脂肪原代干细胞培 🕸 养（大鼠脂肪 🐯 干细胞原代培养）
- 作者: 张北芸
- 来源: 投稿
- 2025-07-11
1、脂肪原代 🐕 干细胞培 🍀 养
脂肪原 🦆 代 🐬 干细胞 🐼 培养
简介脂肪原 🌺 代干细胞（ADSC）是从脂肪组织中分离的间充质干细胞。它们具有多向分化潜能，可，以分化为各种类型的细胞包括脂肪细胞、软、骨细胞骨细胞和神经细胞。ADSC 已，被。广泛用于再生医学领域用于治疗一系列疾病和损伤
分离 💮 和培养
1. 脂 🦋 肪组织采集：ADSC 通常从腹部或臀部脂肪组织中采集 🦋 。
2. 消化：脂肪 🐦 组织用胶原酶消化，将细胞释 🦋 放到培养 🌳 基中。
3. 分离和富 🐦 集：细胞悬液通过离心分离或密度梯度离心富集 🌵 ADSC。
4. 培养：富集的 ADSC 在含生长因子的培养基中培养 🦍 ，通常用含 10% 血清的培养 Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) 。
5. 传代：当细胞达到约 80% 的汇合度时 🐳 ，可以将它们传 🕷 代到新的培养皿 🌳 中。
培养条件培养基：DMEM、F12、αMEM 等含 🐕 生长因子的培 🌼 养 🌷 基。
血清：通常 🐧 使用 10% 小牛血清或胎牛血清作为血清 🦟 补充。
培 🐺 养温度 🐱 ：37°C
CO2：5%
汇 🐠 合 🦅 度 🌸 ：8090%
传代 🐎 比：每 34 天传代一次
培养特征形态 🌹 ：ADSC 在培养中呈纤维状或梭形，并形 🐅 成涡旋状或多角形模式。
分化能力：ADSC 具有多向 🦢 分化能力，可以分化 🦋 为脂肪细胞、软、骨 🦋 细胞骨细胞和神经细胞。
增殖能力：ADSC 在培 🐞 养中具有较高的增殖能力 🦉 。
免疫表型表：ADSC 达间充 🌾 质 ☘ 干细胞标志物，如 CD90、CD73、CD105 和 CD166。
应用ADSC 在 🦊 再生医学中具有广泛的应用 ☘ ，包括：
脂 🐎 肪 🐯 移植 🌳
软 🐛 骨 🦍 修 🐕 复
骨修复神经再生 ☘
伤口 🪴 愈 🐒 合 🐺
2、大鼠脂肪干 🐋 细胞原代培 🐅 养
大鼠脂肪干细胞原代 🐒 培 🐼 养
材 🪴 料和试剂：
大鼠培养基（DMEM/F12、LPS、抗生 🐦 素）
胶原酶胰 ☘ 蛋白 🌵 酶
细胞培 🦆 养皿
CO? 培养箱 🐬
方法：1. 大鼠麻醉和脂肪组织获取 🐬 ：
麻醉大鼠并将其处死 🐳 。
切除 🐅 腹腔 🌷 或背 🦊 部脂肪组织。
2. 组 🦉 织切 🐡 碎和消化：
将脂肪组织 🐈 切碎成 🐠 小块 🦄 。
在含有胶 🦅 原酶和胰蛋白酶的消 🐡 化缓冲液中孵育脂肪块。
3. 细胞分离和离 🐡 心：
将消化后的 🐞 组织悬液过滤以 🐺 去除细胞碎 🐝 片。
将悬液离 🐟 心以分 🐝 离细胞。
4. 培 🌻 养 🦊 ：
将 🕸 分离的细胞接种在含有培 🌷 养基和抗生素的 🦉 细胞培养皿中。
在 37°C 和 5% CO? 的 🍁 条件 🐎 下培 🌺 养细胞。
5. 培 🐒 养 🐅 基更换：
每 23 天更换培 🌲 养基，以去除废物和 🐧 补充 🦄 营养物质。
鉴别：流式细胞术：使 🐠 用特异性标记（如 CD29、CD34）鉴 🦍 别脂肪干 🕷 细胞。
多能性检测：将细胞诱导分化为脂肪细胞、软骨细胞和成 🌾 骨细胞，以证明其多能性。
应用：脂肪组织工 🐯 程 🐛
再 🐅 生 🦆 医 🕊 学
疾 🌻 病 🦍 建模 🌷
毒性研究 🐒
3、脂肪干 🐼 细胞 💮 培养注意事项
