怎么悬 🦄 浮培养干细胞（悬浮细胞培养方法和注意事项）

1、怎么悬浮培养干 🌾 细胞

悬浮培养 💮 干 🌼 细胞

悬浮培养干细胞是一种在 🕊 无基底物的液体培养基中培养干细胞的方法。与贴壁培养不同悬浮培养，允，许干细胞在。三维空间中生长从而更 🐕 接近其 🕸 在体内环境中的状态

悬浮培 🦊 养基

生物反应器或 🦟 振 🍀 荡器

无菌操作 🐘 用品

1. 选择合适 🌷 的悬浮培养基：

悬浮培养基应含有干细胞生长和增殖所需的营养物 ☘ 质，并维持适当的 pH 值和渗透压。常用的悬 🌿 浮培养基包括和 mTeSR1、hESCSFM StemPro? hESC SFM。

2. 制备干 🌸 细 🐞 胞悬液 🐴 ：

从贴壁培养皿中收集干细胞并用悬浮培养基重悬细胞。浓。度应根据培 🐧 养基的推荐值进行调节 🐧

3. 接种 🌵 生 🦄 物反 🌺 应器或振荡器：

将干细胞 🌿 悬液 🦢 接种到生物反应器或振荡器中生物反应 🐞 器。用于大规模培养，而振荡器。更适合小规模培养

4. 控制培养 ☘ 条 🐛 件：

设置适当的温度、pH 值和转速等培养条件。通常，悬浮培养干细胞的最佳温度为值为转 🐠 速为 37°C，pH 7.27.4， 100200 rpm。

5. 监测 🦍 细胞 🐎 生 🐴 长：

定期监测细胞 🐦 生长和增殖。可以通过细胞计数、流。式细胞术或其他检测 🦊 方法来评估细胞活 🐡 力

6. 传 🐝 代：

当细胞达到所需 🌻 的密度时，可以传代以继续培养。收，集细胞。悬液稀释并接种到新的培养基中

更接近生理条件：悬浮培养允许干 🪴 细胞在三维空间中生长更，类似于其在体内环境中的状态。

更高的增殖速率：悬浮培养可以促进 🐼 干细胞的增殖，产生更高的产率。

减少污染风险：悬 🐅 浮培 🪴 养不需要基底 🐕 物，因此减少了污染的风险。

易于扩展：生物反应器可用于大规 🐞 模悬浮培养，便于生产治疗 🦄 用干细胞。

需要专门的设备：悬浮培养需要生物反应器或振荡器等 🦄 专门设备。

培养基成本高：悬浮培养基通常比贴壁培 🐵 养基更昂贵。

细胞分 🌷 化 🌼 风险：长时间悬浮培养可能会导致干细胞分化 🐘 ，影响其治疗潜力。

2、悬浮细胞 🕸 培养方法和注意事项

悬浮细胞 🕊 培养 🦍 方法

悬浮细胞培养是一种使细胞在液态培养 🌳 基中生长的技术。该方法常用于培养难以贴壁或非贴壁细胞类型，例如某些淋巴细胞、巨。噬细胞和干细胞

1. 建立细胞 🕊 系：使用传代瓶或培 🐱 养皿建立悬浮细胞系。

2. 选择培养 🐡 基选择：适合目标细胞类型 🐛 的培养基，例如 RPMI 1640 或 DMEM。添加血清（通常为 510% FBS）以 🐡 。提供生长因子和其他必需营养素

