胚胎干细胞分离纯化（胚胎干细胞的 🕊 分离基本步骤）
- 作者: 王希柠
- 来源: 投稿
- 2025-09-23
1、胚胎干细胞分离 🦆 纯 💮 化
胚胎干细胞分 🐒 离纯 🕸 化 🦆
胚胎干细 🦉 胞（ESC）是分离自胚胎 🌺 内部细胞团（ICM）的多能干细胞。ESC 具有自我更新和分 🕸 化为所有胚层细胞的能力，在。生物医学和再生医学领域具有广阔的应用前景从 ICM 中分离纯化 ESC 至，关重要以确保获得高质量、无。污染的细胞用于研究和治疗
分离方法1. 免疫 🐞 磁珠分选
利用 ESC 表面特 🦊 异 🦟 性抗原（如 SSEA1）与 🕸 免疫磁珠结合。
含有 ESC 的细胞与免疫磁珠孵育 🌳 ，然后通过磁力 🦟 柱分离。
磁 🐛 力 💐 柱保留 ESC，同时清除其他 🌹 细胞。
2. FACS 分 🐋 选 🕸
使用荧 🦍 光抗体针对 ESC 特异性抗原（如 Oct4 和 Nanog）。
含有 ESC 的细胞与抗体孵育，然后通 🦟 过荧光激活细胞分选（FACS）进行分选。
FACS 分 🦊 选出 ESC，同时清除其他细 🦉 胞。
3. 透射显微 🌳 镜手 🐦 动分选
在透射显微镜下 🐺 ，手动识别 🦆 ICM 中的 ESC。
使用显微操纵器，小心地将 ESC 从 ICM 中吸出 🕸 。
纯化方法1. 次 🐕 级培养
将 🐼 分离 🌷 出的 ESC 在 ESC 特异性培养基中培养。
ESC 会 🌹 ESC 形 🦁 成具有 🌸 特征的紧凑菌落。
通过移液将 ESC 菌落转移 🌻 到新的培养皿中，并去除其他细胞。
2. Feeder 细胞共 🦢 培养
将 ESC 与不 🐘 灭的 Feeder 细胞一起共培养。
Feeder 细胞会提供支持因 🍀 子，促进 ESC 生存和增殖。
通过定期更换 Feeder 细胞，可以 🌷 去除杂质细胞。
3. 单 🐯 细 🐘 胞克 🐴 隆化
将单个 ESC 克隆到新的培养 🐯 皿中。
ESC 会增殖并形成新的 🌿 菌落。
每个克隆都可以 🌺 分离出具有均质表型 🌲 和功能的 ESC。
质量控制表面标记物表达：通过流式细胞术分析 SSEA1、Oct4 和 Nanog 等 ESC 特异性表型标记物的 🦆 表达。
多能性：通过体外分化为外胚层、中胚层和内胚层细胞来评估 ESC 的 🐎 多 🐅 能性。
染色体稳定性：通过核型分析或短串联重复序列分析 🍁 （STR）检测染色体 ESC 的正 🍀 常性。
应用分离纯化的 ESC 可 🌴 用于广泛的应用，包括：
基 🌺 础生物学 🌺 研 🦈 究
再生医学和组织 🐎 工 🦈 程
疾病建模和 🌴 药物筛选 🕸
基 💮 因 🌾 编辑和干细 🐼 胞治疗
2、胚 🌿 胎干细胞的分离基本步 🕸 骤
胚胎 🕷 干细 🦁 胞的分 🐟 离基本步骤：
1. 绝经前的 🌲 女性提 🦢 供 💮 卵子：
使用激素刺激卵 🌸 巢产生多个卵泡 🕷 。
将卵子从卵泡中取出，通 🌺 常使用经阴道超声引导下吸卵术。
2. 体外 🐕 受 🌳 精 🐴 （IVF）：
收集到的卵子与 🐺 来自男性伴侣或供 🐈 体的精子进行结合。
受精 🌳 卵在 🐛 培养液中培养成胚胎。
3. 胚 🪴 泡形成：
胚胎在培养液中发育 56 天，形成由称 🐈 为滋养细胞层的外部细胞和称为内细胞团的内部细胞组 🐦 成的胚 🌷 泡。
4. 内 🐶 细胞团 🐼 分 🌾 离：
将内细胞团 🦊 从胚泡的滋养层中小心分离出 🐳 来。
内细胞 🐛 团就是胚 🐋 胎干细胞的来源。
5. 培养 🦉 和 🌹 扩增：
将内细 🐦 胞 🦟 团 🍀 转移到培养基中培养基，富含促进胚胎干细胞生长的因子。
