蓝莓干细胞培养方 🪴 法（蓝莓干细胞培养方法有哪些）

1、蓝 🐅 莓 🐝 干细胞培养方法

蓝莓干细胞培 🕊 养方法 💮

蓝莓 🐝 浆果

Murashige 和 🐧 Skoog (MS) 培养 🐞 基 🦍

6苄 🐱 基腺 🪴 嘌呤 (BA)

萘乙 🐞 酸 🦁 (NAA)

植物 🦍 琼脂

无菌 💐 培养皿或培 🐛 养瓶

无 🐴 菌手套和 🌴 工作服 🌾

1. 蓝莓 🌻 浆 🦍 果 🐧 消毒

用次氯酸钠溶液 (10% 漂白 🐕 剂) 对蓝莓进行表面 🦢 消毒，持续 510 分钟 🐘 。

用 🌷 无菌水冲洗蓝莓多 🐠 次。

2. 浆果 🌸 破碎

将消毒 🌷 过的蓝莓转移到无菌培养 🐴 皿中。

用无菌研钵和 🦁 研杵将 🐝 浆果压碎成糊状。

3. 外植物 🌻 体培养

将蓝莓糊涂抹在含 MS 培 🦟 养基、BA 和 NAA 的培养基上。

BA 和 NAA 的浓度决定了 🌳 愈伤组织形成和分化的速率。

加入活性炭 🐵 以吸收多余的酚类化合物。

加入琼脂以凝 🕸 固培养基 🕷 。

4. 培 🦢 养 🌸 条 🦟 件

将培养物放置在黑暗或低光 🌻 照条件下，温 🌼 度为 2426°C。

每 23 周将培养物转移到新鲜培 🌳 养基上。

5. 愈伤 🐺 组织形成

在 24 周内，从蓝莓外植体上形 🐳 成 🐅 愈伤组织 🌸 。

愈伤组织是未分化的细胞团，具有再生植物组织的 🐦 能力。

6. 诱导根 🐘 系形成

当愈伤组织足够大时，将 🕷 愈伤组织转 🐬 移到含 NAA 的 MS 培养基上 🌹 。

NAA 促进 💮 根系形 🐼 成 🐼 。

7. 根 🦊 系分化 🦄

在 12 周内，愈伤 🌲 组织上开始形 🐟 成白色根原。

根原进一 🌷 步分化为根系。

8. 植株 🐺 再生 🌸

当根 🦆 系足够发 🐵 达时，将植株转 🌷 移到含生根剂的土壤中。

生根剂 🍀 促进根系的生长和 🌲 发育。

提供适宜的生 🦈 长条件后，植株将开始再生整个植物。

使用无菌技术进行所有 🐠 步骤，以防止 🦋 污染 🐘 。

及时转移培养物，以确保其健 🦟 康生长。

优化培养基 🌳 成分和条件，以提高蓝 🐡 莓干细胞培养的效率。

2、蓝莓干细胞培养方法有哪 🦢 些

蓝莓干 🌳 细胞培养方法

1. 组织培 🐯 养

来 🌿 源： 蓝莓 🦍 果肉

将 🐅 蓝莓果肉 🦆 消毒并切成 🍀 小块。

将 🌺 小块组织接种到富含营养的培养基中，如培养基 MS 。

将培养物置 🐶 于 25°C 的黑暗条件下 🐧 。

每 🌸 23 周更换培养 🦆 基 🌴 。

2. 悬 🌲 浮培 🐡 养 🌳

来源： 蓝莓 🌲 离体愈 🐈 伤组织

从蓝莓组织培养中获 🐈 取愈伤组 🐅 织。

将愈伤组织分散到富 🌷 含激 🌵 素的液态培养基中，如培养 💐 基 B5 。

将培 🐳 养物放入振荡器中，以保持 🌹 细胞悬浮。

每 🐠 710 天 🐈 更换 🌵 培养基。

3. 生 🍁 物反应器培养 🕷

来源： 蓝 🌷 莓悬浮细胞

将 🐬 蓝莓悬浮细胞接种到生物反应器 🦄 中，如气囊式生物反应器 🌴 。

向生物反应器中通 🐬 入氧气和营养物质。

调节 🦋 温 🐶 度、pH 值和搅拌速度以优化细胞生长。

定期收获细 🐋 胞 🪴 并更换培养基。

4. 微 🐘 环 🐝 境培 🌿 养

在培 🦟 养基中添加生物材料，如，胶原蛋白或明胶以创建类似自然组织的微环境 🐟 。

将蓝莓干 🐟 细胞接种到微环境中。

培养细胞并在显微 🌿 镜下监测其 🌼 分化和生长。