3. 培 🐶 养细胞：将细 🐳 胞接种到悬浮培养瓶或培养皿中细胞，密度应根 🐞 据细胞类型和生长速率而定。

4. 培养条件：将细胞置于 37°C 和 5% CO? 的潮湿培养箱中。轻。轻摇晃或搅拌培养瓶以保持细胞悬浮 🐱 并防止沉淀

5. 监测细胞：定期监测细胞数量、活力和形态 🐯 ，以评估细胞生长状况 🐱 。

污染：悬浮细胞培养容易受到污染，因为细胞处于暴露状态。采。取严格的无菌技术以防止污染非常重 🐴 要

细胞沉淀：一些悬浮细胞类型可能在培养中倾向于沉淀。定。期摇晃或搅拌 🐶 培养物以防止细胞沉淀

培养基配方：优 🐱 化培养基配方对于 💐 懸浮细胞培养至关重要。根据细胞类型的需求调整血清、生。长因子和其他添加剂等成分

细胞计数：悬浮细胞的计数比贴壁细胞更具挑 🐺 战性。使。用血细胞计数器或显微镜计数法 🌷 来准确计数 🦁 细胞

细胞分化：长时间培养可能会导致悬浮细胞分化或特性改变。定。期传代 🦅 细胞以维持它们的特性

3、细 🌻 胞悬浮培养的类型有哪些

批式培养：细胞在封闭环境中生长培养，基，不，更，换，随着培养时间的延长 🌴 培养基中的营养物质被消耗代谢废物积累直到 🐯 细胞因缺乏营养或过度积累代谢废物而死亡。

补料分批培养：在批式培养的基础上，定，期，向培养 🐡 基中补充新鲜培养基同时抽取一定量的培养基以去除代谢废物。这，种。方法可以延长细胞培养时间提高细胞产量

灌流培养培养：基连续流经细胞培养物，新，鲜培养基从一端流入含代谢废物的培养基从另一端流出。这，种，方。法可以提供细胞持续的营养供应去除代谢废 🌼 物从而维持细 🦊 胞的高 🕷 增殖率和活力

空气升式培养：利 🕷 用空气或氧气在培养基中形成气泡，通，过气泡，的搅拌和氧气的提供增强细胞与培养 🦋 基之间的 🌷 物质交换提高细胞的增殖和代谢活性。

微载体培养：将细胞接种到小颗粒的微载 🐈 体上微载 🌹 体，在培养，基，中悬浮并搅拌通过微载体的运动和培养基的流动促进细胞的增殖和分 🌺 化。

摇瓶培养：利用摇床或振 🐱 荡器对细胞培养瓶进行摇晃或振荡，使细 🕷 胞，悬，浮在培养基中通过 💐 培养基的流动和氧气的提供促进细胞的生长。

生物反应器培养：使用专门设计的生物反应器，通过控制培养条件（如温 🌹 度、pH、溶解氧等），为，细胞生长提供最佳环境 🐟 提高细胞产量 🌲 和产品质量。

4、怎么悬 💮 浮培养干细胞的方法 🐕

悬浮培养 🐶 干细胞的方法

所需 🌻 材料：

无血清 🦁 培养基 🐡

阿格 🦆 尼胶囊

搅拌器 🐼 或生物 🐘 反应 🐴 器

培养皿或培 🐘 养瓶

1. 预处理 🦍 阿格尼 🐧 胶囊：

将阿 🦍 格尼胶囊溶解在无血清培养基中，制成 🌴 适 🐕 当浓度的溶液。

通 ☘ 常使用 510 微 🕊 克/毫升的阿格尼胶囊浓 🐼 度。

2. 制 🦄 备悬浮培养 🐞 基：

将无血清培养基和阿格尼胶囊溶液 🐬 按比例混合，制 🍀 成悬浮培养基。

3. 培 🦆 养干细 🐒 胞 🐅 ：

将干 ☘ 细胞悬浮于悬 🐒 浮培养基中，以 15 x 10^6 个细胞 🌹 /毫升的密度。

将干细胞 🌼 培养液转移到无血清 🐯 培养瓶或 🐎 培养皿中。

使用搅拌器或生物反应器 🦉 ，以适当的速度搅 🐡 拌 🦁 培养液（通常为 100200 rpm）。

4. 培 🌷 养 🐟 条 🌷 件：

将干细胞在 37°C、5% CO2 氛围下培养 🌻 。

每 23 天更换 🐵 培养基 💮 一次 🦉 。

5. 细胞 🍀 传 🌷 代：

当干 🐵 细胞达到对数生长期（通常需要 37 天）时，可 🐼 以用无血清培养基进行传代。

收集细胞，用 🐱 PBS 缓，冲液洗涤并按比例重新悬浮在悬浮培养基中。

注 🕊 意事 🐵 项 🕷 ：

不同类型的干细胞可能需要不同 🐟 的阿格 🐋 尼胶 🌿 囊浓度和培养条件。

定期监测细胞生长和 🐶 活力，并根据需要进行培养基补充或 🐘 传代 🌻 。

悬浮培 🕸 养干细胞是一种无支架培养方法，可促 🐋 进细胞 🦄 增殖和分化。