大鼠 🦁 脂肪干细胞细胞分化（大 🦋 鼠脂肪间充质干细胞提取）
- 作者: 张婉若
- 来源: 投稿
- 2025-05-20
1、大 🐱 鼠脂肪 💐 干细胞细胞分化
大鼠脂肪干细胞的分 🐱 化
大鼠脂肪干细胞 (ADSCs) 是一 🦅 类多能干细胞，存在于大鼠脂肪组织中 🕊 。它，们具有分化为多种细胞类型的潜力包括：
脂肪 🐳 细 🐼 胞（成脂细胞）：
ADSCs 的主要分化谱 🪴 系。
暴露于促脂肪 ☘ 生成因子（如胰岛素和脂肪酸）后，会分化为脂 🐟 肪细胞。
软骨 🌳 细 🐋 胞 🐺 ：
可以通过转化生长因子 (TGF) β 处理诱导 ADSCs 分化 🌻 为软 🌷 骨细胞 🦁 。
具有生成软骨基质和透明 🐛 软骨的能力。
成骨 🌴 细 🐛 胞：
骨形态发生蛋白 💮 (BMP) 和维生素 D3 等 🐶 因子可以将 🌹 ADSCs 诱导为成骨细胞。
产 🌸 生钙化骨基质并形成矿化骨组织。
肌细胞：在特定生长的因子混合物的诱导下 🐱 ，ADSCs 可以分化为肌细胞。
具有收 🐼 缩 🌼 和放松的能力 🐳 。
神经元：神经生长因子 (NGF) 和脑源性神经 💐 营养因子 (BDNF) 等因子可诱导 ADSCs 分化为神经元样细胞。
具有神经元样形态和功 🐋 能 🦊 。
内 🐡 皮 🌳 细 🐯 胞：
血管内皮生长 🌾 因子 (VEGF) 和基本 🌲 成纤维细胞生长因子 (bFGF) 可以促进 ADSCs 向内皮细胞分化。
形成管 🌾 状结构 🦟 并表达内皮细胞标记物。
机制：ADSCs 分 🌴 化的机制涉及 🌺 多种 🐵 信号通路和转录因子。关键调节因子包括：
白细 🐬 胞介素 (IL) 10 和 🐟 IL6
雌激素受 🐘 体 🐅
过氧化物酶 🐳 体 🐳 增殖物激活受体 (PPAR)
视黄酸受 💐 体
应用：ADSCs 的多能性使其成为再生医学和组织工程的潜在候选者。它们已用于治疗 🌼 包括以下 🌿 在内的各种疾病：
心脏病骨骼疾病 🐋
神 🐵 经系统疾 🌾 病 🐺
皮 🐎 肤 🌸 损 🐬 伤
2、大鼠脂肪间充质干 🦅 细胞提取
大鼠脂肪间充质干 🦋 细胞提取
材料：SpragueDawley 大 🕊 鼠 🦅
生 🐝 理盐水 🌷
胶 🐝 原 🌺 酶 IV
培养基（例 🦊 如 DMEM 含 10% FBS）
抗生素（例如青霉素 🌳 链霉素 🐟 ）
离心机组 🐠 织 🐘 培养 🦁 皿
移液管步骤：
1. 大鼠麻醉和脂肪组织提取：将大鼠麻醉，然后 🐠 用生理盐水充分冲洗腹腔。切，开腹腔取出脂肪组织（例如腹部 🐧 脂肪垫）。
2. 酶消化：将脂肪 🐛 组织切成小块，并 🪴 加入含有胶原酶 IV 的培养基。在 37°C 下孵育 60 分，钟。偶尔搅拌
3. 离心和脂肪层去除：将消化物离心 10 分钟，1500 rpm。小心去除。顶部 🌹 的脂 🦁 肪层
4. 细胞收集：将细胞沉淀 🐴 重 🌿 悬于培养基中，并再次离心 10 分钟，1500 rpm。
5. 细胞培养：小心去除上清液，并将细胞 🐝 重悬于新鲜培养基中将 🐅 细胞。接，种。在组织培养皿中并加入抗 ☘ 生素
6. 培养和筛选：在 37°C、5% CO2 条件下培养细 🐺 胞 35 天。根。据细胞贴壁和形态筛选间充质干细胞
鉴定：可以通过免疫表型分析或分化成不同细胞系来鉴定间充质干细胞通 🐝 。常这些细 🐦 胞对 🐶 CD29、CD44 和 CD90 呈阳性，而对和呈 CD34、CD45 阴性 CD11b 。
应用：大鼠脂肪 🐞 间充质干细胞可用于研究各 🌴 种医 🌻 学应用，例如：
组织修复和再 ☘ 生
免疫 🌾 调节 🕸
疾 🐧 病模 🦈 型
干 🐵 细胞 🐒 治疗
3、大 🐡 鼠脂肪干细 🌷 胞原代培养
大鼠 🐴 脂肪 🌷 干细胞原代培养
材料大鼠（健康成年 🦁 SpragueDawley 雄 🐴 性）
无 🪴 菌手术器械
