冻干细胞rna提取（细胞提取rna 一直放 🕊 在trizol里可以么）
- 作者: 胡非晚
- 来源: 投稿
- 2025-10-07
1、冻干细胞rna提 🦉 取
冻 🐦 干细胞 RNA 提取
材料：冻 🐈 干细 🌹 胞 🍁
Trizol 试 🐎 剂 🐘
氯仿异丙醇
75% 乙 🍀 醇 🐱
无水 🐠 乙醇
DNase I（可 💐 选）
RNA 酶抑制剂 🐕 （可 🦈 选 🐧 ）
步骤：1. 破碎细胞：使用研钵和液氮 🐱 将冻干细胞研磨成粉末。
2. 裂解细 🕸 胞：向粉末中加入 Trizol 试剂，按每细胞 100 mg 的 1 mL 比例添加。涡。旋混匀
3. 离心：在 12,000 x g 的速度 🦉 下离心 🌼 15 分钟，4°C。
4. 分离相离：心：后将出现 🐘 三个相上层相（RNA 中）、间相相（DNA 和）下层（蛋白质相）。
5. 收集 RNA 相 🐺 ：小心吸 🌼 取 🍀 上层清液相（RNA 转）移到一个新的管中。
6. 提取 RNA：向 RNA 相中 🌸 加入氯仿，按氯仿相 0.2 mL 的/1 mL RNA 比例添加。涡，旋混匀在室温放置 5 分。钟
7. 离心：在 12,000 x g 的速度下离心 15 分 🌲 钟，4°C。
8. 收集 RNA 相：再 🐴 次小心吸取 🌿 上层清液相（RNA 转）移 🌺 到一个新的管中。
9. 沉淀 RNA：向 RNA 相中 🐧 加 🐧 入异丙醇，按异丙醇相 🐳 0.5 mL 的/1 mL RNA 比例添加。涡。旋混匀
10. 离心 🐅 ：在 12,000 x g 的速度下离心 10 分 🐋 钟，4°C。
11. 洗涤 RNA 沉淀：用 75% 乙 RNA 醇洗涤沉淀，在室温下离心 🐳 5 分钟，7,500 x g。
12. 干燥 RNA 沉淀：风干 RNA 或 🦉 真空干燥沉淀。
13. 溶解 RNA：在无水乙醇或水中溶解 🕊 RNA 沉淀，浓度根 🐴 据需要而定。
可选 🌷 步 🦊 骤：
去除 DNA 污染（可选可）：以使用 DNase I 处 🐝 理 RNA 样 🐶 DNA 本以去除污染。
加入 🐺 RNA 酶抑制剂（可选）：在 RNA 提 RNA 取过程中 🐳 加入酶抑制 🐼 剂可以防止降解。
2、细 🦢 胞提取rna 一直放在trizol里可以么
否，细胞提取 RNA 后不应长时间将其保存在 🦢 TRIzol 中。
TRIzol 是一种试剂，用于 🌷 将细 🦟 胞裂解并提取 RNA、DNA 和蛋白质。它，含有强效变性剂酚和氯仿可降解 RNA。因，此将 RNA 样品长时间保 🐒 存在 TRIzol 中 RNA 会。导致降解
理想情 🦊 况下，在提取 RNA 后立即使用它进行后 🐬 续分析或将其保存在 80°C 的 🌷 低温环境中。
3、trizol提取 💐 细胞rna步骤
Trizol 提 🐕 取 🐼 细 🌴 胞 RNA 步骤
材料：Trizol 试 🌷 剂 🐵
氯仿异丙醇
75% 乙醇 (DEPC 灭 🌷 活)
RNasefree 水 🦢
设备：RNasefree 离心管和移液器 🐶
涡 🐱 旋混匀 🐟 器 🦅
离心机步骤：
1. 收 🐧 集 💮 细胞：
从 🦁 培养皿中 🕊 收集 🐶 细胞。
将细胞沉降并用 PBS 洗涤 🦢 两次。
2. 裂 🐼 解 🐶 细胞 🐘 ：
加入 1 mL Trizol 试剂至沉淀的细胞中 🐕 ，涡旋 🐺 混匀。
孵 🐺 育 🌷 5 分钟，室温。
3. 提 🌾 取 🐎 RNA：
加入 ☘ 200 μL 氯 🍀 仿，涡旋混 🌼 匀 15 秒。
孵育 3 分钟 🐘 ，室温。
12,000 x g 离心 15 分 🐦 钟 🐳 ，4°C。
4. 分 🌲 离 🐼 RNA：
离心后 🌳 ，将上清液转移至新 🍀 的离心 🕊 RNasefree 管中。
加入 500 μL 异 🌷 丙醇，涡旋混匀。
12,000 x g 离心 🌼 10 分钟 🦉 ，4°C。
5. 洗 🕸 涤 🐘 RNA：
弃去上清液，用 75% 乙醇 🐞 洗涤 RNA 沉淀两次。每次洗 🐋 涤后涡旋混匀并 7,500 x g 离心 5 分钟，4°C。
弃去最后一次洗 🐯 涤的上清液并干燥 RNA 沉淀。
6. 溶 🌳 解 🐯 RNA：
加入 🦉 2050 μL RNasefree 水溶解 RNA 沉淀。
孵 🐴 育 10 分钟，5560°C，间歇 🍁 涡 🐒 旋混匀。
注意 🐒 事项 🐵 ：
使用 RNasefree 材料至关 🐯 重要，以防 🐈 止 RNA 降解 🌸 。
离心后立即弃去上 🐝 清液，以防 🌴 止 RNA 污染。
充分干 🐵 燥 RNA 沉淀 🌹 可防止 RNase 污染 🌳 。
RNA 可在 🌵 80°C 储存长达 3 个 🕸 月 🌺 。
4、细胞提取rna一般浓 🐈 度为多 💮 少
细胞提 🐺 取 RNA 的一般 🐎 浓 🌷 度范围为 10100 ng/μL。