脂肪 🌲 干细胞培养注意事项 🪴
培养基 🐅 制备 🦅
使用专门为 🐛 脂肪干细胞 🌻 培养设计的培养基，例如 Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) 或 αMEM，补充 10% 胎牛血清 (FBS)。
在使用前过滤培养基，以去除任何细菌或真菌 🦍 污染物。
补充培养 🦍 基中加入生长因 🌻 子，例如 bFGF、EGF 和 PDGF，以促进细胞增殖。
细胞接种从新鲜 🐦 脂肪组织中分离出脂肪干细胞，并用胶原酶消化。
将细胞悬液离心并 🐕 重悬于培养基 🦅 中。
以适当 🌹 的密度接种细胞，通常为 5,00010,000 个细胞/cm2。
培养环境将 🐞 细胞培养在 37°C、5% CO2 的培 🌴 养箱中。
每 23 天更换培养基一次 🐒 ，以保持营养供应和去除代谢废 🌺 物。
监 🐟 测细胞 🌻 形态和增殖速率，以评估培养 🌵 条件。
传代培养当细胞达到 8090% 汇合度时，通过胰 🐬 蛋白酶消化 🕷 传代细胞 🐦 。
将细 🐛 胞分 🦈 裂到新培养皿中，然后补充新鲜培养基。
在传代过程中，保 🌿 ，持细胞的低 🌺 传代次数以避免细胞分化和失去多 🍀 能性。
污染监测定期检查培养物是否出 🐯 现 🐈 细菌或真菌污染。
使用抗生素或抗真菌剂治疗受污染的培养物或，丢弃受污 🌴 染的培养 🍀 物。
实 🌴 施无菌操作技术，以 🐛 防止培养物污染。
细胞特性培养脂肪干细胞通常呈现出多角形或纺 🐛 锤形形态。
它们 🐘 形成贴壁培养物并 🍀 表现出 🐠 高增殖速率。
脂肪干细胞能够分化成脂肪细胞、软骨细 🌷 胞和骨细胞。
其 🐕 他注 ☘ 意事项 🐱
使用高品质的 🌳 试剂和材料 🐼 。
记录所有培养步骤和观察 🐘 结果。
培养脂肪干细胞需要专门的设备和技术，因此最 🕸 好在有经验的研究人员的指导下进行。
培养 🐼 脂肪干细胞的时间 🌿 和条件可能会根据特定的研究目的而有所不同。
4、脂肪 🌼 干细胞如何 🪴 培植
脂肪 🦅 干 🦋 细胞 🐛 培植步骤
1. 脂 🐯 肪组织 🐅 获取 🦅
通过吸脂或外科手术从患者身上提取脂肪组 💮 织。
2. 分离脂 🐶 肪 🦍 干 🐛 细胞
使用酶（如 🐳 胶原酶）消 🐝 化 🦢 脂肪组织，释放脂肪细胞。
通过离心或分选 🦋 将脂肪干细胞从脂肪细胞中分离出来。
3. 增殖 🦋 和扩增 🐈
将脂肪干 🐈 细胞接种到含有生长因子的 🌼 培养基中。
通过定期换液和传代培 🐠 养细胞，使其增殖和扩增。
4. 表 🐳 征 🐵
使用流式细胞术或免疫荧 💐 光分析验证细胞为脂肪干细胞（表达标记如 CD34、CD90 和 CD105）。
确认脂肪分化潜 🌷 能 🦍 （通过诱导细胞向脂肪细胞分化）。
5. 冷 🐵 冻 🐯 保 🦍 存
为了长期储 🦁 存，脂肪干细胞在含有冷冻保护剂的溶液中冷冻（如二甲基亚砜）。
优化 🕊 培 🌼 育条 🐅 件
培养基：含有富含生 🐳 长因 🐳 子的血清或无血清培养基。
生 🐯 长因 🦋 子 🌳 ：如 bFGF、EGF 和 PDGF。
基质：如胶原 🐡 蛋白、明胶或生长因子减少凝胶。
培 🐡 养条 🍁 件：37 °C、5% CO2 和 🐦 高湿度。
注意：脂肪干细胞培育是一个复杂的过程，需要 🦢 严格的 🐠 质量控制和无菌操作 🍁 。
患者特异性因素（如年龄、健康状况）可能 🦄 会影响脂肪 🐅 干细胞的 🌿 产量和质量。
对脂肪 🦢 干细胞 🐵 进行培育和分化操作需要经过适当培训和认证的人员。