胚胎干细胞在培养基中增殖，形 🐒 成称为胚 🍁 胎干细胞 🐳 系的细胞系。
6. 验证 🐘 ：
对胚胎干细胞系 ☘ 进行表征，以，确认其 🐝 表达胚胎干细胞特异性标志物如 Oct4、Sox2 和 Nanog。
评估细 🐺 胞的增 🦍 殖 🍁 和分化潜力。
7. 保 🦁 存 💮 ：
一旦胚胎干细胞系得到 🦢 证实，它，们通常会被冷冻保存以便将来使用。
3、胚胎干细胞分离纯 🐟 化的过程
胚胎 🪴 干 🐛 细 🐘 胞分离纯化的过程
1. 获取 🦢 胚 🦆 胎
从 ☘ 非生育夫妇的受精 🌾 卵中获取。
2. 胚 🌴 胎 🕷 培养 🌷
将 🐅 受精卵在 🐧 培养基中 🐞 培养 57 天，形成囊胚。
3. 内细胞团分 🦆 离
从 🐝 囊 🌾 胚中取出内 🕸 部细胞团（ICM），它是胚胎干细胞的来源。
4. 酶 🐛 消 ☘ 化
使用胰蛋白酶和其他酶将 ICM 分解成单细 🐦 胞 🐳 悬液。
5. 免疫磁珠 🌹 筛 🐝 选 🐯
使 🌼 用 🦄 靶向特定表面标记（例如 SSEA4）的免疫磁珠分离胚胎干细胞。
细胞 🦢 与磁珠结合，然后通过磁场分离出来。
6. 培养 🐈 和扩增
将纯化的细胞转移到培养基中，添 🐋 加生 🌹 长因子和细胞 🦈 因子。
细胞在 🌷 无血清培养基中增殖，形成胚胎干细胞系。
7. 克隆 💮 筛选
将细胞稀释并 🌷 转移到培养皿中，形成单个克隆。
筛选克 🌸 隆以获得未分化的胚胎干细胞 🐦 （即表达 Oct4、SSEA4 和 Nanog）。
8. 纯化 🌲
使用流式细胞术或免疫荧光 🌸 筛选进一步 🐟 纯化胚胎干细胞。
基于表面标记 🐡 或基因表达分离特定 🐺 的亚群。
纯化的胚 🦆 胎干细胞的特 🐛 点：
未分化，具 🐴 有无限增殖的潜力
能够分化为各种细胞类型 🌵 ，包括神经元、心脏细胞和胰腺细胞
对于干细胞研究和再生医学具 🦋 有巨大的 🌿 潜力
4、胚胎干细胞分离纯 🐒 化方法
胚胎干 🐘 细胞分离纯化方 🐳 法
1. 机 🌼 械分 🕊 离 🦆
离散法：利用 🌷 胰蛋白酶或其他酶将胚胎团块解离成单个细胞。
悬浮法：轻柔地振 🌺 荡或沉降胚胎团块，使内部细胞排 🪴 出 🐺 。
2. 免疫 🌳 亲和 🐛 分离
抗体标记法：使用特 💮 异性抗体标 🌺 记胚胎干细胞表面标志物，然后通过免疫磁珠分离。
流式细胞术：使 🐠 用荧光标记的抗体在流式细胞仪中分离带有特定标志物的细胞。
3. 基于培 🐱 养基的筛选
LIF依赖性筛选：胚胎干细胞在白血 🐦 病抑制因子 🐬 (LIF) 的存在下生长，而其他细胞则死亡。
特定培养基筛选：使用专门配制的培养基培养胚胎干细胞 🦈 ，抑制其 🐅 他细胞的生长。
4. 细 🌹 胞系选择 🦅 方法
耐药性筛 🍀 选：将胚胎干细 🐺 胞暴露于抗生素或 🌺 其他选择剂，从而杀死其他细胞。
转化基因筛选：将记者基因（如绿色荧光蛋白转）染到胚 🦅 胎干细胞中，然后根据表达该基因筛选细胞。
5. 其他 🪴 方 🦆 法
FACS筛选：使用荧光激活细胞分选 (FACS) 来分离 🐦 基于大小、密度或其他物理特征的细胞。
微流体分 🐴 离 🐬 ：利用微 🐶 流体设备通过物理或化学性质来分离细胞。
分离纯化 🍀 胚胎干细胞的 🍁 步骤：
1. 从 🐎 胚 🐵 胎中分离胚胎团 🕷 块。
2. 使用机械分离 🐵 或酶解解 🐝 离 🕊 团块。
3. 应用 🐶 免疫亲 🐡 和分离、基 🦢 于培养基的筛选或其他方法来纯化胚胎干细胞。
4. 培养和 🦄 扩大分离出的胚胎 🐦 干细 🐧 胞系。
注意：选择适当的分 🐵 离纯化方法取决于研究目的和可用资源。
