干细胞制剂内毒素检测（干细胞内 🌾 毒素检测控制范围是多少啊）
- 作者: 李穆川
- 来源: 投稿
- 2025-08-23
1、干细胞制剂内毒素 🐺 检测
干细胞 🌵 制剂 🐝 内毒素检测 🌺
背景内毒素 🐟 是革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖的成分，在干细胞培养过程中可能存在于培养基和血清中内毒素 🌸 。水 🐳 平升高可能对干细胞的生长分、化和。治疗效果产生不利影响
检测原理内毒素检测基于鲎变形细胞溶解试剂（LAL）的原理。LAL是一种从鲎血中 🐝 提取的试剂，当，与内毒素，接。触。时会发生级联反应释放一种导致鲎变形细胞裂解的物质裂解程度与内毒素浓度成正比
检测方法定 🦉 量法（比浊法）：将样品与LAL试剂混合，在，一定温度 🐴 下孵育然后测量溶液的浊度浊度。越，高。内毒素浓度越高
定性法（凝胶凝固法）：将样品与LAL试剂混合，在，一定，温度下孵育如果出现凝胶表明样 🐅 品中存在内毒素。
检测标准美国药典（USP）和欧洲药 🐕 典（Ph. Eur.）制定 🐋 了以下检测标准：
干细胞制剂：内毒素水平低于 5 EU/ml 或 10 EU/kg 体 🪴 重（取决于 🌷 具体用 🦢 途）
检测步骤1. 取样：从干细胞制剂 🐯 中抽取适 🐈 当体积的样品。
2. 样品稀 🐡 释：根据预期内毒素水平稀释样品，至合适浓度。
3. 加入LAL试剂：将LAL稀释后 🐈 的 🐕 样品与试剂混合。
4. 孵育：在指 🌸 定温度下孵育混合物 🦄 一段时间。
5. 检 🐵 测结 🐬 果 🐝 ：
定量法：测量溶液浊度，通过校准曲线计算内毒 🐎 素浓度。
定性法 🦁 ：观察 🦈 混合物是否出现凝胶 🐳 。
注意事项样品收集和处理过 🐴 程应无 🦁 菌以避免内毒素污染。
LAL试 🌼 剂对热敏感，因此孵 🐘 育 🐱 温度和时间应严格控制。
不同的LAL试剂具有不同的灵敏度，因此在解释结果时应考虑试剂 ☘ 的具体性能。
检 🐟 测结果应结合特定干细胞制 🌷 剂的预 🌿 期用途和临床安全性考虑因素进行综合评估。
2、干细胞内毒素检测控制范 🐞 围是多 🕸 少啊
干细胞内毒素检测控制范围因测试 🍀 方法和使用试剂的不同而异。以下是一些常见的范围：
鲎阿米巴溶解物 🐅 （LAL）法：
阴性 🌻 对 🦆 照 🐛 ： <0.1 EU/mL
阳 💮 性对 🌵 照 🦉 ： 0.51.0 EU/mL
可接受范围： 阴 🐳 性对照 <0.1 EU/mL，阳性对照 0.51.0 EU/mL 之间 🌵
单细胞凝集试剂 🐈 （MCA）法：
阴性对 🐳 照： <0.03 EU/mL
阳性 ☘ 对照 🕷 ： 0.10.3 EU/mL
可接受范围： 阴性对照 🐯 <0.03 EU/mL，阳 🌸 性对照 0.10.3 EU/mL 之 🦈 间
化学发光法 🦅 ：
阴性 🐺 对照： <0.01 EU/mL
阳 🦈 性 🦅 对照 🐈 ： 0.20.5 EU/mL
可接受范围： 阴 🪴 性对 🐕 照 <0.01 EU/mL，阳性对照 0.20.5 EU/mL 之间 🌹
这些范围仅供参考。实。际可接受范围可能因特定 🌸 试剂盒和测试协议而异在制定干细胞内毒素检测程序时，始。终建议遵 🐛 循试剂盒制造商的说明
3、无菌制剂内毒素检测 🦍 标准和正常值
无菌制剂内毒 🐞 素检测标准
注释：对于符合以下 🕷 条件的制剂 🐒 ，不适用于 LAL 试验的定量 🦢 方法：
已知含 🌾 有动物组织/器官衍生物
已知含有其他内 🕸 源 🐈 性热原物质 🕷
正常值对于注射 💐 剂和浸润剂：
欧 🪴 盟药典（EP）： <0.5 EU/mL，对 🐺 于已使用内毒素去除 🌹 剂的制剂为 <2.5 EU/mL
美国 💮 药典（USP）： <0.5 EU/mL
日 🐋 本药典（JP）： <0.25 EU/mL
中国 🌹 药 🌾 典 🦈 （ChP）： <0.25 EU/mL
对于其他制剂，如外用剂 🌷 、吸入 🦆 剂等：
由相关法 🦉 规机构或行业标准确定
4、干 🕊 细胞 🐬 内毒素超标原因分析
干细胞 🐛 内毒素超标原因分 🐯 析 🐘
1. 培养过程污 🐶 染
使用不洁净的 ☘ 培养基和 🌺 试 ☘ 剂
培养环境消毒不 🕸 当 🦈
培 🍁 养容器 🌼 和仪器 🌻 污染
操作人员 🦄 无菌技术不规范
2. 原 🌾 材 🐬 料污 🐅 染
动物血清中内毒素含量高 🍁
组织样本采集和处 🪴 理过程污染
3. 干 🐬 细胞自身因素
干细胞培养 🦟 过程中自 🐬 动产生内毒素
干细胞来自 🐦 内毒素水 🌿 平高的组织
4. 培 🌻 养 🐝 条件不 🐡 当
pH值、温 🐟 度或渗透压不合适
培养基 🍁 中营养物质缺乏或过 🦁 剩
培养密度过 🦈 高 🦋 或过低
5. 储存和运 ☘ 输不当
冷冻保存条件不 🕊 当
运 ☘ 输过程中温度波动或振 🕷 动
6. 仪器 🌻 因 🕊 素
离心 🐯 机 🐶 不平 🌳 衡或速度过大
涡旋仪振 💮 动过大
7. 检测方 🐞 法 🐬 错误 🦟
内毒素检测方法 🐬 不准确或灵敏 🕷 度低 🐅
样本处理和操作不当 🐼
检测 🌹 内毒 🌷 素超 🌲 标的方法
鲎阿米巴溶解试验 (LAL)：最常用和最敏感的 🐶 方法
单细胞凝集试 💮 验 (MCA)
酶联 🌿 免疫吸附试验 (ELISA)
预防措施严格 🐼 遵 🪴 守无菌 🦟 技术
使 🐞 用经 🦋 过质量 🐼 控制的材料
优 🐺 化培养 💮 条 🕸 件
监 🐎 测和控制内毒素水平
妥善储存和运输干细 🐺 胞
定期对仪器 🐼 进行校 🐈 准 🐎 和维护
