胚胎干细胞在哪培养(胚胎干细胞培养 🐛 需要的 🐒 条件有哪些)
- 作者: 王晚澄
- 来源: 投稿
- 2025-08-22
1、胚胎干细 🐋 胞在哪培养
胚胎干细胞通常在“培养基”中培养,这 🌴 ,是专门配制的液体含有维持细胞存活和增 🦟 殖所需的营养物质和其他成分胚胎干细胞的培养基通常含有。以下成分:
无血清培养 🦊 基:不含动物血清,以避免污染和免疫反应。
生长 🦆 因子:促进细胞增殖和存活。例如,基本成纤维细胞 🌴 生长因子(bFGF)或表皮生长因子(EGF)。
抗生素 🍀 :防止细菌或真菌污染。
β巯基乙 🕸 醇:抗氧化剂,保护细 🐧 胞免受氧化损伤 🍁 。
非必需氨基 🐘 酸 🦆 :支持 🌴 细胞代谢。
缓冲液:维持 🦟 pH 值 🐟 。
无机盐:提供细胞所需的基 🦟 本离子。
胚胎干细胞通常在培养皿或培养瓶中培养培养皿或培养瓶,的,表,面涂有基质例如明胶或胶原 🦉 蛋白以促进细胞附着和生长培养基。每,隔。几天更换一次以提供新鲜的营养物并去除代谢废物
2、胚胎干细胞培养 🐘 需要的 🕷 条件有哪些
胚胎 🐦 干细胞 🐼 (ESC)培养的必要条件 🌳 :
1. 无 🌾 血清培养 🦆 基:
含有 🦢 必需的生长因子和营养物质(例如,LIF、FGF2、B27补充剂)
避免使用血清,因为它会抑制 ESC 的增殖和分化 🐕 。
2. 适当 🐱 的基质 🦁 :
托盘或培养皿经过与基质蛋白(例 🦆 如,明胶、层粘连蛋白 🌷 、iMatrix511)包 🐕 被
提 🦅 供细胞附着和生长所需的结构支 🌻 撑。
3. 适当 🐺 的气 🐟 氛:
潮湿的孵育器 🍁 中,环境氧气浓 🌷 度低(5% 或更低)
高氧气浓度 🍁 会导致氧化应激和 ESC 分化 🌾 。
4. 培 🦉 养温 🌹 度:
37°C
稳定的温 💐 度对于的 ESC 存活和生长至关重 🕸 要。
5. 喂 🕷 养和传 🦆 代:
定 🌼 期喂养新 🐼 鲜的培养基(每隔 12 天)
当 ESC 达到 🍀 约 7080% 的汇合度 🦅 时进行传 🐳 代
使用无 🕷 蛋白酶 EDTA 溶液进行传代
其他 🌻 考虑 🦉 因素:
6. 细 🕷 胞形 🦉 态监测 🦉 :
ESC 应具有特 🍁 征性的 🐒 圆形且紧密生长的群体形态。
细胞 🐬 形态的变化可能是污染或差异化的征兆。
7. 定 🐺 期 🦅 测 🐒 试:
定期进 🕸 行 💐 菌株测试以 🐒 排除污染。
进行分化标记检测以监 🐅 测 ESC 的多能性 💐 。
8. 传代 🌷 次 🐵 数 🐳 :
经过多次 🌸 传代 🍀 后 🦢 ,ESC 可能会失去其多能性。
建议定期从原始株重新建立 🕸 培养物。
.jpg)
3、胚胎干细胞怎么提取出来 🦄 的 🕷
胚胎干细 🦢 胞提 🐈 取步骤
1. 取卵:从女性供体中取出成熟 🪴 的卵细胞。
2. 体外受精:在实验室中将 🐟 卵细胞与精子进行体外受精,形成受 🌷 精卵。
3. 胚胎培养:将受精卵培养 56 天,形成 🌸 胚泡胚泡。是,一。个空心的 🐛 球体包 💮 含一个内部细胞团
4. 内细胞团分离:使用显微操作 🌳 技术将胚泡内的内部细胞团从滋养层细胞中分离出来。
5. 培养成干细胞系:将内细胞团在特定培养基和生长因子中培养,形成 🦋 胚胎干细胞系。这 🐡 。些干细胞具有自我更 🦟 新和分化为多种细胞类型的潜力
提取过 🐝 程中需要注意的事项:
胚 🐶 胎干细胞是从胚胎中提取的,因此存在伦理方面的考虑。
提取过程需要专 🐠 业的技术和设施 🌼 。
胚胎干细胞系必须通过质量控制测试 🦅 ,以确保其特性 🕊 是稳定的。
胚胎干细胞的培养和 🐞 分化需 🐧 要特殊的技术和条件。
4、培养胚胎干细胞的条件 🌷
培 🌻 养胚胎干细胞的条件
基质:马特里 🐛 凝 🐟 胶 🐝
费 🕸 伯朗凝 🐼 胶 🐈
I型胶原蛋 🦅 白 🐠
培养基:基 🐈 础 🌺 培养基培养基:DMEM/F12
生长因子 🦁 :
人类基本成纤维细胞生长 🌻 因子 🐬 (bFGF) 或小鼠白血病抑 🌼 制因子 (LIF)
表 🐘 皮生长因 🐼 子 (EGF)
血清:小 💐 牛血清或 🌴 胚胎牛血清 (FBS)
非必需氨基 🐠 酸、谷氨酰胺和抗生素
环 🐶 境条 🐳 件 🦉 :
温 🐎 度 🐋 :37°C
湿 🌸 度:95%
二氧化 🦄 碳 🐎 浓 🐴 度:5%
黑暗环境:胚胎干细胞 🦟 对光敏感
其他 🍁 要 🌼 求:
细胞 🌳 密度 🐎 :通常为 510 x 10^4 个细胞/mL
培养容器:组织培养板 🐺 或培养瓶,表面 🍀 涂有基 🐅 质
培养周 🌹 期:每 34 天更换培养基和喂养细 🐠 胞 🐘
分裂:胚胎干细胞是多能干 🐡 细胞,可以在适当的条 🐛 件下 💐 无限分裂
分化:向特 🍁 定细胞类型分化需要适 🕷 当的诱导因子