无菌培养皿 🦢 和 🌳 培养瓶
磷 🐘 酸 🐛 盐缓 🐬 冲液（PBS）
胶 🐘 原 🐺 酶 🦋 I
脂溶性 🐴 酶 💐 （如 🦍 脂肪酶）
含抗生素和抗真菌剂的培养基（如 🐘 Dulbecco's Modified Eagle's Medium [DMEM]）
血清（如小牛血 🦊 清）
胰蛋白酶 🐕 EDTA
细 🌵 胞计数 🐦 板
培 🐟 养 🐵 箱 🐼 （37°C，5% CO2）
步骤1. 大 🪴 鼠 🐶 麻醉和 🌸 解剖
给大鼠注射镇静 🦄 剂 🐧 和麻 🌸 醉剂。
对大鼠进行无菌 🐼 剖 🕊 腹，暴露腹腔 🐒 脂肪。
2. 脂肪组 🐼 织收集
切除腹腔脂肪垫，放 🦉 入无菌培养 💐 皿中。
3. 酶 🪴 消化
将脂肪 🦈 组织切成小块 🦉 ，加入胶原酶 I 和脂溶性酶溶液。
在 37°C 孵育 🐋 4560 分钟，每分钟 15 吹打一次 🐘 。
4. 分离脂 🪴 肪干细 🐱 胞
将消 🐯 化后的 🐞 悬液过滤通过过滤 100 μm 器，除去未消化的组织 🦋 。
用含血清的培养基稀释细胞 🐯 悬液 🦊 ，并通过离心沉淀细 🌷 胞。
5. 培 🦅 养 🐧
将 🦊 细胞悬液重悬于含血清的培养基中，接种至培养 🌷 瓶中。
在 37°C、5% CO2 的培养箱中培 🐱 养。
每23天更换 🐒 培 🐶 养基。
6. 建 🍀 株 🐒
当 🐠 细胞达到 🌵 8090% 汇合度时，用胰蛋白酶EDTA 处理并传代。
传代时，将，细胞接种至 🍁 新的培养瓶中并在培养基中添加血清。
7. 表 🌷 征
使用流式 🐅 细胞术分析细胞表面标志物，如 CD34、CD45、CD90 和 CD105，以表征 💮 脂肪干细胞。
进行分化试验，如 🦅 向骨、软，骨和 🐯 脂肪谱系的分化以确认脂 🕷 肪干细胞的多能性。
提示使用 🌻 无菌技术操作。
根据脂肪组织的大小调整酶 🐼 消化时间。
使用新鲜的酶并小心不 🐒 要 💐 消化过度 🐶 。
定期监测培养物 🌵 以确保 🐴 细胞生长和健康状况 🐅 。
4、小鼠脂肪干细胞怎么提 🐅 取
小鼠脂肪干 🐛 细胞提取 🐱 步骤 🪴 ：
材料：小鼠
二乙醚
70% 乙 🐼 醇 🌾
无 🐼 血清培 🐵 养基
胶 🐧 原 🍁 酶 🦅 IV
20% 牛血清白 🐯 蛋白（BSA）
培养基培养瓶或 🐋 孔板 🐦
步骤：1. 麻醉小鼠：给小鼠注射二乙醚 💮 或 🦢 其他合适的麻醉剂。
2. 消毒手 🦁 术区域 🐕 ：用 70% 乙醇擦拭腹部区域。
3. 提取脂肪：在腹部开一个小切口小，心取出 🐝 约 12 克 🌺 脂肪组织。
4. 切碎脂肪 🐵 ：将脂肪组织 🌹 切成 🦊 小块。
5. 酶解：将切碎的脂肪组织加入含有胶原酶的 IV 无血清培养基中将。其置 🐺 于的 37°C 摇床上孵育 4560 分。钟
6. 离心 🌲 ：将酶解混合物以离 🌿 心 1200 x g 分 10 钟。
7. 收集上清：小心吸取上清，因 🐛 为干细胞位于上清 🐒 中。
8. 去除红细胞（可选 🐋 ）：向培养基中加入 20% BSA，然后将上清与 BSA 溶液 🐅 以 1:1 的比例混合将。其置于冰上孵 🐧 育 10 分。钟
9. 再 🐅 次离 🦆 心：以 🐱 离心 1200 x g 分 10 钟。
10. 收集干细胞：小 🐵 心吸取沉淀物，其中包含脂肪干细胞。
11. 洗涤：用培养基洗涤沉淀 🐛 物并离心以 🐈 去除 🐯 残留的 BSA。
12. 重悬：将脂肪干细胞重 🐎 悬在培养 🌹 基中 🦢 。
13. 计数和 🐬 培养计数：干细胞 🌿 并接种到培养瓶或 🌵 孔板中。
提示：使用无菌 🌻 技术进行整个过程。
根 🐘 据小鼠的体重和脂肪量调整酶解和 BSA 溶液的体积。
培养基应含有生长因子 🐛 ，例如 bFGF 或 EGF，以促进脂肪干细胞生长。
培 🐞 养脂肪干细胞需要 37°C、5% CO2 的培养箱。