使用适当的培养基和激素可以优化蓝莓干 🦢 细胞的生长和增殖。

定期 🌴 监测培养物并根据 🕸 需要进行亚培养。

确保培养条件无菌，以防止 🦢 污染。

蓝莓干 🐯 细胞培养是一个复杂的过程，需要专业知识和设备。

3、蓝莓干细胞培养 🐺 方法 🌸 图片

5. 升温、强氧化阶段（5~8 天）：维持细胞在 37oC、5% 二氧化碳条件下继 🐦 续培养，加，入新 🌸 鲜培养基用高浓度 H2O2 或，甜菜红素处理细胞抑制 NAD(P)H：醌 🌸 氧化，还原酶完全激活酶 SIRT1 。

4、蓝 🦍 莓基质栽培营养液配方 🐳

蓝莓基质栽培营养液配 🦍 方

第 1 周至 🐬 第周 🌼 4

氮 🌷 (N)：50 ppm

磷 🐈 (P)：20 ppm

钾 🌻 (K)：50 ppm

钙 🐋 (Ca)：50 ppm

镁 🌿 (Mg)：20 ppm

硫 🦈 (S)：20 ppm

铁 🌸 (Fe)：2 ppm

锰 🐅 (Mn)：1 ppm

硼 🕸 (B)：0.5 ppm

铜 🐶 (Cu)：0.25 ppm

锌 🦉 (Zn)：0.25 ppm

莫 🐦 (Mb)：0.1 ppm

第 5 周 🕊 至 🌴 第周 8

氮 🌿 (N)：75 ppm

磷 🦆 (P)：30 ppm

钾 🌸 (K)：75 ppm

钙 🐛 (Ca)：75 ppm

镁 🦢 (Mg)：30 ppm

硫 🐘 (S)：30 ppm

铁 🐛 (Fe)：3 ppm

锰 🦍 (Mn)：1.5 ppm

硼 🦋 (B)：1 ppm

铜 🐒 (Cu)：0.5 ppm

锌 🐧 (Zn)：0.5 ppm

莫 🦆 (Mb)：0.2 ppm

第 9 周 🐼 至第周 12

氮 🐞 (N)：100 ppm

磷 🌾 (P)：40 ppm

钾 🌻 (K)：100 ppm

钙 🦉 (Ca)：100 ppm

镁 🐺 (Mg)：40 ppm

硫 🌾 (S)：40 ppm

铁 🕸 (Fe)：4 ppm

锰 🌸 (Mn)：2 ppm

硼 🕷 (B)：1.5 ppm

铜 🐼 (Cu)：0.75 ppm

锌 🐠 (Zn)：0.75 ppm

莫 🦁 (Mb)：0.3 ppm

第 13 周至 🪴 第周 16

氮 🐅 (N)：125 ppm

磷 💮 (P)：50 ppm

钾 🌴 (K)：125 ppm

钙 💐 (Ca)：125 ppm

镁 🦆 (Mg)：50 ppm

硫 🐠 (S)：50 ppm

铁 🌺 (Fe)：5 ppm

锰 💮 (Mn)：2.5 ppm

硼 🐒 (B)：2 ppm

铜 🦉 (Cu)：1 ppm

锌 🐒 (Zn)：1 ppm

莫 🐦 (Mb)：0.4 ppm

第 17 周至第周 🌳 20

氮 🦉 (N)：150 ppm

磷 🍀 (P)：60 ppm

钾 🌲 (K)：150 ppm

钙 🍀 (Ca)：150 ppm

镁 🌹 (Mg)：60 ppm

硫 🐦 (S)：60 ppm

铁 🐬 (Fe)：6 ppm

锰 🌷 (Mn)：3 ppm

硼 🌴 (B)：2.5 ppm

铜 💐 (Cu)：1.25 ppm

锌 🌲 (Zn)：1.25 ppm

莫 🌳 (Mb)：0.5 ppm

pH 值 🌻 ：5.56.5

EC 值 🐦 ：1.52.0 mS/cm

此 ☘ 配方适用于 pH 值为 5.56.5 的基质栽培。

根据基质类型和植物 ☘ 生长阶段，可能需 🐱 要调 🐦 整营养液浓度。

定期监测营养液的 pH 值和值 EC 并根据 🌹 需要 🦁 进 🦅 行调整。