液氮罐如何保存 🐳 干细胞（使用液氮罐进行细胞冷冻时应注意哪些问题）
- 作者: 郭闻中
- 来源: 投稿
- 2025-08-15
1、液氮罐如何 🐅 保 🐵 存干细胞
液 🌿 氮罐保 🐧 存干细胞的方法
材料：液氮罐
液氮
干细 🐒 胞悬液
无菌小瓶或吸 🌸 管
封口机步骤：
1. 准备干细胞悬液：将干 🌴 细胞从培 🌵 养基中收集并 🐬 洗涤。用含保护剂（如二甲基亚砜或牛血清白蛋白）的培养基。重悬干细胞
2. 装瓶或装吸管：将干细胞 🦊 悬液分配到无菌小瓶或吸管中。确保小瓶或吸管容量不 🐳 会超过其最大容积的 80%。
3. 密封：使用封 🐒 口机密封小瓶或 🐞 吸 🐞 管。
4. 逐步冷却：将密封的小瓶或吸管放入一个装有异丙醇和干冰的容器中，以使细胞逐渐冷却至 80°C。此过程通常 🌼 需要小 12 时。
5. 转移到液氮 🦊 罐：将冷却至 80°C 的小瓶或吸管转 🌸 移到装有液氮的液氮罐中。
6. 标注和记录：在小瓶或吸管上清晰地标注干细胞信息，包括类型、来、源日期和任何其他相关信息记录 🌼 。保。存日期和位置
注 🕷 意事 🦆 项 🪴 ：
液氮罐应定期补充液氮，以确保细胞始终浸没在液氮中 🐈 。
每次打开液氮罐时 🍀 ，应佩戴适当的个人防护装 🐦 备（例如手套护、目镜和实验服）。
液氮极冷且有挥发性，应 🦢 对其进行安 🐴 全处理。
在取出细胞之前，应使 🐬 细胞 🌼 逐渐升温 🐦 至室温。
2、使用液氮罐进行细胞冷冻时应注 🐘 意哪些 🦈 问题
使用液氮罐进 🌵 行细胞冷 💮 冻时的注意事项：
1. 安全 🐯 性：
穿戴适当的个人防护装备，包 🍀 括手套 🌼 护、目镜和实 🐧 验服。
始终在通风良好的 🐬 区域操 🦁 作。
液氮是极冷 ☘ 的 (196°C)，接触会 🐘 造成严重的 🌸 冻伤。
2. 液氮 🪴 处理 🐘 ：
仅从合格供 🌳 应商处获 🕸 取液 🐵 氮。
始终使用 🐳 专用的液 🐎 氮容器 🌾 。
缓 🦋 慢向容 🐞 器 🦢 中添加液氮，避免溅出。
不 🐛 要将 🌷 液体或固体物质放入液氮 🍀 中。
避免使 🦋 用超过罐容积 75% 的 🐧 液 🕊 氮。
3. 细 🐝 胞准备 🐒 ：
冷冻前准备好细胞悬液 🦉 ，使用适当的冷冻 🐎 介质。
缓慢冷却细胞，以 🕸 每分钟 🌸 1°C 的 🦍 速度。
彻底混合 🌵 冷冻 🐱 介质以防 🐋 止冰晶形成。
4. 冷冻方 🍁 法 🦍 ：
使用经验证 🦢 的冷冻方案，并针对特定细胞类 🐴 型进行优 🌸 化。
将细胞悬液保存在液氮中，或使用受控速率冷冻机 💐 进行低温缓慢冷却。
冷冻后，将细胞迅速转移至液氮罐 🐘 中。
5. 液氮 ☘ 罐 🐕 维护 🍁 ：
定期检查罐子的液氮水 🌹 平。
根据制造商的 🕷 说明更换或补 🌼 充液 🌸 氮。
定 💮 期清洁和消毒罐子 🌻 。
每隔几年对罐子进行压力测 ☘ 试和 🐡 安全检 🌷 查。
6. 解 🐺 冻 🌿 ：
将冷 🐱 冻细胞快速解冻至 37°C，使 🐠 用温水浴或解冻介质。
缓慢稀释冷冻介 🐴 质，以防止 🐟 渗透损 ☘ 伤。
将解冻细胞转 🦆 移至 🌷 新鲜培养 💐 基中。
7. 冷 🌷 冻记录：
记录冷冻日期、细、胞类型 🐋 冷 🐧 冻介质和冷 🌻 冻方案。
保留所有相关信息以便 🐒 将 🪴 来参 🐼 考。
8. 额 🐟 外 💐 提示 🌷 ：
监测液氮罐的液位并定期 🐬 补充。
妥善处理废弃的 🦉 液氮 🦄 。
在液氮 🐡 罐附近张 🐵 贴安全警示牌。
定期接受液氮罐 🌲 操 🐞 作培训。
3、液氮罐拿出来的细胞能放多久 🐛
在合适的储存条件下，从液氮罐中取 🦉 出的细胞能存活以下时长：
室温：几分钟至几小时 🦊 ，具体 🐕 取 🐒 决于细胞类型
4°C 冰 ☘ 箱：数小 🐴 时至几 🌼 天
20°C 冰箱：几个月 🦊 至一年
80°C 冰箱：一 🍁 年至 🐋 数年
液氮罐（196°C）：理论上无限期，但实际储存时间可能取决于细胞类型的稳定性和储存 🌺 方法
需要注意 🐞 的是，从，液氮罐取出细胞后需逐步解冻以避免细胞损伤。具 🦟 。体解冻方法因细胞类型而异
4、一 ☘ 个液氮罐 🐬 能放多少份干细胞
液氮罐储存干 🌸 细胞的容量因罐的大小和储 🐈 存方式而异。一般来说 🦉 ：
单个液氮杆 🌿 ：可容纳约 200500 份干细胞 💐 ，每份约为 12 毫升。
大型 🐴 液氮罐：可容纳数千份干细胞，每份容量 🕸 大于 2 毫升。
储存方式 🦊 也 🐧 会影响容量：
管式储 🕸 存：将干细胞样本装在长而细的塑料管（称为吸管）中，插入液氮罐中垂直排列。这，可。以节省空间但样本提取需要特殊设备
瓶式储存：将干细胞样本装在小 🐟 瓶中，水平放置在液氮罐中。这，便。于样本处理 🦋 但需要更多 🦈 的空间
因此，液 🐯 氮罐的干细胞储存容量范围为 200 至 🐈 ，数千份具体取决于罐的大小和储 🕸 存方式。
