🐘 干细胞培养无菌操作（干细胞培养无 🐦 菌操作方法）
- 作者: 张景洲
- 来源: 投稿
- 2025-06-19
1、干细胞培养 🐴 无菌操作
干细胞培养无菌操作 💮
目的：防止培养物受到微生物 🕸 污染
维护细胞的 🦢 健康 🦄 和活 🌾 力
确保研 🐞 究结果 🐶 的可靠性 🦊
材料和 🌾 设 🌵 备：
无 🐈 菌工作区（层 💐 流罩）
无菌培养基和培 ☘ 养 🐼 液
无菌耗材（培养 🦍 皿、移、液管 🪴 培养瓶等）
无菌工具（镊 🌸 子、剪、刀细胞刮刀）
生物安全 🐱 柜 🌷
70% 乙 🦋 醇
手术口 🌹 罩
无 🐟 菌手套
消毒 🦆 剂（次氯酸钠、过氧化氢等）
步骤：准备：
在无菌工 🌵 作区内进行所有操作。
穿戴无菌手套手、术 🐟 口罩和必要时穿戴防护服。
对无菌工作区进行紫外线消毒 15 分 🦉 钟。
用 70% 乙醇对所有无菌耗 🐵 材 🌷 和工具表面进行消 🐒 毒。
接种：用 💐 无菌移液管将无菌培养基转移到无菌培养 🐛 皿或培养瓶中。
用无菌细胞刮刀从 🐝 培养 🐧 瓶中收 💮 集细胞悬液。
将细胞悬液 🐴 转移到培 🌹 养基中，轻轻混匀。
将培养皿或 🐧 培养瓶 🕊 放置在无菌工作区 🐼 内 37°C、5% CO2 的培养箱中。
换 🐬 液和传 🐼 代 💮 ：
每 23 天换一次培养液，以去除代谢废物 🐈 和补充营 🦉 养物质。
用无菌 🐝 移液管吸出培养液，加入等量的无菌 🐋 新鲜培养液 🌷 。
当细胞长 🐛 满 8090% 时进行传代。
用无菌细胞刮 🌹 刀 🕷 将细胞从培养皿或培养瓶中收集 🌸 下来。
将 🦆 细胞悬液转移到新的培养 🌺 基中，轻轻混 🦈 匀。
将细胞悬液接种到新的 🌲 培 🪴 养皿或培 🐶 养瓶中。
监测和质量 🐴 控 🦄 制：
定期监测培养物是 🐈 否有污染迹象，例如浑浊、变色或异味。
在接种后 2448 小时内检查培养物，以检 🍀 测是否存在细菌或真菌污染。
定期培养无菌培养基作为对照，以确 🕸 保无菌操作的有 💐 效性。
注 🐟 意 🐘 事项：
始终保持无 🍁 菌工作区的无菌性。
避免说话、呼吸或咳嗽在无 🐠 菌工作区内。
在 🐱 执行任何操作之前和 🕷 之后，用 70% 乙 🐡 醇对双手进行消毒。
定期消毒无菌工作区和 🐯 设备。
妥善处理 💐 受污染的培养 🐠 物。
2、干细胞培 🐘 养无菌操作方法 🐝
干细胞培养无菌操作 🦉 方法
材料：无 🌷 菌工 🐼 作台
酒 🦢 精灯或 🕊 本生灯
灭 🦟 菌过 🌲 的培养皿
细胞培养液 🦉
移液枪和枪头 🌴
灭菌过的移 🐎 液 🍁 管
培养基抗生素
防护服（一次性手套、口、罩护目 🌹 镜 🐦 ）
步骤：准备：
1. 穿 🐞 戴 🦁 个人防护服。
2. 在无菌工作 🐘 台中点燃酒精灯或本生灯。
3. 将所有材 🐵 料放置在 🌵 无菌工 🐕 作台中。
培养基制 🐳 备：
1. 在无菌工作 🌲 台中，将细胞培养基转移到灭 🕊 菌过的培养皿中。
2. 向培养基中加 🌷 入抗生素溶液。
3. 轻 🕸 柔地摇晃培 🌼 养皿，以混合液体。
细 🕊 胞 🦢 接 🐅 种：
1. 用酒精擦拭移液枪 🕸 和枪头，然后在酒精灯或本生 🐝 灯上方灼烧。
2. 从灭菌过的移液管中吸取干细胞悬液 🌳 。
3. 将干细胞悬液移入培养 🐳 皿中的细胞 🕊 培养基中。
4. 轻柔地摇 🌴 晃培养皿，以混匀细胞。
培养条 🕷 件 🦈 ：
1. 将培 🐕 养皿置于适当的培养箱中。
2. 设置培养温度、二氧化碳浓度和湿 🐋 度。
无 🌻 菌操作 🌼 技巧 🐘 ：
始 🐳 终在无 🐕 菌工作台中操作。
保 🌷 持 🦈 双手 🐡 消毒。
所有 🪴 材料 🦄 必 🌵 须灭菌。
