦋 孵育 1 小时。
5. 过滤和离心：用滤 100 μm 网过滤细胞悬浮液，去除未消化 💐 组织碎片。然后 🍁 以 🕸 离心 1000 x g 分 5 钟。
6. 洗 🐝 涤：用洗涤 HBSS 细胞 3 次，每次 5 分钟。
7. 重悬：将细 🐳 胞 🦄 重悬于细胞培养基中。
8. 接种：将细胞接种到培 🐝 养板或培 🌻 养瓶中，置于培养 37°C、5% CO2 箱中培养。
培 🕷 养 💐 条 🦋 件：
培养基：含 15% 胎牛血清的 αMEM 或 🦢 DMEM。
培 🐘 养 🐝 条 🦟 件培养：37°C、5% CO2 箱。
细 🦆 胞 🐼 鉴 🐱 定：
可以利用以下标记物鉴定牙周膜 💐 干细 🦢 胞：
表 🐯 面 🐠 标记 🐯 ：CD49f、CD73、CD105
间充 🪴 质标 🐧 记：CD29、CD90
4、牙周膜 🐧 干细 ☘ 胞提取方法
牙周膜干细胞提取方法 🐕
1. 牙周组织取样 🕷
局部麻 🌷 醉下，用手术刀在牙周 🐝 手术部位创建一个小 🌷 切口。
使用牙周 🦋 探针或钝器，小心地分离牙周膜组织。(图1)
2. 牙周膜组 🌲 织消化 🐯
将取出 🦋 的牙周膜组织 🦊 切成小块。
将组织块 💮 放入含有 🐵 胶原酶和透明质酸酶的酶溶液中 🦉 。
在 🐱 37℃下孵育过夜，以消化细胞外基质。
3. 单 🐠 核细胞的 🦄 分离
将消化后 🌳 的组织过 🐞 滤以去除碎屑。
将 🌷 过滤后的悬液离心，以收集单核 🐋 细 🦢 胞。
单核细胞 🦁 是牙周膜干细胞的主要来源。(图2)
4. 牙周膜干细胞的富集 🪴
有多种 🕊 方 🌷 法可以富集牙周膜干细 🪴 胞：
贴壁培养法 🐕 ：将单核细胞 🦟 接种到培养 🕊 皿中，让，牙周膜干细胞贴壁生长而其他细胞悬浮。(图3)
免疫磁珠分离：使用针对牙周膜干细胞表面标志物的 🐛 磁 🦈 珠，从 🕸 单核细胞悬液中分离出牙周膜干细胞。
荧光激活分选（FACS）：使用流式细胞仪，根（据表面标志物如STRO1、CD146）对，单核细胞进 🐵 行分选以富集牙周膜干细胞。
5. 牙周膜干细胞培 🐒 养 🌿
将富集的 🕷 牙周膜干细胞接种到培养基中。
培养 🦉 基通常含有 🌹 生长因子（如EGF、bFGF）和抗生素。
牙周膜干细胞在体外培养中可以增殖和 🦄 分 🐘 化 🐅 成各种牙周组织细胞。
6. 牙周膜干 🍁 细胞鉴定
形 🪴 态学鉴定：牙周膜干细胞呈细纺锤形或多边形 🦋 细胞。
免疫表型分 🌲 析 🐘 ：牙周膜干细胞表达各种 🐎 表面标志物，如STRO1、CD146、CD90。
分化潜能：牙周膜干细胞可以分化为牙周韧带 🐈 成纤维细胞牙、釉质成牙本质细胞和牙骨质 🐟 成骨细胞。
图示：[图 🦊 1]()
[图 🦉 2]()
[图 🐦 3]()