动 🦆 作轻 🐧 柔，避免溅 🦅 出液体。
使用无菌移液 🐬 枪 🦋 和枪 🐞 头。
避免接 🌿 触培 🦢 养 🌺 皿边缘。
完成操作后 🌺 ，用酒精擦拭所有材料。
注 🌺 意 🐋 事项 🌺 ：
任 🍀 何 🐱 时候都不要将培养 🌲 皿暴露在无菌工作台外。
如果培养遭到 🌵 污染，立即丢弃所有培养物。
定期清洁和消毒无菌工作 🍀 台。
遵循良好的实验室操 🐯 作规范（GLP）。
3、干细胞培养无菌操作 🕸 流程
干细胞 🐼 培 🐦 养无菌 🌻 操作流程
材料准 💮 备 🐡 ：
干细胞 🌵 培养基（不含抗生素）
抗生素移液管 🌾 、枪头
培养 🌴 板 🌿 培养、瓶 🍁
无菌 🐧 级流罩
70% 酒精 🕸
不织 🐟 布 🐋 （无菌）
手套 🌻 （无菌）
操作 💐 步 🦍 骤 🌸 ：
1. 准备 🦄 工 🐅 作区 🐧 ：
用 70% 酒 🐛 精擦拭工 💮 作区。
打开无菌级 🐼 流罩 🐎 ，将所有材料放在工 ☘ 作区内。
2. 穿戴无 🐶 菌手套 🐶 ：
从包装 🐵 中取出无菌手套 🕊 ，轻轻将其戴 🐞 上。
3. 加入 🐟 抗 🐅 生 🍀 素：
使用无菌移液管将 🍁 抗生素加入培养基 🌿 中，按照制造商的说明进行 🪴 操作。
轻轻混匀培养 🌾 基，确保抗生素完全溶 🦈 解。
4. 分 🌷 配 🐎 培养基 🐟 ：
使用无菌移液管将培养基分配到 🐞 培养板或 🦁 培养瓶中。
避免产生 💮 气 🌴 泡 🌻 。
5. 培养 🦄 细 🕷 胞：
使用无菌移液管将干细胞悬液小心地转移 🐟 到培 🌴 养基中。
轻柔地混 🕊 匀，以确保细胞均匀 🐋 分布。
6. 密封容器 🐝 ：
用 🐠 无菌不织布松 🪴 散地覆盖培养容器。
不要 🐬 密 🦅 封太紧，以免 🦊 产生压强。
7. 培 🦆 养 🦆 细胞 🐛 ：
将培养容 🐞 器放入培养箱中，在合适的温度和 CO2 浓度下培养。
8. 培 🐡 养 🐘 基更 🐕 换：
每隔几天，使用无菌操作更换培养基 🍁 。
将旧培养基吸出，并用 🦆 新的培养基补充。
注意：整个过 🌴 程中保持无菌环境至关重要。
所有操作应在无 🐧 菌级流罩内进行 🦋 。
定 🦁 期清洁工作区和设备。
谨慎使用移液管，避免 💐 产 🐦 生气泡。
避免接触 🌼 培养物，以防止污 🌸 染。
4、干细胞培养需 🌵 要多长时间
干细胞培养所 🌲 需时间取决 🐘 于干细胞类型培养、方法和研究 🐕 目标。
胚胎干 🐞 细胞 💐 (ESC)
常 🍀 规 🐒 培养：710 天 🌵
分化：根据分化类型 🌲 和方 🐧 法，可能 🌸 需要额外的数周到几个月
诱 🦢 导多能干细 🌹 胞 🐝 (iPSC)
重 🐝 编程：24 周
常规 🦉 培 🌵 养：710 天 🦢
分 🦉 化：根据分化类型和方法，可能需要额 🐠 外的数 🐠 周到几个月
间充质干细 🦟 胞 (MSC)
初代培养 🐠 ：23 周
传代 🐛 培养 🐈 ：710 天 🪴
分化：根据分化类型和方 🍀 法，可能需要 🐎 额外的数周到几个月
造 🦋 血干细 🐞 胞 (HSC)
初代培 🌴 养：12 周
传 🌷 代培 🐺 养 🪴 ：710 天
分化：可 🐕 能需 🦈 要几个月或几年才能产生完全成熟的血细胞
其他影响因 🍀 素：
培养基组成：不同的培 🐟 养基可能影响细胞生长和分 🐧 化速率。
培养条件：温度、湿度和气 🕸 体混合物等因素会影响细胞培养。
细胞密度：高密度培养可能 🐳 导致生长受 🌴 限和分化 🌷 。
传代 🐞 次数：随着传代次数的增加，细，胞可 🦊 能会发生变化影响 🌿 其培养行为。
总体而言，干，细胞培养 🐒 所需时间可以从几周到几个月不等具体取决于细胞类型和研究需求。
